MAPK 信号级联通路参与Alternaria alternata对梨果表皮信号分子的识别与应答

【目的】研究促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路对Alternaria alternata响应梨果皮蜡质疏水性、化学组分及乙烯信号的调控作用.【方法】采用药理学方法,以MAPK信号通路专一性抑制剂SB203580处理A.alternata孢子悬浮液,研究了MAPK在A.alternata致病性中的作用,同时结合体外试验,分析了MAPK信号通路在A.alternata响应疏水性、梨果蜡质提取物和外源乙烯等刺激进而启动后孢子萌发和附着胞形成中的作用.【结果】SB203580处理显著地抑制损伤接种梨果黑斑病的扩展.体外试验表明,外源信号均能显著地诱导A.alternata孢子萌发和附着胞的形成,而SB203580处理显著地抑制了其诱导作用,尤其对A.alternata附着胞形成的抑制更为明显,处理后8 h,抑制剂对A.alternata在高疏水表面、梨果蜡质提取物及外源乙烯等外源信号处理表面的附着胞形成的抑制率分别为22.85%、20.71%和17.61%(P<0.05).【结论】通过药理学方法得知MAPK信号通路可通过调控A.alternata孢子萌发和附着胞形成,进而识别和响应梨果皮物理化学信号.

Egr-1基因上游信号级联通路与肿瘤放射治疗相关的研究进展

转录调控基因Egr-1与细胞的多项生命活动相关,并在肿瘤的发生发展中具有一定作用,现就Egr-1基因上游信号级联及其在肿瘤及肿瘤放射治疗中的意义进行综述。

基于蛋白组学体外分析益母草水煎液对补体和凝血级联通路相关活性因子的作用

旨在通过蛋白组学探索益母草水煎液对人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凝血与抗凝血相关因子表达的调节作用。MTT法筛选益母草水煎液对HDMECs的安全浓度;使用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术分析50和100μg·mL^(-1)益母草水煎液作用24 h后HDMECs蛋白表达谱的变化,通过对比各组蛋白谱的变化筛选出差异显著的相关通路,分析该通路中筛选到的可信差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并选取可信DEPs中与凝血与抗凝血相关的拮抗因子进行RT-PCR和ELISA验证。结果表明:1 mg·mL^(-1)以下益母草水煎液对HDMECs无毒副作用;益母草水煎液能够同时调节与凝血相关的血小板活化等过程和与抗凝血相关的肝素结合过程。对筛选出的补体和凝血级联通路中的5种可信DEPs分析显示,与空白组相比,50μg·mL^(-1)益母草水煎液组凝血酶原(F2)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、凝血因子Ⅴ(F5)和激肽原(KNG)同时显著下调,100μg·mL^(-1)益母草组F2、t-PA、AT-Ⅲ、KNG显著下调;与50μg·mL^(-1)益母草水煎液组相比,100μg·mL^(-1)益母草水煎液组F2、AT-Ⅲ、t-PA、F5和KNG等凝血级联相关因子均显著升高。结果提示,益母草水煎液可显著改变HDMECs蛋白表达谱,并可能通过调控补体和凝血级联通路相关因子F2、AT-Ⅲ、t-PA、F5、KNG蛋白的表达对凝血与抗凝血相关拮抗因子发挥双向调控作用。

基于蛋白组学的脓毒症补体凝血级联通路及标志物KLKB1研究

目的:通过蛋白质组学方法鉴定脓毒症关键通路及诊断标志物。方法:选取2019年1月至12月西南医科大学附属医院急诊科收治的56例脓毒症患者(脓毒症组),另取同期50名健康体检志愿者(对照组)。采用随机抽样法分别选取两组中12名脓毒症患者和8名健康体检志愿者,利用非数据依赖模式(DIA)进行血清蛋白数据采集,将数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白,进一步对这些差异蛋白进行生物信息学分析,包括主成分分析(PCA)、基因本体富集分析(GO)、通路富集分析和蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)分析,进而筛选出脓毒症关键蛋白。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对脓毒症组、对照组进行关键蛋白表达验证分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析关键蛋白对脓毒症的诊断效能。结果:蛋白质组学分析共鉴定出690个蛋白,筛选出171个差异表达蛋白(DEPs),其中39个蛋白显著下调,132个蛋白显著上调。DEPs富集的核心通路为补体和凝血级联通路。该条通路中的血清激肽释放酶1(KLKB1)在脓毒症组的表达水平为(121.80±55.63 ng/mL),显著高于对照组的(68.30±57.11 ng/mL),差异具有统计学意义(t=4.881,P=0.000)。根据ELISA结果进行脓毒症诊断ROC曲线分析得出,KLKB1蛋白诊断脓毒症的AUC(95%CI)为0.759(0.594~0.923)。结论:补体和凝血级联通路为脓毒症免疫途径的重要通路,KLKB1具有较好的脓毒症诊断特性,可能是脓毒症潜在的诊断生物标志物。

城市堤防工程下穿既有高架线路设计方案优化

随着城市化进程不断加快,城市高架线路日益增多,堤防工程下穿既有高架线路情况频繁出现,堤路合一完善交通网络的理念逐步增强,常规的设计方案通常未考虑施工期间对桥下堤顶净空的要求,如何采取措施实现其功能成为设计优化的核心内容。本文结合实例围绕城市堤防工程下穿既有高架线路设计方案优化进行了研究分析,通过增加防浪墙,降低堤防填筑高度,增加联通路等措施对方案进行优化并取得显著效果。

基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响

目的基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响。方法取3月龄SPF级雌雄各半SD大鼠40只,随机分为药物组与蒸馏水组各20只,药物组按2.7 mL/(kg·d)灌服生药量浓度为1.554 g/mL接骨丹药液,蒸馏水组以等剂量蒸馏水灌胃,2组每日早晚各灌胃1次,灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备接骨丹含药血清和空白血清。取2月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓液培养传代至第4代制备骨髓间充质干细胞模型,随机分为空白组、模型组、接骨丹组、抑制剂组,选用细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂对ERK通路进行抑制。空白组采用10%空白血清+α-MEM培养液进行培养;模型组采用10%空白血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养;接骨丹组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液进行培养;抑制剂组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养。4组均培养9 d后分别检测4组碱性磷酸酶(ALP)浓度,采用免疫荧光法测定Ⅰ型胶原(COLI)表达水平,采用qPCR法检测COLI、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4蛋白(Smad4)、Runx-2基因(Runx2)mRNA相对表达水平,采用Western blot检测COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组ALP浓度和COLI表达水平均降低(P均<0.05),COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2 mRNA相对表达水平及COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2、p-ERK蛋白表达量均降低(P均<0.05);与模型组比较,接骨丹组ALP浓度和COLI表达水平均增加(P均<0.05),COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2 mRNA相对表达水平及COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2、p-ERK蛋白表达量均增加(P均<0.05)。与接骨丹组比较,抑制剂组ALP浓度和COLI表达水平均降低(P均<0.05),COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2 mRNA相对表达水平及COLI、TGF-β1、Smad4、Runx2、p-ERK蛋白表达量均降低(P均<0.05)。结论章氏接骨丹能促进骨髓间充质干细胞成骨分化,其调控机制可能与上调ERK/TGF-β1/Smad4信号通路相关。

浅谈利用济宁本地ASON网络实现联通电路的灵活接入

本文介绍了ASON网络建设实现通通电路灵活接入的过程,实现NEC传输设备的退网,为今后3G等大颗粒业务提供通路保证,市-县为ASON组网,比原有环网保护提供更安全的保护方式;县-乡镇提供RPR功能,解决原来乡镇交换机光缆直连没有保护的缺点;市-县开通GE电路,为城域网提供更多的承载路由。

中国参与“丝绸之路经济带”的多维度战略选择

"绸之路经济带"不仅具有深刻的历史渊源,同时还对推进区域协调,实现长期、持续的经济增长具有重要意义。有鉴于此,文章在分析了中国参与"丝绸之路经济带"的优点、缺陷、机遇和挑战后,认为"丝绸之路经济带"的战略目标应该聚焦政策、交通、贸易和民心相通等多种因素,并据此得出中国参与"丝绸之路经济带"的多维度战略选择。

cd99l2基因调控斑马鱼白细胞组织间的迁移机制

白细胞在个体发育、组织再生、先天及适应性免疫过程中都发挥了重要作用,而白细胞迁移至感染或创伤区域是其发挥免疫应答功能的必要条件。CD99L2作为黏附分子在白细胞外渗过程中发挥了重要作用,但其是否参与白细胞组织间的迁移尚不明确。本研究通过TALEN技术敲除斑马鱼(Daniorerio)cd99l2基因,发现cd99l2基因缺失后并不影响斑马鱼正常发育。尾鳍损伤后,cd99l2基因突变体在创伤组织处募集的中性粒细胞与巨噬细胞数目显著减少,进一步研究发现mfap4在cd99l2基因突变体中表达显著降低,这可能是影响巨噬细胞向损伤组织处迁移的原因之一。通过标记血管内皮细胞与中性粒细胞及巨噬细胞的转基因斑马鱼品系,发现受精后60h野生型或突变体斑马鱼中性粒细胞和巨噬细胞通过组织间迁移至创伤组织处,表明cd99l2基因参与了白细胞在组织间的迁移。利用RNA-seq分析发现,cd99l2基因突变体中RNA转录、蛋白质折叠及p450通路等被富集。黏附分子调控转录过程及信号传递在以往研究中已被多次证实。据此,本研究推测Cd99l2作为黏附分子参与了白细胞迁移过程中的级联信号通路。综上所述,本研究通过对斑马鱼的研究,发现了cd99l2基因在白细胞迁移过程中新的作用,有望对炎症免疫异常相关疾病提供理论基础。

当药苷调节兴奋-收缩耦联改善心肌缺血再灌注损伤的机制

目的:探索当药苷通过兴奋-收缩耦联信号通路对缺血再灌注损伤后心脏收缩/舒张功能的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、10μmol·L^(-1)当药苷给药组与1μmol·L^(-1)地高辛给药组,并采用Langendorff系统结合左前降支冠状动脉结扎建立缺血再灌注损伤模型(I/R),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组心脏梗死面积,Powerlab生理记录仪检测血流动力学参数,如左心室舒张压(LVDP)、左心室终末舒张压(LVEDP)、左心室终末收缩压(LVESP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))和左心室内压最大下降速率(-dp/dt_(max));提取分离乳鼠原代心肌细胞(NRCMs),建立缺氧/复氧(H/R)损伤模型,随机分为正常组、模型组、1μmol·L^(-1)当药苷给药组和10μmol·L^(-1)当药苷给药组,多功能成像细胞分析仪和激光共聚焦显微镜测定各组心肌细胞活力、心率、收缩幅度、收缩时程、达峰时程和舒张时程及钙瞬变峰值。根据前期转录组学测序结果及文献调研,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测L型钙通道相关基因(Cacnb2),细胞色素C氧化酶相关基因(Cox6a2),肌钙蛋白(Tnnc1、Tnni3、Tnnt2)、肌动蛋白(Actc1)、肌球蛋白(Myh6、Myl2、Myl4)等兴奋-收缩耦联通路基因的mRNA表达并对差异基因进行聚类分析。结果:与正常组比较,模型组心肌梗死面积显著增加(P<0.01)、LVDP显著降低(P<0.01)、LVEDP显著上升(P<0.01)、LVESP明显下降(P<0.05)、+dp/dt_(max)有下降趋势和-dp/dt_(max)上升趋势及心肌细胞活力降低、心率降低、收缩幅度降低、收缩时程升高、达峰时程升高和舒张时程升高(P<0.01),而当药苷可以逆转上述指标(P<0.05)。此外,心肌细胞经H/R损伤后,Cacnb2、Cox6a2、Tnnc1、Tnni3、Tnnt2、Actc1、Myh6、Myl2、Myl4等兴奋-收缩耦联通路的基因表达下降(P<0.05、P<0.01)。而使用当药苷预处理后,可以增强上述基因的表达(P<0.05)。结论:当药苷通过调节兴奋-收缩耦联信号通路,从而调节原代乳鼠心肌细胞内钙离子水平,增强心肌收缩功能,对抗I/R损伤。