聚丙烯酰胺凝胶电泳银染的影响因素

聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳是一种常用的DNA检测方法,广泛应用于现代生物技术研究。PAGE电泳中的银染技术复杂,银染过程中所要用到的聚丙烯酰胺、过硫酸铵、硝酸银等几种药品的浓度和作用时间直接影响实验效果。6%的凝胶分辨率较高;0.2%比0.1%硝酸银显带灵敏度高;甲醛浓度在0.1%～0.2%(体积比)范围内显色差异不大;1.5%和3%氢氧化钠显色结果无差别;10 mg/mL的硫代硫酸钠用量应为100～200μL/L;弱碱、强碱和改良银染法各有其优缺点,研究者可根据研究需求选择适合的银染方法。弱碱法染色背景浅,适于品种指纹图谱分析。强碱法及简易银染法具有高效率、低成本和操作简便的特点,适用于分子标记辅助育种。

琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较

对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补。其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株。引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差。(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株。引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定。可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质。

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。

聚丙烯酰胺凝胶电泳研究猪血清蛋白硫酸铵分级盐析

本文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳研究了盐析时各种猪血清蛋白溶解度与硫酸铵饱和度的关系,结果显示猪血清蛋白析出区间为25%～70%硫酸铵饱和度,各种猪血清蛋白具有各自的沉淀区间。10倍稀释猪血清白蛋白最佳硫酸铵沉淀方案为:pH值7.4,调节硫酸铵饱和度到50%,离心除去沉淀,调清液pH值至4.5,硫酸铵饱和度至55%,沉淀白蛋白。pH值7.4,35%饱和度硫酸铵沉淀猪血清时,IgG得率为69.5%,纯度为76%;40%饱和度时,IgG得率为91.8%,纯度为61.6%。

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化的微量蛋白制备抗血清

目的 以SDS PAGE纯化的微量蛋白制备抗人层粘连蛋白受体前体蛋白 (LRP)的血清。方法 以SDS PAGE分离纯化原核表达的人LRP与 6×组氨酸的融合蛋白 ,切下并粉碎融合蛋白所在凝胶块。将含 10 μg融合蛋白的凝胶颗粒与弗氏佐剂混匀后 ,免疫BALB/c小鼠。以Westernblot检测所获抗血清的滴度和特异性。结果 以胃癌细胞总蛋白为靶抗原时 ,Westernblot显示 ,所获抗血清仅识别 1条Mr 约 4 2 0 0 0的蛋白带 ,将抗血清做 1∶2 0 0 0稀释后 ,仍能清晰地显示其靶抗原所在位置。结论 以聚丙烯酰胺凝胶颗粒为载体 。

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法的改良

为了筛选和检测绵羊种群中具有较好表现的微卫星多态性,采用Touch-downPCR方法扩增绵羊基因组上的微卫星DNA序列后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,采用改良的银染法对微卫星位点进行多态性检测,染色结果与常规银染法相比,该方法具有灵敏度高、背景浅、污染小、条带清晰等突出特点,能有效地控制染色背景,显著提高检测分辨率,整个染色过程所需时间短,具有广泛的推广价值。

新聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆脂氧酶缺失方法

通过对传统SDS-PAGE电泳技术中样品前处理及制胶技术的改进,开发出了一种能够清晰鉴别Lox-1与Lox-2同工酶的SDS-PAGE电泳快速检测新技术。利用新改进的方法,在289个CS8000(♀)×FJ307(♂)F2杂交后代中,选拔出Lox-1,-2,-3同工酶完全缺失的个体27株,以及Lox-1,-3和Lox-2,-3缺失中间材料若干株。证明新改进方法可以缩短杂交后代脂氧酶缺失个体筛选进程,提高筛选精度,降低筛选成本。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽

目的 研究 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)显示小分子多肽的方法 .方法 观察不同方法处理的样品 ,上样量对电泳结果的影响及对分子量标准 (Mr 2 5 12～ 16 949)进行直线回归分析 .结果 样品的不同处理条件未见有差异 ;在该实验系统条件下上样样品为每孔 5～ 10μg较佳 ;分子量标准直线回归系数 r=- 0 .96 2 .结论 样品处理方便 ;上样量少 ;在 16 0 g· L- 1 T,6 0 g· kg- 1 C较低的丙烯酰胺含 6 mol· L- 1脲的分离胶中能够显示 Mr为 2 5 12的多肽 。

不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究

目的建立不同产地桔梗药材的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)指纹图谱鉴别方法。方法蛋白质(Pro)、过氧化物酶同工酶(POD)、酯酶同工酶(EST)PAGE指纹图谱分析。结果不同产地桔梗的Pro-PAGE图谱差异极小;POD-PAGE与EST-PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异,分别具有各自的鉴别谱带。结论POD-PAGE与EST-PAGE指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法。

人参水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱研究

目的:建立人参药材的水溶性蛋白 SDS—PAGE 指纹图谱,为人参药材的质量评价提供依据。方法:采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片,通过凝胶电泳图像分析软件生成谱图后,经计算机辅助相似度评价系统进行评价,并得到对照指纹图谱。结果:人参水溶性蛋白有9个特征带峰,12批次人参药材的相似度在0.90～1.0之间,稳定性、重复性和精密度良好。结论:该法具有实验设备简单、专属性强、灵敏度高、更直观的特点,可作为人参水溶性蛋白的 SDS—PAGE 凝胶指纹图谱,用于人参药材的质量评价。

聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和均一凝胶电泳在分离及鉴定植物SOD同工酶中的比较研究

比较了聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(GPGE)和均一凝胶电泳(PAGE)在分离和鉴定SOD同工酶方面的应用.在GPGE中根据Rf值大小可将SOD谱带分为3个区:A区Rf值最小,对SDS敏感,为Mn-SOD;C区Rf值最大,对SDS不敏感,为CuZn-SOD;B区谱带Rf值位于两者之间,对SDS敏感,为Fe-SOD.根据GPGE图谱上谱带Rf值大小和对SDS敏感性来判断SOD类型结果与用抑制剂判断结果一致,它可作为一种SOD类型初步鉴定的简便可行的方法,相同植物材料经PAGE分离后不具备这些特性.在相同牛血SOD浓度下,GPGE检测SOD灵敏度可达10-15mol,PAGE为10-13mol;在1.56×10-12molSOD时,在GPGE中可分辨出4条带,PAGE仅为2条.枸杞Fe-SOD在7.5%胶中Rf值最大,在10%胶中与CuZn-SOD重叠,香橼Fe-SOD、Mn-SOD和朱桔Mn-SOD、CuZn-SOD在10%PAGE中相互重叠,在GPGE中它们都有规律地完全分离,可根据Rf值大小鉴别SOD类型.通过2次电泳阐明了GPGE分离和鉴定SOD的可靠性,它能有效地分离和鉴定在PAGE上重叠的3种SOD类型.

种子蛋白乳酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及其对向日葵自交系和杂交种的鉴定

在对已报道的酸性和碱性两大电泳系统多种方法的比较研究中，我们利用国产仪器和试剂，研究出了一项利用种子蛋白乳酸尿素聚丙酰胺凝胶电泳鉴定向日葵自交系和杂交种纯度的技术。该技术主要包括（１）改进了单粒种子脱脂程序，（２）筛选出有效的向日葵种子蛋白提取剂，（３）确定了凝胶制备的国产丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比，（４）优化了新的酸性凝胶聚合催化系统“Ａｐ－Ｖｃ－ＦｅＳＯ４ 的配比，（５）筛选出新的电极缓冲液，明确了最佳条件。

改进的ISTA麦醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳方法在小麦品种真实性和纯度鉴定中的应用

本研究以小麦品种为材料,在ISTA麦醇溶蛋白的标准电泳程序基础上,对其进行了改进,凝胶浓度由10%增加为16.5%,既提高了分辨率,又使得剥胶容易。同时,凝胶交联度由4%降为3.3%,硫酸亚铁的浓度也有所降低,增加了胶的韧性。凝胶溶液中过氧化氢的量经过多次试验,也进行了定量,由原来的少量定量为70μl,从而形成了一套适合于一般实验室就可进行小麦品种真实性和纯度鉴定的方法,并将其应用于小麦种子的真实性和纯度的快速鉴定中。

利用半干技术进行水平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的同工酶分析

采用滤纸条半干技术进行水平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的同工酶分析,提高了电泳的分辨率,缩短了电泳时间(从10-12h缩短到4-5h),简化了操作,节省了试验药品费用.

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量

目的建立改进的低分子SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量 (Mr)。方法考察不同因素对电泳结果的影响 ,对Mr 标准进行直线回归分析 ,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr。结果测得各条带的Mr 分别为 :2 35 0 0、15 4 0 0、1340 0、1130 0、930 0、80 0 0。结论此法供试品处理方便 ,用量少 ,在含 6mol/L尿素的分离胶 (交联度为 16 .5 % ,丙烯酰胺总浓度为 6 % )中能同时显示中、低Mr 的条带 ,是一种测定中、低Mr 的较好方法。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染脱色方法的比较研究

本文对几种SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)快速染脱色方法进行了比较研究,从蛋白质回收,染色时间及其灵敏度的角度对它们的优缺点进行了比较,并且阐述了它们各自的染色机理。与常规考马斯亮蓝染色法相比,这几种方法染脱色的清晰度稍差,但是灵敏度相当,在实践上均是可行的。尤其是CaCl2、KCl法的灵敏度更高,染色时间短,

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染色新方法的研究

通过几种金属盐溶液对 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳染色的实验表明 ,0 .2 5 mol/L的Ca Cl2 和 Mg Cl2 溶液能够对蛋白质进行有效的染色 ,经这 2种溶液染色的蛋白质都能够从凝胶中洗脱回收。尤其是 Ca Cl2 法灵敏度更高 ,而且蛋白质条带形成之后也十分稳定。

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳三种银染方法比较

目的 探讨DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)三种银染方法的特点及其适用性。方法 采用非变性PAGE垂直板对不同稀释度的 pBR 32 2MspⅠ分子量标准进行电泳分离 ,利用二种硝酸银染色法和一种银氨染色法染色 ,分析其灵敏度和噪声。结果 分子量Marker的所有条带都能染出灵敏度均为 2 5ng。在至少一个条带能染出的灵敏度方面 ,银氨染色法 ( 6 .2 5ng)低于其他两种方法。结论 时间方面Carlos等所建立的银染方法最快 ,仅需 2 0min。银氨法的噪声最低 ,结果易于保存。

利用种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定洋葱品种类型

利用改进的不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,分析了洋葱不同类型品种的种子醇溶蛋白。结果表明 :长日型与短日型洋葱品种的电泳谱图具有明显差异 ,Rf0 .1 5和 Rf0 .1