一种新型两亲性聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸聚合物的合成与表征

[目的]合成聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸聚合物,表征其理化性质。[方法]以聚乙二醇单甲醚和鹅去氧胆酸为原料,先对鹅去氧胆酸进行乙酸化,然后再与聚乙二醇单甲醚进行酯化生成两亲性聚合物聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸(mPEG-CDCA)。利用核磁、红外、荧光探针法等手段分析聚合物的结构及理化性质。[结果]mPEG-CDCA被成功合成,且荧光分光光度法测定结果表明其临界胶束浓度(CMC)为17.3×10^(-3)mg/L。[结论]合成的两亲性聚合物有较低的CMC,意味着该聚合物容易形成胶束,在抗肿瘤药物的新剂型中具有良好的研究前景。

HPLC-ELSD法测定龙泽熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

目的:以牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为指标,建立龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱串联蒸发光检测器,色谱柱为ChromCore AQ C 18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-5 mmol•L^(-1)醋酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~40 min,25%A;40~50 min,25%A→29%A;50~80 min,29%A;80~100 min,29%A→40%A),流速1.0 mL•min^(-1),柱温30℃,ELSD漂移管温度110℃,氮流量2.5L•min^(-1)。结果:牛磺熊去氧胆酸进样量在1.069~9.57μg内、牛磺鹅去氧胆酸进样量在0.74046~7.40464μg内,进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系;仪器精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2.0%;经低、中、高3个浓度的准确度试验考察,牛磺熊去氧胆酸的回收率为95.2%~97.7%,牛磺鹅去氧胆酸的回收率为91.9%~95.9%。测定样品42批次,牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量分别为0.18~0.43、0.10~0.44 mg•粒^(-1)。结论:本法适用于龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的质量控制,可为完善龙泽熊胆胶囊的质量标准提供科学的依据。

聚乙二醇单甲醚-聚L-赖氨酸嵌段共聚物的合成及其表征

以L-赖氨酸为原料,先制备Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸,光气法合成Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸酐[Lys-(Z)-NCA]。以聚乙二醇单甲醚(MPEG)为原料,制备了端氨基聚乙二醇单甲醚(MPEG-NH2),并以此为大分子引发剂,在氯仿中引发Lys-(Z)-NCA开环聚合,经无水溴化氢脱苄,合成不同组成和分子量的聚乙二醇单甲醚-聚L-赖氨酸嵌段共聚物。用IR1、H-NMR、GPC、DSC等对共聚物结构进行了表征。结果表明:MPEG-NH2引发Lys-(Z)-NCA开环聚合得到的是嵌段共聚物,通过1H-NMR谱计算得到了共聚物MPEG-PLL-1、MPEG-PLL-2、MPEG-PLL-3、MPEG-PLL-4中PLL链段的摩尔分数分别为0.553、0.795、0.848、0.861,共聚物数均分子量(Mn)分别为2.3×104、6.1×104、8.6×104、9.5×104。

聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚谷氨酸/聚赖氨酸的合成及其复合胶束的稳定性研究

制备等比例的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚谷氨酸(mPEG-PLA-PLG)和聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚赖氨酸(mPEG-PLA-PLL)电中性聚离子复合胶束,依靠静电吸引提高原聚合物胶束聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)的结构稳定性。在mPEG-PLA的羟基末端引入氨基,分别与谷氨酸和赖氨酸的环化羧酸酐(NCA)发生开环反应,并且脱保护基制得目标产物,通过1H NMR、IR确证其结构,荧光法比较载体改性前后的临界胶束浓度(CMC)。以透析法制备去氧鬼臼毒素聚合物胶束,HPLC法测定改性前后两种胶束的载药量和包封率,激光粒度仪和HPLC比较两种胶束25℃水浴过程中粒径和药物含量的变化。两者的CMC都较低,且载药量和包封率相近,但改性后胶束的稳定性增至原胶束的2倍以上,稳定性得到显著提高。

聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林联合熊去氧胆酸治疗慢性丙型肝炎的临床疗效评价

目的:探讨聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-interfer-onα-2a,PEG-IFNα-2a)联合利巴韦林(ribavirin,RBV)联合熊去氧胆酸(ursodeoxycholic a c i d,U D C A)治疗慢性丙型肝炎(c h r o n i c hepatitis C,CHC)的临床疗效.方法:按照数字随机分组法将我院收治的84例慢性丙型肝炎患者均分为实验组和对照组,实验组患者给予聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林及熊去氧胆酸治疗,对照组患者给予聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗,比较两组患者基因1型与非基因1型丙型肝炎病毒应答率、治疗期间肝功能改善情况、发生自身免疫情况以及干扰素不良反应发生情况.结果:两组患者基因1型(9.52%vs 9.52%)、(64.29%vs 61.90%)、(54.76%vs 54.76%)与非基因1型HCV应答率(14.29%vs 16.67%)、(76.19%vs 73.81%)、(76.19%vs 73.81%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组患者第48周和第72周谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)恢复情况(80.95%vs71.43%)、(83.33%v s 73.81%)明显优于对照组,第24周、第48周和第72周谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)(80.95%vs 64.29%)、(85.71%vs 69.05%)、(83.33%v s 73.81%)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-g l u y a m t r a n s p e t i d a s,G G T)恢复情况(85.71%v s76.19%)、(100.00%vs 90.48%)、(92.86%vs80.95%)明显优于对照组,第4、12、24、48和72周总胆红素(total bilirubin,TBIL)(59.52%vs 47.62%)、(76.19%vs 59.52%)、(92.86%vs80.95%)、(97.62%vs 83.33%)、(92.86%vs80.95%)恢复情况明显优于对照组,差异均具有显著性(P<0.05);实验组自身免疫抗体阳性率明显低于对照组(16.67%vs 33.33%),差异具有显著性(P<0.05);两组患者甲状腺功能减退(2.38%vs 4.76%)和糖尿病发生率(0.00%vs2.38%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗期间两组患者乏力(47.62%vs 47.62%)、肌肉酸痛(45.24%vs 47.62%)、发热(26.19%vs28.57%)、骨髓抑制(23.81%vs 30.95%)、甲功异常(7.14%vs 11.90%)等干扰素不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:在聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗基础上加用熊去氧胆酸治疗慢性丙型肝炎,可明显改善患者肝功能、降低干扰素用药不良反应、减少患者发生自身免疫,临床疗效确切.

熊胆粉提取物中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的HPLC-ELSD测定

建立了HPLC-ELSD法测定熊胆粉提取物中的熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸。采用C_(18)色谱托,以0.05%三氟乙酸-乙腈梯度洗脱,蒸发光散射检测器,漂移管温度95℃。熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸分别在2.51～12.54μg和0.40～2.02μg范围内线性关系良好,回收率为98.8%和99 8%,RSD为1.4%和2.1%。

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞脂皮素-1基因表达的影响

观察牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定鹅去氧胆酸及杂质熊去氧胆酸含量

目的建立测定鹅去氧胆酸原料药含量的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶填充C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.10%甲酸溶液(58∶10∶32,V/V/V),流速为1.0 m L/min,等度洗脱,柱温为30℃,380-ELSD检测器,漂移管温度为90℃,N2流速为2.6 L/min。结果鹅去氧胆酸质量浓度在1.0~100.5μg/m L范围内与峰面积线性关系良好,R2=0.9896(n=7);检测限(LOD,S/N=3)、定量限(LOQ,S/N=10)分别为0.45μg/m L,1.52μg/m L;平均回收率为99.22%,RSD为1.29%(n=9);熊去氧胆酸质量浓度在1.0~103.2μg/m L范围内与峰面积线性关系良好,R2=0.9944(n=7);LOD(S/N=3)和LOQ(S/N=10)分别为1.14μg/m L和3.79μg/m L;平均加样回收率为96.72%,RSD为3.97%(n=9)。结论该方法操作方便,重复性好,精密度高,准确性强,可有效控制鹅去氧胆酸原料药的质量。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养大鼠肾组织中法尼醇X受体和小异源二聚体伴侣的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中法尼醇X受体(FXR)及小异源二聚体伴侣(SHP)的表达,探讨高果糖致肾损伤的机制。通过鹅去氧胆酸的干预,初步探讨其保护作用机制。方法将48只大鼠分为正常对照组(对照组,n=16),高果糖组(n=16)及鹅去氧胆酸组(n=16),8周及16周时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖、血脂及24 h尿微量白蛋白;检测大鼠肾皮质三酰甘油含量;免疫组织化学染色检测FXR的表达和定位;FXR及SHP的表达采用实时荧光定量PCR分析技术,并应用Western-blot法分析FXR及SHP的蛋白表达。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重,血中三酰甘油和极低密度脂蛋白水平明显升高,24 h尿白蛋白增加,肾组织中三酰甘油水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);高果糖组大鼠肾组织FXR表达明显下调,FXR及SHP的基因及蛋白表达明显减少,且随时间延长其表达减弱(P<0.01)。鹅去氧胆酸组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高三酰甘油血症、高极低密度脂蛋白血症、高尿酸血症和尿微量白蛋白水平增加,可引起大鼠肾皮质三酰甘油蓄积,使大鼠肾组织FXR及SHP的基因及蛋白表达明显减少,从而使肾脏脂质合成增加,进而导致肾脏损伤。鹅去氧胆酸可上调高果糖喂养大鼠肾组织FXR及SHP的基因及蛋白表达,减轻肾损伤。

HPLC-ELSD法同时测定痔速宁片中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸的含量

目的 采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法测定痔速宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。方法 采用Thermo U-3000液相色谱系统;ChromeleonTM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,检测器条件：漂移管温度：105℃,撞击管关闭,增益为1,气体流速：2.0 L/min。采用Thermo（4.6×150 mm,C185μm 120 A）色谱柱;流动相：乙腈-0.1%冰醋酸（50∶50）;流速：0.9 mL/min;柱温：20℃。结果 表明猪去氧胆酸在（21.530～262.884）μg/mL（r=0.9997）,鹅去氧胆酸在（11.148～133.776）μg/mL（r=0.9995）的范围内呈良好的线性关系;猪去氧胆酸平均加样回收率为101.8%（n=9）,RSD=2.8%;鹅去氧胆酸平均加样回收率为98.0%（n=9）,RSD=2.3%。结论 本方法操作简便、准确、灵敏度高,可用于痔速宁片的质量控制。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定胆汁槟榔维B_1胶囊中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸含量

目的建立测定胆汁槟榔维B1胶囊中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法。方法 Thermo U-3000液相色谱系统,Chromeleon TM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,漂移管温度为105℃,撞击管关闭,增益为1;气体流速为2.0 L/min。采用Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸（53∶47）,流速为1.0 m L/min,柱温25℃。结果猪去氧胆酸质量浓度在21.53～258.36μg/m L（r=0.999 7）,鹅去氧胆酸在11.148～133.776μg/m L（r=0.999 5）范围内与峰面积呈良好的线性关系;猪去氧胆酸平均加样回收率为101.07%,RSD=2.49%（n=9）;鹅去氧胆酸平均加样回收率为97.10%,RSD=2.54%（n=9）。结论该法操作简便、准确、稳定、灵敏度高,可用于胆汁槟榔维B1胶囊的质量控制。

HPLC-ELSD法测定猪胆粉中的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定猪胆粉中甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法:猪胆粉甲醇提取液采用Welch Ultimate Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液(40∶60)为流动相,流速为1.0 ml·min^(-1),检测器为奥泰ELSD 2000ES,漂移管温度为105℃,氮气流速为每分钟2.5 L。结果:甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸分别在0.306~4.590μg(r=0.999 5)、0.280~4.194μg(r=0.999 4)范围内呈现良好的线性关系,其平均回收率分别为99.23%,100.37%,RSD分别为2.0%,1.8%(n=9)。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于猪胆粉的质量控制。

HPLC-ELSD法同时测定护肝片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量

目的建立高效液相-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法同时测定护肝片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的方法。方法采用Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%冰醋酸溶液（80∶20）,流速为1.0 m L·min-1,色谱柱温为30℃;蒸发光检测器载气为氮气,流速为2.0 L·min-1,漂移管温度为60℃。结果猪去氧胆酸在0.521~10.42μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.998 9）,平均加样回收率为97.41%,RSD为1.30%（n=6）;鹅去氧胆酸在0.266~5.32μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 4）,平均加样回收率为96.09%,RSD为2.11%（n=6）。结论该方法准确、简便、灵敏度高,可用于护肝片中猪胆粉的质量控制。

HPLC-CAD法测定6-乙基鹅去氧胆酸起始物料中有关物质

目的:使用电喷雾检测器建立6-乙基鹅去氧胆酸起始物料的有关物质检测方法。方法:采用Waters XBridge Shield RP18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以0.05%三氟乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为1.4 mL·min-1,柱温为35℃,电喷雾检测器(雾化温度:35℃)。结果:本品主峰与相邻杂质分离良好,在质量浓度0.5~15μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.999,定量限为13.2 ng,检测限为5.3 ng,杂质重复性考察结果RSD均小于2%(n=6)。结论:方法精密度好、准确度高,可用于本品的有关物质检测。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养致大鼠脂质肾毒性中纤维化、炎症和氧化应激的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中转化生长因子(TGF)-β1、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6及NADPH氧化酶(Nox2)的变化,探讨高果糖喂养致大鼠脂质肾毒性中纤维化、炎症和氧化应激的作用及鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组、CDCA组,各16只。8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;TGF-β1、PAI-I、TNF-α、IL-6及Nox2基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重(KW/BW),血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 h UMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);TGF-β1、PAI-I、TNF-α、IL-6和Nox2基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01),CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸(UA)血症CDCA和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织纤维化、炎症因子和氧化应激增强,进而导致肾脏损伤。CDCA通过下调纤维化、炎症因子及氧化应激指标的表达,减轻肾损伤。

RP-HPLC法测定熊去氧胆酸中的有关物质

目的:建立HPLC外标法同时测定熊去氧胆酸中4种特殊杂质及其他有关物质含量。方法:采用Luna C_(18)柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.001mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(45∶55,用磷酸调pH至2.2±0.1)为流动相,流速为1.0mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长206nm。结果:熊去氧胆酸、胆酸、胆石酸、鹅去氧胆酸、7-酮基胆石酸分别在0.1～2.0,0.04～1.2,0.5～10,0.08～1.6,0.072～0.72mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.9998);方法的精密度和重复性良好(RSD<2%)。结论:该方法准确、简便、快速,适用于熊去氧胆酸的质量控制。

鹅去氧胆酸对高果糖喂养大鼠肾脏脂质合成和分解代谢的影响

目的通过观察高果糖喂养大鼠肾组织中固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)-1、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α及酰基辅酶A氧化酶(ACO)的变化,探讨其对脂质合成代谢和分解代谢的影响并观察鹅去氧胆酸(CDCA)的保护作用。方法将48只大鼠分为对照组,高果糖组及CDCA组,每组16只,8、16 w时分批处死,检测各组大鼠的肾功能、空腹血糖(FPG)、血脂及24 h尿微量白蛋白(UMA);检测大鼠肾皮质甘油三酯(TG)含量;SREBP-1c、SCD-1、PPAR-α及ACO基因和蛋白的表达分别采用实时荧光定量PCR分析技术及Western印迹法。结果与对照组比较,高果糖组大鼠左肾重/体重,血中TG和极低密度脂蛋白(VLDL)水平明显升高,24 hUMA增加,肾组织中TG水平明显增高,且随时间延长而加重(P<0.05);SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达明显增加,且随时间延长其表达更多(P<0.01);PPAR-α和ACO基因及蛋白表达明显减少,且随时间延长其表达更少(P<0.01)。CDCA组上述指标明显改善(P<0.05)。结论高果糖饮食喂养可导致大鼠高TG血症、高VLDL血症、高尿酸血症和UMA水平增加,可引起大鼠肾皮质TG蓄积。高果糖促使肾组织脂质合成代谢增强,分解代谢减弱,进而导致肾脏损伤。CDCA可下调SREBP-1c和SCD-1基因及蛋白表达,上调PPAR-α和ACO基因及蛋白表达,减少脂质合成,促进脂质分解,减轻肾损伤。

Xanthomonas maltophilia转化制备熊去氧胆酸及中间产物

以野生型嗜麦芽黄单胞菌(Xanthomonas maltophilia)为出发菌株,鹅去氧胆酸/β-环糊精包合物为反应底物,利用嗜麦芽黄单胞菌在液体发酵过程中产生的7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶,全细胞酶法催化制备熊去氧胆酸及中间产物。对嗜麦芽黄单胞菌形态鉴定,酶活测定并优化,制定产物检测方法。表明嗜麦芽黄单胞菌为杆状、单鞭毛、革兰氏阴性菌。菌株破碎后,SDS-PAGE分析表明在26-33 kDa之间存在蛋白条带,测定7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶酶活分别为79 U/mL、35 U/mL;优化显示,温度为35°C、pH值为9.0、添加30%甲醇时酶的活性提升;转化后UDCA得率为17.2 mg/L,7K-LCA得率为18.2 mg/L。作为一种野生型的底盘转化菌种,该研究为全细胞催化制备熊去氧胆酸及其中间产物提供了新的途径。

甘氨熊(鹅)去氧胆酸的制备工艺

以2-氯-1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)咪唑盐酸盐(IMesCl-Cl)作缩合剂,熊(鹅)去氧胆酸为原料,直接与甘氨酸乙酯盐酸盐反应,采用一锅法制得关键中间体甘氨熊(鹅)去氧胆酸乙酯2a和2b;2a和2b在碱性条件下水解合成了甘氨熊(鹅)去氧胆酸3a和3b,总收率超过83%,其结构经^(1)H NMR,^(13)C NMR和HR-MS(ESI)确证。

鹅去氧胆酸关键中间体的合成工艺研究

鹅去氧胆酸是临床上治疗肝胆类疾病的重要药物。对合成鹅去氧胆酸的关键中间体3α-羟基-6-烯胆烷酸甲酯的合成工艺进行改进,以猪去氧胆酸为原料,经甲酯化后,首先采用大位阻硅醚选择性保护3-OH,再通过Fe(NO_(3))_(3)/4-OH-TEMPO/NaCl/O_(2)体系氧化6-OH,最后经脱硅醚保护、腙化和脱腙反应合成目标产物,总收率为55.21%。相比传统方法,该工艺路线提高了氧化反应的选择性,具有操作简便、成本低且总收率高等特点。