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以聚乙二醇水凝胶膜为载体构建的角膜上皮移植片对LSCD治疗的可行性
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作者 郭译远 贤惠敏 +5 位作者 Shereen Tan Qiang Fu 金鑫 Mark Daniel Greg.G.Qiao 张弘 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1125-1133,共9页
目的探讨聚乙二醇水凝胶膜(PHFs)是否能作为角膜上皮细胞(CECs)体外扩增的载体以及其能否用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗。方法利用癸二酰氯、聚氧乙基甘油醚、聚已酸内酯二醇人工合成PHFs,检测其厚度、透光度和机械拉伸性能。取... 目的探讨聚乙二醇水凝胶膜(PHFs)是否能作为角膜上皮细胞(CECs)体外扩增的载体以及其能否用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗。方法利用癸二酰氯、聚氧乙基甘油醚、聚已酸内酯二醇人工合成PHFs,检测其厚度、透光度和机械拉伸性能。取清洁级新西兰大白兔4只,培养原代角膜缘上皮细胞,荧光显微镜下观察培养细胞中角蛋白标志物AE1/AE3和干细胞标志物p63的表达;将细胞分为阴性对照组、阳性对照组和PHFs+CECs组,其中将阴性对照组细胞直接种植在培养皿底,加入普通细胞培养液,将阳性对照组细胞种植在培养皿后加入含有100μmol/L H_(2)O_(2)的普通细胞培养液,将PHF+CECs组细胞种植在铺有PHFs的培养皿中用普通细胞培养液培养,各组培养24 h。采用MTT和TUNEL染色法分别观察3个组细胞增生和细胞凋亡情况。采用随机数字表法将清洁级新西兰大白兔15只分为对照组、PHFs组和PHFs+CECs组,每组5只。其中对照组造模后不给予任何处置;PHFs组将空PHFs膜置于LSCD实验兔角膜表面;PHFs+CECs组为将CECs传代后种植于PHFs上构建组织工程移植片后将移植片置于LSCD兔模型的角膜表面。采用荧光素染色法检测各组实验兔角膜缺损面积大小并评分;采用苏木精-伊红染色法检测各组实验兔角膜上皮组织学特点。结果PHFs厚度不超过150μm,能承受约6 MPa的拉力,在400~700 nm可见光范围内透过率>99%。角膜缘原代培养的大多数细胞AE1/AE3染色和p63染色阳性。MTT实验结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组A_(490)值分别为0.59±0.01、0.65±0.07和0.06±0.04,总体比较差异有统计学意义(F=12.25,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组A_(490)值明显大于阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。TUNEL检测结果显示,PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组TUNEL阳性细胞率总体比较差异有统计学意义(F=13.45,P<0.05),其中PHFs+CECs组和阴性对照组TUNEL阳性细胞率明显低于阳性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。荧光素染色结果显示,随着术后时间的延长,各组角膜荧光素钠染色评分均降低,对照组、PHFs组和PHFs+CECs组角膜荧光素钠染色评分依次降低。苏木精-伊红染色结果显示,对照组存在较少形状不规则的角膜上皮细胞,PHFs组一些区域出现单层稀疏的角膜上皮细胞;PHFs+CECs组角膜上皮覆盖范围最大,细胞层数增加到3~5层,形态较规则,排列较紧密。结论PHFs韧性强、透光度高且能够体外扩增角膜上皮,适合做角膜上皮移植片,并能促进LSCD兔模型角膜上皮的修复。 展开更多
关键词 上皮细胞 缘干细胞缺乏症 聚乙二醇水凝胶膜 上皮细胞再生 上皮移植片
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聚乙二醇水凝胶膜为载体的人角膜上皮细胞原代培养研究
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作者 郭译远 石妍 +3 位作者 金鑫 贤惠敏 栾桂霞 张红 《眼科》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期405-408,共4页
目的观察人角膜上皮细胞(corneal limbal epithelial cells,CLEC)的生物学特性,探讨CLEC在普通培养皿和聚乙二醇水凝胶膜(poly(ethylene glycol)-based hydrogel films,PHF)上的增殖率差异。设计实验研究。研究对象人角膜上皮细胞。方... 目的观察人角膜上皮细胞(corneal limbal epithelial cells,CLEC)的生物学特性,探讨CLEC在普通培养皿和聚乙二醇水凝胶膜(poly(ethylene glycol)-based hydrogel films,PHF)上的增殖率差异。设计实验研究。研究对象人角膜上皮细胞。方法采用组织块培养法体外扩增CLEC,待细胞生长至指数生长期,分别种植于普通培养皿和PHF上,倒置显微镜下观察培养细胞的生长特点,利用免疫荧光对其鉴定,利用CCK-8比色法观察两组细胞相对增殖率(relative growth rate,RGR)的差异。主要指标光镜下CLEC的生长,AE1染色,CCK-8比色法的吸光度(optical density,OD)值。结果光镜下可见CLEC在普通培养皿和PHF上均能移行扩增、融合成片,在PHF上的生长速度与普通培养皿组相近。两组细胞AE1荧光染色均呈阳性,PHF组阳性率(73.26%±8.84%)与普通培养皿组(70.84%±3.51%)基本相同。PHF组在12 h(0.89±0.06)、24 h(1.13±0.10)、48 h(1.24±0.03)的OD值与普通培养皿组(0.89±0.03、1.08±0.04、1.28±0.09)差异无统计学意义(P=0.79,0.36,0.76)。PHF组细胞在12 h(99.12%±4.81%)、24 h(103.74%±5.55%)、48 h(97.83%±13.37%)的RGR均大于75%,各时间点间差异无统计学意义(P=0.37,0.90)。结论PHF可以作为体外扩增角膜上皮细胞的良好载体。 展开更多
关键词 聚乙二醇水凝胶膜 上皮细胞 缘干细胞 免疫荧光 CCK-8
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Application of modified polyethylene glycol hydrogels in the construction of tissue engineered heart valve
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作者 OUYANG Hui ZHAO Rong +8 位作者 ZHANG Jin-bao LIU Yang ZHENG Qi-jun YANG Jian GU Chun-hu WEI Xu-feng CHEN Chang-sheng Yi Ding-hua LIU Wei-yong 《Journal of Life Sciences》 2008年第5期1-9,共9页
To enhance the adhesion of seeding-cells to the biomaterial scaffolds, the PEG-hydrogels were modified. Porcine aortic valves were decellularized with Triton X-100 and trypsin. The cells were encapsulated into the PEG... To enhance the adhesion of seeding-cells to the biomaterial scaffolds, the PEG-hydrogels were modified. Porcine aortic valves were decellularized with Triton X-100 and trypsin. The cells were encapsulated into the PEG-hydrogels to complete the process of the cells attaching to the acellular porcine aortic valves. Herein, the autologous mesenchymal stem cells (MSCs) of goats were selected as the seeding-cells and the tendency of MSCs toward differentiation was observed when the single semilunar TEHV had been implanted into their abdominal aortas. Furthermore, VEGF, TGF-β1, and the cell adhesive peptide motif RGD were incorporated. Light and electron microscopy observations were performed. Analysis of modified PEG-hydrogels TEHV's (PEG-TEHV) tensile strength, and the ratio of reendothelial and mural thrombosis revealed much better improvement than the naked acellular porcine aortic valve (NAPAV). The data illustrated the critical importance of MSC differentiation into endothelial and myofibroblast for remodeling into native tissue. Our results indicate that it is feasible to reconstruct TEHV efficiently by combining modified PEG-hydrogels with acellular biomaterial scaffold andautologous MSCs cells. 展开更多
关键词 tissue engineering BIOMATERIALS DECELLULARIZATION polyethylene glycol hydrogel heart valves
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