聚乙二醇沉淀蛋清蛋白质的规律及在卵白蛋白分离中的应用

研究3种pH值条件下4种聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对卵白蛋白(ovalbumin,OVA)、卵转铁蛋白(ovotransferrin,OVT)与溶菌酶(lysozyme,LYZ)的沉淀效率,根据变化规律建立无需后续脱盐的OVA分离新工艺。结果表明:PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ,沉淀率受PEG质量分数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时,OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大,当pH值从7.5调至5.5时,3种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺:首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至质量分数为12%,离心收集上清液,即得纯度88.1%的OVA,提取率为95.1%;再将所得上清液pH值调至5.5,离心收集上清液,所得OVA纯度提高至99.7%,提取率为87.3%。该工艺简便易行,有利于OVA的大规模制备及在食品及医药领域的应用。

聚乙二醇沉淀法筛查巨泌乳素血症1例报道

高泌乳素血症(hyperprolactinemia,HPRL)和泌乳素瘤均可通过血清泌乳素水平诊断。HPRL指在无妊娠或产后哺乳的情况下,泌乳素>20μg/L(420 mIU/L),且持续升高。泌乳素在血清中有多种异构形式,如具有生物学活性的单体泌乳素、无生物学活性的二聚体、生物学活性较低的四聚体,以及单体泌乳素与免疫球蛋白形成的聚合物,即巨泌乳素。有研究发现,少数HPRL是由巨泌乳素血症(macroprolactinemia,MPRL)引起的[1]。巨泌乳素在体内无生物活性[2],但会导致仪器将其误检为泌乳素[3],出现泌乳素假性升高,从而被误诊为HPRL。凝胶色谱层析(gel filtration chromatography,GFC)法是检测巨泌乳素的金标准,但耗时且成本高,不适合临床常规筛查。采用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)沉淀法筛查巨泌乳素更为经济、易行[4]。本研究报道1例由巨泌乳素引起的泌乳素假性升高病例。

超速离心法与聚乙二醇沉淀法提取人多发性骨髓瘤细胞来源外泌体的比较

目的:鉴定比较超速离心法和聚乙二醇(PEG)沉淀法提取人多发性骨髓瘤细胞来源外泌体。方法:人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226经去除外泌体无血清培养24~48 h培养后,分别使用超速离心法和PEG沉淀法进行外泌体的提取,分别测定两种方法所得外泌体的蛋白含量,并进行电镜鉴定比较。结果:超速离心法所提取外泌体测得实际浓度为(1.095±0.031)μg·μL^(-1),沉淀法所提取外泌体实际浓度为(2.069±0.086)μg·μL^(-1),组间比较,差异具有统计学意义(P<0.001);超速离心法测得外泌体蛋白总量(109.513±3.113)μg,沉淀法所提取外泌体测得蛋白总量(206.883±8.580)μg,组间比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。电镜下超速离心法分离外泌体清晰可见,沉淀法提取的外泌体含有较多杂质,影响电镜观察。结论:超速离心法方法简单,耗时少,外泌体纯度高,可用于外泌体的蛋白、DNA和免疫功能研究。沉淀法耗时较长,所得外泌体杂质蛋白含量多,不适用于外泌体蛋白分析,可用于RNA分析。

聚乙二醇沉淀剂有效分离尿外泌体(英文)

尿外泌体是病毒大小的胞外囊泡,是非侵入性获得肾及泌尿生殖道细胞生理病理信息的重要靶标。聚乙二醇沉淀剂可经济高效地分离富集血清等外泌体,但未见用于尿外泌体富集的详细报道。本研究采用聚乙二醇沉淀剂分离鉴定尿外泌体,并对其RNA组分进行检测,以期建立一个经济、高效、简便的尿外泌体分离富集方法。采集10例健康志愿者晨尿20 m L,聚乙二醇沉淀剂分离尿外泌体。透射电镜观察到直径30~100 nm双层膜包绕的囊性小泡,中央有直径5~15 nm高电子密度区。Western印迹检测到外泌体标记蛋白CD63、CD9、TSG101、ADAM10和内标蛋白β-肌动蛋白的表达。纳米粒径仪测定粒子直径介于30~130 nm,并可见25.37 nm和95.07 nm二个粒子峰。qRT-PCR扩增得到β-肌动蛋白和RNU6 RNA产物带。上述结果表明,聚乙二醇沉淀剂可分离富集尿外泌体,该法简单、高效,不需要超速离心机等昂贵设备,且采用该法富集到的外泌体可用于后续蛋白质与核酸分析。该方法可望加速液体活检应用,尤其是肾及泌尿生殖道病变的无创检测。

聚乙二醇沉淀法筛查巨泌乳素及对高泌乳素血症的诊断价值

目的探讨聚乙二醇(PEG)沉淀法筛查巨泌乳素(M-PRL)以及对高泌乳素血症(HPRL)的临床诊断价值。方法研究时间在2016年2月-2018年10月,观察组为100例HPRL患者,对照组为100名PRL正常人员,同时选取120名不同时期孕妇,通过PRL的检测对其是否存在M-PRL做出评价。结果观察组患者中PRL回收率<40.00%、40.00%~60.00%以及超过60.00%分别占到5.00%、8.00%以及87.00%;通过PEG6000处理,PRL仍然增高的有72例,其余28例正常;对照组中PRL回收率<40.00%、40.00%~60.00%以及超过60.00%分别占到1.00%、5.00%以及94.00%。观察组与对照组PRL回收率<40.00%、40.00%~60.00%以及超过60.00%数据对比,差异无统计学意义(χ^2=2.749、0.740、2.849,P>0.05)。不同时期孕妇检查后PRL回收率均超过60.00%。结论通过聚乙二醇沉淀法能够用于巨泌乳素以及泌乳素单体引起的高泌乳素血症,为临床高泌乳素血症的诊断与治疗提供依据。

聚乙二醇8000对棉铃虫微粒体蛋白沉淀作用的研究

为建立棉铃虫Helicoverpa armigera微粒体P450的分离纯化方案,比较了不同浓度下聚乙二醇8000(PEG8000)对棉铃虫幼虫中肠和脂肪体微粒体蛋白的沉淀作用.结果表明,终浓度为8.0×104 mg/L的PEG8000可以使中肠和脂肪体微粒体蛋白的78%沉淀下来,其中包含的细胞色素P450分别占中肠和脂肪体P450总量的28%和34%.SDS-PAGE显示,中肠微粒体经8.0×104 mg/L的PEG8000沉淀后,被沉淀蛋白的分子质量主要集中在14.1 ～ 40 kD和66 ～97 kD范围内.

聚乙二醇沉淀法在流感病毒气溶胶检测中的应用

目的初步探讨聚乙二醇(PEG)沉淀法对流感病毒气溶胶的浓缩效果。方法于2012年12月—2013年1月随机选取南京市5家商场超市和3家综合医院,采集室内可能含流感病毒的气溶胶样品,气溶胶经过不同的吸收液浓缩量、PEG-6000和NaCl加入量进行浓缩后提取RNA,以一步法逆转录巢式PCR检测甲型流感病毒。结果当PEG-6000和NaCl终浓度为7%和2.9%(m/V)浓缩10、20 ml吸收液以及PEG-6000和NaCl终浓度为14%和5.8%(m/V)浓缩10 ml吸收液时,甲型流感病毒的阳性检出率分别为17.5%,60%,30%,差异有统计学意义(P=0.008)。结论 PEG沉淀法可应用于流感病毒气溶胶的浓缩,并利于流感病毒的检出。

聚乙二醇沉淀巨泌乳素法筛查回收率cut-off值及其灰区设置探讨

目的探讨用聚乙二醇(PEG)沉淀法对高泌乳素血症(HPRL)患者进行巨泌乳素(M-PRL)筛查时,单体泌乳素(PRL)回收率cut-off值及其灰区设置的必要性。方法用PEG沉淀法对1799例HPRL患者进行M-PRL筛查,设定单体PRL回收率40%作为cut-off值,以其上下20%作为灰区,将其分为3组:巨泌乳素组、灰区组和真性HPRL组;同时对3组患者的性激素水平进行检测;结合灰区组患者的临床诊断结果进行分析。结果HPRL患者中,3组人群均以女性为主;性激素项目检测中发现3组患者性激素项目均已出现异常,特别是女性E2、LH/FSH比值在3组患者逐渐增高(P<0.05);灰区组虽高达9.73%,但结合患者的临床诊断结果分析,该组患者主要见于其他疾病,真正HPRL患者不多。结论PEG沉淀法进行M-PRL筛查时单体PRL回收率的灰区设置是有必要的,并且对灰区患者的性激素项目做进一步分析可以帮助临床医生做出更加准确的诊断结果。

应用聚乙二醇沉淀法及凝胶层析分离法诊断胰岛素自身免疫综合征的价值探讨

1例65岁男性因＂反复心慌、四肢无力1年余＂入院，生化结果提示为高胰岛素性低血糖症，多次查胰岛素自身抗体阴性，胰腺影像学未见异常。聚乙二醇沉淀法及凝胶层析分离法检测到该患者血清中有胰岛素-胰岛素自身抗体复合物，因此诊断为胰岛素自身免疫综合征。通过饮食调整及三餐口服拜唐苹，患者上述症状发作次数显著减少。

蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化

通过用聚乙烯亚胺(PEI)、硫酸铵、聚乙二醇(PEG)沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究.结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果.通过PEI沉淀去核酸后,再用硫酸铵沉淀,中肠和脂肪体GST活性分布在70%～75%和60%～65%沉淀段,比活力分别为1081.49和596.41 nmol/(min·mg),纯化倍数分别为2.53和2.2.在6种PEG中,PEG10000和PEG20000的纯化效果较好.在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%～45%和30%～40%,GST比活力分别为795.11和1 080.18 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.4和3.97.PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%～40%和25%～45%,比活力分别是767.57和945.96 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.81和3.05.用GSH-Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5 888.44nmol/(min·mg),纯化倍数达到107.38.

蛋白质沉淀剂对杨小舟蛾谷胱甘肽S-转移酶的部分纯化

用硫酸铵和聚乙二醇（PEG）沉淀技术对杨小舟蛾幼虫谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）进行了纯化研究。结果表明：通过硫酸铵沉淀，杨小舟蛾GSTs活性主要分布在40％～60％沉淀段，比活力为174．41nmol／（min·mg），纯化倍数为1．39。在5种PEG（PEG400、PEG2000、PEG4000、PEG6000和PEG20000）中，PEG20000的纯化效果最好。杨小舟蛾PEG20000沉淀的GSTs活性峰主要分布在10％～15％沉淀段，GSTs比活力＆454．14nmol／（min·mg），纯化倍数达到15．50。因而，PEG20000沉淀对于杨小舟蛾幼虫GSTs的纯化效果优于硫酸铵。

不同基质溶液与渗透压对PEG沉淀血清循环免疫复合物的影响

目的探讨聚乙二醇(PEG)沉淀预处理的实验影响因素,建立一种高效的PEG沉淀体系用于血清循环免疫复合物(CIC)前处理。方法对PEG沉淀预处理的实验条件(溶液基质、离子强度、pH值和渗透压)优化,沉淀血清(制备标准HBsAg-anti-HBs CIC)中的CIC后,采用自主研制的免疫复合物解离剂进行解离,然后再用化学发光法检测游离HBsAg。通过计算解离量来比较最适沉淀体系,最后分别采用传统沉淀和优化后的沉淀条件结合自主研发的解离技术,对335份五种乙肝血清标志物模式(HBV-M)标本进行HBsAg-CIC检测。结果基质溶液为0.15mol/L,pH8.2,500mOsm/kg的硼酸盐缓冲液的70g/L PEG 6000沉淀剂,4℃过夜沉淀后选择离心力为18 009×g,离心温度4℃,离心时间为10min,其沉淀分离效果最佳;五种乙肝血清标志物模式(HBV-M)标本分别采用传统和改良法检测免疫复合物,其中改良法的阳性率高于传统法分别为:0,95.2%,87.2%,80%和8.7%,另外在HBV-M 2,3,4组中改良法的沉淀CIC含量高于传统法且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论 PEG沉淀被广泛用于血清CIC检测及前处理,受到多重因素的影响,其中基质溶液及渗透压的选择也十分重要。该文为提高血清中循环免疫复合物(CIC)的检出率及缩短沉淀时间提供了理论基础。

棉铃虫中肠微粒体P450的分离纯化

为深入研究棉铃虫Helicoverpaarmigera细胞色素P450的结构与功能,需要分离不同型的P450蛋白。作者建立了适用于棉铃虫中肠微粒体P450的纯化方法,包括聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀、高效疏水作用色谱(HPHIC)和高效离子交换色谱(HPIEC)等连续分离步骤。SDS_PAGE(银染)显示,棉铃虫中肠微粒体经以上步骤分离纯化后,在含P450的馏分中检测出分子量分别为58kD、47kD、56kD和45kD的4条蛋白带。P450的回收率为14.3%,比含量提高了39倍。

水源中肠道病毒及胃肠炎病毒检测方法的研究进展及意义

人肠道病毒及胃肠炎病毒借助水体传播可能引起水源影响区域的疫情暴发。尤其对免疫力发育尚不完全的儿童和免疫缺陷人群,这些病毒感染可能会引起严重的临床症状和并发症。因此,做好水源中肠道病毒及胃肠炎病毒的检测和监测,将对这些病毒所致疾病的防范和控制有重要意义。本文综述了目前国内外针对水体中的病毒浓缩和检测所做的相关研究,包括从水样中浓缩、纯化病毒的不同方法及建立在分子生物学和细胞培养基础上的病原检测方法。这些研究为进一步建立行业标准和实验室检测规范提供了重要的参考和技术依据。

四种常见家禽血清免疫复合物的初步研究

采用2%和3.5%聚乙二醇(PEG)沉淀法对麻鸭、土鸡、乌鸡、鸽子四种常见家禽的血清免疫复合物进行含量测定,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其进行初步分析。结果表明,免疫复合物含量在同一种家禽的不同PEG浓度处理间均有显著差异;不同家禽间的同一PEG浓度处理间也均有显著差异。电泳图谱表明,四种家禽血清免疫复合物的电泳条带有一定差异,而同属鸡形目的土鸡和乌鸡之间的条带差异较小。

胰岛素自身抗体阴性外源性胰岛素抗体综合征1例报道

注射胰岛素是临床治疗糖尿病的常用方法之一,但外源性胰岛素治疗后可能会诱发体内产生胰岛素自身抗体(insulin antibody,IA),出现高胰岛素血症,表现为血糖波动大、严重胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)等,该组临床表现被称为外源性胰岛素抗体综合征(exogenous insulin antibody syndrome,EIAS)[1]。

卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌(Escherichia coli)毒素STxB蛋白(rSTxB),与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。

小儿哮喘应用非甾类激素抗炎药防治研究

为了探讨补体在支气管哮喘发病机理中的可能作用,对哮喘患儿采取外周血标本应用单向免疫扩散法测检C19、C3及聚乙二醇沉淀测免疫复合物CIC,同时测定血清总IgE含量并结合临床等对哮喘与IgE和C19、C3、CIC之间的关系进行探讨,并应用氨茶硷、酮替芬等非甾类激素治疗小儿哮喘,以图了解其疗效及实用价值。

长期孤立性巨天冬氨酸转氨酶升高1例报告

1病例资料患者女性,32岁,主因“发现AST升高7年”于2020年5月27日到门诊就诊。患者于2013年单位体检时发现肝功能异常,AST 212 U/L,ALT 23 U/L,ALP 86 U/L、GGT 28 U/L、TBil 14.7μmol/L,HBsAg及抗-HCV(-),肝脏、心脏彩超无异常,无不适症状,未予特殊治疗。以后每年均进行体检,并于2019年3月正常生育一女,孕期内其他检查亦无特殊变化.

卵巢子宫内膜异位囊肿囊液中外泌体的提取与鉴定方法研究

目的提取鉴定卵巢子宫内膜异位囊肿囊液中的外泌体。方法收集2020年1月-2020年3月深圳市妇幼保健院卵巢子宫内膜异位症患者的囊肿囊液,对囊肿囊液标本随机采用改良的聚乙二醇(PEG)沉淀法和超高速离心法两种方法离心制备外泌体重悬液,纳米粒径追踪仪(NTA)检测提取外泌体质量,透射扫描电镜(TEM)检测外泌体形态,采集图像分析,比较两种方法的差异。Western Blot法检验外泌体标志性蛋白,以成像仪记录结果。结果采用改良PFG沉淀法在子宫内膜异位症囊肿中可以提取直径范围158.6+59.6 nm的胞外囊泡,经透射电镜观察确定为外泌体,外泌体特异性膜蛋白CD9和TSG101呈阳性表达。结论改良PEG沉淀法能够从卵巢囊肿积液中分离提取较高浓度的外泌体,为进一步后续实验研究打下基础。