基因载体PEG化壳聚糖的制备及其表征

目的 用亲水性的聚乙二醇对壳聚糖进行改性 ,制备适用于基因转染的非病毒类载体。方法 合成步骤共分三步。首先通过有机合成 ,将甲氧基聚乙二醇 (mPEG)的羟基末端依次活化成为羧基和琥珀酰亚胺端基 ,形成mPEG COOH活化物和mPEG COONSu活化物 ;然后将亲水性的mPEG COONSu活化物接枝到壳聚糖的氨基侧链上 ,得到改性了的壳聚糖 聚乙二醇接枝产物 ,应用波谱技术FTIR ,1H NMR ,13 C NMR对中间产物和最终产物进行了表征。结果 在FTIR谱图上基本找到mPEG COOH ,mPEG COONSu的特征峰 ;1H NMR再一次确认mPEG COONSu的合成 ;13 C NMR确认了壳聚糖 聚乙二醇接枝产物的存在。结论 mPEG COONSu活化物通过接枝反应对壳聚糖进行改性 ,得到了PEG化壳聚糖。

PPI-DNA复合物的制备和PPI载体的细胞毒性研究

目的研究2.0代聚丙烯亚胺树状物(2.0G PPI)和单甲氧基聚乙二醇(mPEG)的修饰物(PPI-PEG)与DNA的复合物的制备和PPI的细胞毒性。方法用丁二酸酐和琥珀酰亚胺两步活化的mPEG耦联到PPI的氨基上,得到PPI-PEG,应用现代波谱等技术对中间体和最终产物进行表征。采用绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-N1为DNA模型,凝胶点用法研究了PPI和PPI-PEG与DNA的复合,并且采用MTT法测定它们的细胞毒性。结果凝胶电泳数据显示PPI阻滞了DNA在琼脂糖凝胶中电泳,MTT数据显示PPI对细胞具有一定毒性。结论PPI作为基因载体可以与DNA形成复合物,且PPI偶联上PEG后毒性降低。