乳糖化聚天冬酰肼的制备和分析

目的制备具有肝靶向性的高分子载体乳糖化聚天冬酰肼(Lacto PAHy)并研究其理化性质。方法以氰基硼氢化钠为还原剂,通过还原胺化使乳糖与聚天冬酰肼进行共价结合;利用硫酸苯酚法和聚氨基酸标准曲线法测定乳糖化聚天冬酰肼中乳糖和聚天冬酰肼的含量;利用乌氏黏度计法测定聚天冬酰肼和乳糖化聚天冬酰肼的黏度。结果较佳反应条件为pH 8.9缓冲液介质和24 h的反应时间,此条件可制得乳糖质量百分含量为56%的乳糖化聚天冬酰肼;乳糖化聚天冬酰肼水溶性良好;聚天冬酰肼乳糖化前后的特性黏度分别为0.1621 mL.g-1和0.1847 mL.g-1。结论成功制备了结构和组分确定的乳糖化聚天冬酰肼;硫酸苯酚法和聚氨基酸标准曲线法适合乳糖化聚天冬酰肼的组分分析;乳糖化聚天冬酰肼是一种有望应用于注射给药的高分子载体。

可降解聚天冬氨酸水凝胶的制备与应用研究

以天冬氨酸为原料,合成了聚丁二酰亚胺(PSI);采用氨基封端的聚乙二醇作为交联剂制备出了聚天冬酰胺水凝胶;研究了聚丁二酰亚胺分子量、交联剂分子量以及交联剂的用量等因素对水凝胶溶胀性能的影响,并研究了以甲硝唑为模型药物,在37℃下、pH=4.6的介质中,药物在聚天冬酰胺水凝胶中的控制释放。

聚乙二醇修饰物混合曲拉通X100-硫酸盐-液-固萃取体系分离纯化基因重组蛋白的可行性研究

以工程菌中被绿色荧光蛋白修饰的基因重组蛋白为对象,构建了聚乙二醇天冬氨酸修饰物PEG-ASP-Cu（Ⅱ）混合曲拉通X-100-硫酸盐-水液-固萃取体系纯化该融合蛋白.探讨了在体系中适用的表征目标蛋白的荧光方法,通过实验确定了采用恒波长同步荧光法测定目标蛋白质,可排除萃取体系中其他因素,尤其曲拉通X-100对目标蛋白测定的影响,得出最佳测定条件.通过验证可知该萃取体系对目标蛋白最佳正萃分离条件和最佳反萃条件.结果表明：未加入修饰物的单纯液-固萃取体系对目标蛋白萃取固相收得率在50%~89%;加入修饰物后,体系对目标蛋白的一次萃取固相收得率提升并稳定在97%以上,最高达100%,一次反萃取率达68%.

聚离子复合物胶束的制备及其载药性质研究

目的制备载有模型药物甘草酸二铵(diammonium glycyrrhizinate,DG)的聚乙二醇-聚天冬酰肼(mPEG-g-PAHy)聚离子复合物胶束,考察胶束的理化性质及药物释放机制。方法将聚乙二醇单甲醚的末端羟基氧化成醛基,聚乙二醇中的醛基与聚天冬酰肼的氨基发生还原氨化反应,最终将聚乙二醇接入到聚天冬酰肼分子中。mPEG-g-PAHy的结构经红外光谱、核磁共振光谱进行表征,并考察其急性毒性。以DG为模型药物,它与mPEG-g-PAHy在水溶液中通过静电作用形成聚离子复合物胶束,采用动态光散射法考察胶束的粒径分布情况,用超滤膜法测定胶束的包封率,采用透析袋法考察载药胶束在不同介质中的体外释放机制。结果测得小鼠尾静脉注射mPEG-g-PAHy的最大耐受量为10%(质量分数);胶束的平均粒径为(158±10.6)nm;包封率为(95.2±0.6)%;胶束的体外释放机制为离子交换。结论mPEG-g-PAHy的结构经红外光谱、核磁共振光谱确证,它是一种良好的制备聚离子复合物胶束的聚合物材料,以mPEG-g-PAHy为载体材料的聚离子复合物胶束是离子型药物的良好载体。

两性霉素B/聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯嵌段共聚物纳米胶束的制备与性能

目的研究两性霉素B/聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯嵌段共聚物（AmB/PEG-b-PBLA）纳米胶束的制备与性能。方法采用阴离子聚合反应合成了聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯嵌段共聚物[poly（ethylene glycol）-b-poly（β-benzyl-L-aspartate）,PEG-b-PBLA];由透析法制备了AmB/PEG-b-PBLA纳米胶束,通过紫外分光光度法测定了胶束的载药量及药物包封率,采用动态光散射法（dynamic light scattering,DLS）测定了胶束的粒径及分布;透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）观察胶束的形貌;通过体外释药实验研究了AmB/PEG-b-PBLA胶束的释药特性;采用四噻唑蓝法（MTT）考察了AmB/PEG-b-PBLA胶束的细胞毒性;通过溶血率研究了AmB/PEG-b-PBLA胶束的溶血毒性;通过微量液基稀释法（broth microdilution method）研究了AmB/PEG-b-PBLA胶束的抗菌活性。结果PEG-b-PBLA能有效增溶AmB,AmB/PEG-b-PBLA胶束粒径均在50-223nm内,胶束的载药量在4.54%-23.5%之间,包封率在66.7%-94.5%之间。胶束的体外释药具有缓释特性;当质量浓度小于16mg·mL^-1时,AmB/PEG-b-PBLA胶束对细胞的毒性不明显;AmB/PEG-b-PBLA胶束的溶血毒性与临床使用的AmB注射剂相比明显降低（P〈0.05）;AmB/PEG-b-PBLA胶束的最低抑菌浓度只有两性霉素B注射剂的1/8-1/4,抗真菌活性明显高于AmB注射剂（P〈0.05）。结论AmB/PEG-b-PBLA纳米胶束具有均匀的粒径及粒径分布、缓释特性、低的溶血毒性和较好的抗菌活性,有望开发为抗真菌治疗的AmB新剂型。

聚乙二醇干扰素α-2a联合恩替卡韦序贯治疗慢性乙型肝炎的效果分析

目的分析聚乙二醇干扰素α-2a(Peg-IFNα-2a)联合恩替卡韦序贯治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的效果。方法选取2020年1月至2022年2月在浙江大学医学院附属杭州市西溪医院诊治的CHB患者106例为研究对象,根据治疗方法不同分为对照组(恩替卡韦治疗)53例和研究组53例(Peg-IFNα-2a联合恩替卡韦序贯治疗),比较两组治疗前后的肝功能指标、肝纤维化指标,以及临床治疗疗效和不良反应发生情况。结果治疗后,对照组和研究组总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)分别为(94.79±8.71)μmol/L和(67.67±9.19)μmol/L、(256.93±44.07)U/L和(186.56±48.37)U/L、(256.47±43.73)U/L和(200.69±41.34)U/L,较治疗前的(140.05±26.15)μmol/L和(141.32±25.35)μmol/L、(433.66±77.16)U/L和(429.77±73.73)U/L、(352.34±65.19)U/L和(354.05±66.13)U/L均降低(t=19.19、-12.13,-28.85、-20.96,-19.27、-12.03,均P<0.05),且研究组均低于对照组(t=-6.49、-7.30、-6.74,均P<0.001)。治疗后,对照组和研究组透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)分别为(124.91±22.99)μg/L和(101.29±22.67)μg/L、(132.71±25.37)μg/L和(110.56±25.49)μg/L、(116.93±20.29)μg/L和(93.14±20.39)μg/L、(63.14±12.19)μg/L和(50.81±11.63)μg/L,较治疗前的(175.73±48.56)μg/L和(177.61±48.51)μg/L、(163.43±41.52)μg/L和(165.57±41.59)μg/L、(139.71±31.75)μg/L和(141.72±31.78)μg/L、(106.97±32.24)μg/L和(104.02±34.12)μg/L均降低(t=-13.04、-8.68、-10.43、-5.82、-13.35、-6.26、-13.02、-10.72,均P<0.05),且研究组均低于对照组(t=-5.32、-4.48、-6.02、-5.32,均P<0.001)。研究组治疗总有效率为88.68%(47/53),明显高于对照组的62.26%(33/53)(χ^(2)=9.98,P<0.05),研究组HBsAg转阴率为33.96%(18/53),明显高于对照组的1.32%(6/53)(χ^(2)=7.75,P<0.05)。研究组与对照组不良反应发生率差异无统计学意义[26.42%(14/53)比30.19%(16/53),χ^(2)=0.81,P>0.05]。结论Peg-IFNα-2a联合恩替卡韦序贯治疗CHB,可有效降低肝功能指标和肝纤维化指标,提高临床治疗疗效,且不会增加不良反应。

胆甾醇修饰的PEG-P[Asp(DET)]/miRNA复合物的制备、理化性能及细胞摄取能力

目的制备疏水基修饰的聚阳离子高分子基因载体PEG-P[Asp(DET)]-10%胆甾醇,对其复合miRNA的理化性质和细胞摄取能力进行研究。方法开环聚合合成PEG-P[Asp(DET)],再采用氯甲酸胆甾醇基进行疏水修饰,核磁共振法验证其结构;使其与hsa-miR-15a形成胶束复合物,对该胶束复合物的粒径、Zeta电位、稳定性、包封率以及细胞毒性进行考察;以白血病细胞K562细胞系为模型细胞进行体外细胞实验对其摄取进行考察。结果合成的PEG-P[Asp(DET)]-10%胆甾醇具有良好的溶解性,可与miRNA形成稳定的胶束复合物,当氮磷比(N/P)=20,基因浓度在5μmol/mL时,形成的胶束复合物粒径为(192.4±10.8)nm,Zeta电位为(6.9±0.9)mV,包封率为(90.5±3.2)%。该复合物在实验条件下表现出了相当的稳定性,细胞对该复合物的摄取能力明显强于商品化试剂脂质体lipo2000。结论PEG-P[Asp(DET)]-10%胆甾醇是一种优良的高分子基因传递系统载体,在体外实验中可有效实现细胞对于miRNA的稳定摄取。

靶向血管内皮生长因子的纳米颗粒制备及其对大肠癌细胞株SW620的作用

目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤新生血管形成过程中起关键性调控作用,是肿瘤靶向治疗的重要靶点之一。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是RNA序列特异性转录后的基因沉默现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)可介导同源mRNA降解。纳米颗粒黏附性强、体积小,可随血液循环进入细胞内,提高药物的生物利用度。在纳米颗粒表面整合精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)小肽配体可增加纳米颗粒与表达整合素的肿瘤细胞的特异性结合。聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)-聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)是构建纳米颗粒的材料。文中利用RGD-PEG-PEI纳米材料构建载有靶向VEGF mRNA的siRNA质粒(psiRNA),并检测其转染大肠癌细胞株SW620的效率。方法制备由U6启动子驱动、可在哺乳动物细胞内稳定表达的VEGF靶向性质粒,与RGD修饰的PEG-PEI纳米载体结合后形成纳米复合物。测定所制备的纳米复合物的粒径、包封率和体外释放特性,并检测其对大肠癌细胞株SW620的作用。结果所制备的纳米复合物平均粒径为(142.3±21.6)nm,包封率为(83.5±5.8)%,大部分质粒在2周内释放,转染大肠癌细胞株SW620后72 h转染效率达最高,VEGF mRNA的抑制效率为78.4%。结论 RGD-PEG-PEI纳米基因载体转染效率较高,RGD-PEG-PEI/psiRNA可有效降低大肠癌细胞株SW620中VEGF mRNA的表达量,具有着良好的应用前景。

RGD肽修饰的白藜芦醇纳米颗粒的制备及其对大肠癌细胞株SW620的影响

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽修饰的白藜芦醇(Res)纳米颗粒,观察其对大肠癌细胞株SW620的影响。方法制备RGD肽修饰的PEG-PEI纳米载体结合Res后形成纳米复合物。测定该纳米复合物的粒径、包封率和体外释放特性,并检测其对大肠癌SW620细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响,同时设Res作对照。结果所制备的Res纳米复合物平均粒径为(124.9±36.0)nm,包封率为(85.3±5.6)%,3d内共释放(72.5±8.3)%的Res。60、80、100μmol/L的Res纳米复合物对SW620细胞的增殖抑制作用与同浓度Res相比显著增强(P<0.05)。40、80μmol/L的Res纳米复合物使SW620细胞的S期细胞比例显著增加,40μmol/L的Res纳米复合物使凋亡细胞比例显著增加。结论 Res纳米复合物对大肠癌细胞株SW620有较好的增殖抑制活性,诱导细胞凋亡,增加细胞进入S期的比例,有着良好的应用前景。

Ⅰ型胶原在PLGA-[ASP-PEG]表面修饰对兔骨髓基质干细胞生物力学的影响

目的探讨Ⅰ型胶原修饰聚乳酸-羟基乙酸/天冬氨酸-聚乙醇(PLGA-[ASP-PEG])支架材料对骨髓基质干细胞(BMSCs)在其表面粘附、增殖及成骨分化的影响。方法采用化学方法将Ⅰ型胶原接枝到PLGA-[ASP-PEG]表面,同时在材料表面物理涂层胶原溶液。将改性PLGA-[ASP-PEG]复合兔BMSCs培养,检测BMSCs粘附、增殖性能的变化及成骨标志物碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、核心结合因子al等的表达情况。结果X射线光电子能谱法证实Ⅰ型胶原成功接枝到PLGA-[ASP-PEG]表面。经化学接枝-物理涂层技术改性后PLGA-[ASP-PEG]膜表面的Ⅰ型胶原含量大大提高,明显高于经单纯化学接枝或单纯物理涂层技术改性后膜表面的胶原含量,且远高于二者之和。改性PLGA-[ASP-PEG]表面BMSCs的粘附、增殖能力显著提高,其成骨标志物的表达均显著高于对照组,差异有显著性意义(P＜0．05)。结论Ⅰ型胶原能显著改善PLGA-[ASP-PEG]的细胞生物相容性,为组织工程支架材料的优化提供了一种新途径。