细胞因子聚乙二醇修饰物的研究进展

目的 综述细胞因子聚乙二醇 (PEG)修饰物的研究进展。方法 通过查阅近年来国内外的相关文献 ,从制备、产物稳定性及药物动力学等方面进行了总结。结果与结论 细胞因子聚乙二醇修饰物的稳定性与体内药动学特性均有改善 ,其生物活性的发挥则受多种因素的影响 ,但可通过定点选择性修饰。

聚乙二醇修饰物混合曲拉通X100-硫酸盐-液-固萃取体系分离纯化基因重组蛋白的可行性研究

以工程菌中被绿色荧光蛋白修饰的基因重组蛋白为对象,构建了聚乙二醇天冬氨酸修饰物PEG-ASP-Cu（Ⅱ）混合曲拉通X-100-硫酸盐-水液-固萃取体系纯化该融合蛋白.探讨了在体系中适用的表征目标蛋白的荧光方法,通过实验确定了采用恒波长同步荧光法测定目标蛋白质,可排除萃取体系中其他因素,尤其曲拉通X-100对目标蛋白测定的影响,得出最佳测定条件.通过验证可知该萃取体系对目标蛋白最佳正萃分离条件和最佳反萃条件.结果表明：未加入修饰物的单纯液-固萃取体系对目标蛋白萃取固相收得率在50%~89%;加入修饰物后,体系对目标蛋白的一次萃取固相收得率提升并稳定在97%以上,最高达100%,一次反萃取率达68%.

聚乙二醇修饰物Cu(Ⅱ)-IDA-PEG_(10000)-IDA-Cu(Ⅱ)的合成及应用

研发了一种新的适用于液-固萃取体系的聚乙二醇修饰物Cu(Ⅱ)-IDA-PEG10000-IDA-Cu(Ⅱ).详细介绍了该修饰物的合成及其在分离纯化血红蛋白中的应用,在液-固萃取体系中可达到牛血红蛋白固相收得率93.75%,lgK=3.7.

双链聚乙二醇与超氧化物歧化酶共价结合物的理化和免疫学性质

用三聚氯氰活化单甲氧基聚乙二醇,得到了双链聚乙二醇(PEGm_2).以PEGm_2修饰牛血Cu,Zn-SOD,得到了氨基修饰率为30％,残余活力为80％的纯PEGm_2-SOD.修饰酶的荧光光谱及圆二色谱均有改变;盐酸胍变性及胃蛋白酶水解实验结果表明,修饰酶的稳定性高于天然酶;免疫学实验表明,与天然酶比较,修饰酶的免疫原性及抗原抗体反应性大为降低.

修饰聚合物液-固亲和体系萃取测定试样中的铜

用亚胺基二乙酸(IDA)修饰聚乙二醇(PEG)8000与吐温80,构建了修饰聚合物-盐-水液-固亲和萃取体系,用于萃取发样、中草药、水样中的铜.在吐温80体积分数5%,(NH4)2SO4浓度1.66mol/L,PEG-(IDA)2质量浓度0.1%,pH3.30的萃取条件下,Cu()的萃取率>96.46%.连续变换法测定Cu()和PEG-(IDA)2的摩尔比是2∶1,由螯合物离解度计算配合物的表观稳定常数lgK=5.53.该体系的萃取机理是:Cu()与PEG-(IDA)2形成电中性的螯合物,与非离子型表面活性剂吐温80的羟基实现氢键作用而被萃取.

聚乙二醇

聚乙二醇两相体系及应用；聚乙二醇液相合成肟菌酯的方法；聚乙二醇-灭活疫苗粘膜免疫剂；聚乙二醇修饰的降纤酶；聚乙二醇修饰的舍脱氢酶生物硅凝胶的制备方法；一种高效的聚乙二醇活化工艺及活化物的蛋白质修饰应用；

人胰岛素的酶促聚乙二醇修饰

为开发一种新的胰岛素聚乙二醇修饰方法,以人胰岛素为原料,用羧肽酶A切掉其B链C末端的苏氨酸残基,得到去掉B30的胰岛素(des-B30-insulin),然后在有机相中,使用胰蛋白酶做催化剂,将一个连有聚乙二醇链的苏氨酸衍生物链接到des-B30-insulin上,得到一种新的聚乙二醇-胰岛素轭合物。该方法的特点是聚乙二醇通过酶促反应被定位连接在人胰岛素的B链C末端氨基酸上,形成了一种新型的聚乙二醇-胰岛素轭合物。生物活性的测定表明该轭合物具有极好的胰岛素活性保留,并具有潜在的长效功能。

非有机溶剂液-固萃取体系提取血红蛋白研究

用聚乙二醇 ( PEG80 0 0 )修饰物混合吐温 80 -磷酸钾盐液 -固萃取体系从血液中直接提取血红蛋白 ,考察了 PEG80 0 0修饰物、磷酸钾盐和吐温 80的浓度及酸度和温度等因素对血红蛋白分离纯化的影响 .结果表明 ,采用该体系的一次固相萃取率大于 99% ,一次反萃取率达到 75 % .所得到的血红蛋白干粉的纯度为99% .该方法不使用有机溶剂 ,无毒性 ,对蛋白质具有稳定和保护作用 ,易于放大规模使用 .

PEG定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价

采用分子质量为40k Da的马来酰亚胺聚乙二醇(m PEG-MAL),对重组人睫状神经营养因子突变体CNTF-C17的第17位半胱氨酸巯基进行定点修饰,通过离子交换层析获得单修饰产物Mono-PEG-CNTF-C17,并对其结构及体内外活性进行评价。实验结果表明,在p H 7.5的Tris-HCl缓冲液体中,蛋白质与修饰剂的为1∶3,4℃下反应12h,修饰率可达到90%以上,修饰混合物通过一步阴离子交换层析可获得纯度98%以上的单修饰产物。荧光光谱(FL)及圆二色(CD)图谱显示Mono-PEG-CNTF-C17与原蛋白二、三级结构一致。TF-1.CN5a.1细胞增殖活性检测表明,MonoPEG-CNTF-C17的比活达到了6.51×105IU/mg,体内循环半衰期相对原蛋白显著提高了30.3倍。该研究可为开发CNTF长效产品提供基础。