分枝型聚乙烯亚胺／寡核苷酸组装体的制备及细胞摄取研究

目的制备分枝型聚乙烯亚胺(B-PEI)/反义寡核苷酸(ASON)超分子组装体(assembly)。方法分析(Zetasizer)组装体的粒径分布及Zeta电位,观察组装体的形态,单因素实验优化制备工艺条件。琼脂糖凝胶电泳分析组装体中ASON的包封率及组装体中ASON抗DNaseⅠ降解的能力。激光扫描共聚焦显微镜观察细胞的摄入情况。结果N/P(B-PEI含有氮原子的摩尔数/ASON含有磷原子的摩尔数)为4·0时制得粒径较小,Zeta电位较高的B-PEI/ASON超分子组装体,组装体呈球状,形态规则。N/P高于3·5时ASON的包封率接近100%,B-PEI/ASON超分子组装体荷载的有较强的抗酶解能力。共聚焦显微镜观察结果表明,组装体明显提高细胞对ASON的摄入率。结论B-PEI是一种组装能力强的多聚阳离子,B-PEI/ASON超分子组装体具有较好的物理化学性质,并能够显著增加细胞摄入率。

交联型聚乙烯亚胺纸张增湿强剂的制备及作用机理

通过硅烷偶联剂(KH560)对聚乙烯亚胺(PEI)进行改性制备了一种新型环保湿强剂。采用FT-IR、TG、SEM和Zeta电位仪对改性PEI进行结构表征和性能测试,并分析其与聚酸胺多胺环氧氯丙烷树脂(PAE)联用的增强效果。结果表明,将改性聚乙烯亚胺(PEI-KH560)湿强剂应用于纸张浆内施胶,当添加质量为绝干浆质量的1.6%、助留剂CMC质量分数为0.6%时,纸张的湿抗张指数达到17.42 N·m/g,相对未加入湿强剂试验干抗张指数提高了58.4%,撕裂指数提高了26.4%。与单独使用改性产品相比,PEI-KH560与PAE等质量比联用的湿抗张指数提高23.8%,耐折度提高50.1%。

HA-bPEI纳米颗粒携带Atoh1质粒豚鼠耳蜗转染观察

目的利用透明质酸(HA)修饰分支型聚乙烯亚胺(b PEI)纳米颗粒制备新型非病毒基因载体,包载Atoh1-EGFP质粒,检测其在活体豚鼠内耳的转染效率。方法质粒提取后按照COOH/N/P=4:10:1合成纳米载体基因复合物并进行表征。利用圆窗膜渗透的方法,导入实验动物耳蜗。术后7天,通过激光共聚焦扫描观察基底膜铺片和切片了解转染情况,并利用Western Blot和RT-PCR技术分别从蛋白和核酸水平验证转染结果。结果按照本研究实验方法可成功合成表面带有负电荷的纳米级别的基因载体复合物颗粒,导入实验动物耳蜗后7天取材,基底膜铺片的共聚焦显微镜观察结果显示:基底膜内外毛细胞可检测到绿色荧光蛋白显色,基底膜底转的转染效率达81.7±4.71%,中转可达33.8±9.02%。结合冰冻切片结果发现,表达的绿色荧光蛋白主要位于耳蜗底转和部分中转,顶转及内外毛细胞以外区域未见绿色荧光蛋白表达。基底膜细胞未见明显变形损伤。Western Blot和RT-PCR结果也验证了Atoh1基因在基底膜上的成功转染。结论 HA修饰b PEI纳米颗粒制备基因载体可成功实现耳蜗的基因转染,且未见对基底膜细胞产生明显的毒性。合成简单、成本较低,是理想的内耳基因转染载体。