聚半乳糖醛酸内切酶研究进展

论述了聚半乳糖醛酸内切酶的微生物分布、发酵机理和酶学性质、酶的固定化以及其分子生物学的研究进展。

黑曲霉内切聚半乳糖醛酸酶A基因在大肠杆菌中的表达及产物酶学性质研究

采用Trizol法提取黑曲霉(Aspergillus niger JL-15)的总RNA,RT-PCR扩增到黑曲霉内切聚半乳糖醛酸酶A基因(pgaA),pgaA全长1113bp,编码370个氨基酸残基.pgaA经EcoRI和NotI双酶切,定向插入到表达载体pET-32a(+)中,并转化Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),重组子经IPTG诱导,其表达产物(rePGA)果胶酶活性最高为637.0U/mg.酶学性质研究表明,rePGA的最适温度为60℃,热稳定性较差,最适pH为pH 5.0;Ca2+对其活性具有显著促进作用,而Fe3+和Mg2+对其活性具有显著抑制作用;SDS-PGAE结果表明,rePGA的相对分子质量约为40 500Da;rePGA的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为4.05mg/mL和39.37μmol/(mL.min),rePGA能快速降低果胶溶液的粘度,符合其内切作用模式特点.

一株高产碱性内切聚半乳糖醛酸酶生产菌的筛选与鉴定

从碱性土样中经分离筛选得到1株固态发酵产碱性内切聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株。经提酶条件优化得到较优的酶液提取提条件为30倍Na2CO3/NaHCO3缓冲液提取1 h。从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学鉴定结果来看,该菌株属B.gibsonii。

内切聚半乳糖醛酸酶的分离和活性研究

从果胶酶中分离出了一种内切聚半乳糖醛酸酶(f_(90-1)),经SDS-PAGE凝胶电泳测定其相对分子质量约为40. 5 kDa。该酶可以从分子内部断裂果胶大分子,形成相对分子质量大于1000 Da的果胶片段,催化活力达12. 5±0. 9 U;当反应温度和pH值分别为50℃和5. 0时,酶的水解活力较高;金属离子K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)和Zn^(2+)的存在可以提高酶的活性,而Cu^(2+)、Ba^(2+)和Fe^(3+)则有抑制作用。

从黑曲霉发酵的果胶粗酶中分离纯化内切聚半乳糖醛酸酶

使用硫酸铵分级沉淀、CM -SephadexC - 5 0弱阳离子、POROSPE疏水层析和POROSHQ2 0强阴离子交换分离技术 ,从黑曲酶发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酶 .经SDS -PAGE电泳测定其相对分子量约 41.8kD ,最适pH和最适温度分别为 5 .0和 36℃ .

果胶酶解对复合凝聚鱼油微胶囊形态的影响

以鱼油为芯材,通过内切聚半乳糖醛酸酶酶解果胶,探讨壁材性质对微胶囊形态的影响。研究不同酶解时间条件下的果胶与明胶形成微胶囊的形态,相应复合凝聚物的黏度、产率,并分析3者之间的内在关系。试验结果表明:随着果胶水解时间的延长,水解果胶与明胶形成的复合凝聚物的黏度降低,流动性增强,易于形成球状多核结构的微胶囊;而水解时间过长将会导致复合凝聚物的产率过低,微胶囊形态不规则。