聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的制备与鉴定

褐藻胶经过稀HCl降解,pH值2.85分级获得2种聚糖粗品。通过dowex阴离子交换分离,浓度0.5~2.0 mol/L的醋酸梯度洗脱提纯,即获得高纯度的聚甘露糖醛酸（PM）和聚古罗糖醛酸（PG）。采用高效液相色谱技术对其分子量及纯度进行初步测定,利用核磁共振技术对其分子结构和纯度进行最终鉴定。由核磁共振图谱可得其结构保持了M,G的原有结构,且制得的2种聚糖纯度均在95%以上。

低聚古罗糖醛酸数均分子量测定方法的研究

分别采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法和高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定了低聚古罗糖醛酸的数均分子量。结果表明:DNS比色法可直接测定低聚古罗糖醛酸的数均分子量,以麦芽糖和古罗糖醛酸标准三糖分别作为标准品,其测定结果相近,该方法准确度高,重复性好;HPGPC法简便易行,可通过测定低聚古罗糖醛酸的重均分子量(Mw)和分子量分布宽度D间接计算数均分子量,该法测定结果与前者结果相比有较大差别,可能与2种方法使用的标准品不同有关。

聚古罗糖醛酸硫酸酯通过增强Ⅰ型干扰素表达抑制水疱型口炎病毒

目的对从海洋褐藻中提取的低分子量硫酸化多糖聚古罗糖醛酸硫酸酯(PGS)进行抗病毒活性评价。方法通过流式细胞仪分析、蛋白质印迹法(Western blot)和定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)评估PGS对水泡疱性口炎病毒(VSV)的抗病毒活性。结果PGS具有抗VSV的活性。初步研究机制表明,PGS可能通过增强Ⅰ型干扰素(IFN)表达发挥抗病毒作用。

低聚古罗糖醛酸磷酸酯的制备及其对RAW264.7细胞的激活作用

目的研究低聚古罗糖醛酸磷酸酯对RAW264.7细胞的激活作用。方法低聚褐藻胶依次通过pH分级、高压酸解纯化的方法制备低聚古罗糖醛酸,进而采用磷酸/尿素法对其进行磷酸化修饰,制备低聚古罗糖醛酸磷酸酯。在低聚古罗糖醛酸磷酸酯对RAW264.7细胞激活实验中,分别测定了对RAW264.7细胞增殖、吞噬能力、细胞因子(TNF-α、IL-1β)释放、胞内酶(酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶)活力的影响。结果低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著促进RAW264.7细胞的增殖,提高其对中性红的吞噬,促进细胞因子的释放以及增强胞内酶的活性。结论低聚古罗糖醛酸磷酸酯能够多层次、多水平的激活RAW264.7细胞,是1种潜在的免疫增强剂。

聚古罗糖醛酸硫酸酯-铜纳米胶束制备及抗肿瘤活性研究

目的 制备1种基于化学动力学疗法的聚古罗糖醛酸硫酸酯(PGS)-铜纳米胶束,进行抗肿瘤活性研究。方法 采用聚离子复合法,将PGS与铜离子及过氧化氢反应制备聚电解质纳米胶束PGS-Cu,分光光度法测定铜离子含量和羟基自由基,CCK-8法测定细胞存活率。结果 制备的PGS-Cu纳米粒径为(109.54±14.29) nm,分布系数为0.23±0.02,Zeta电位为(-47.58±1.71) mV。酸性环境下,PGS-Cu纳米胶束铜离子累积释放量显著高于中性环境,并产生·OH。100μg·mL^(-1)的PGS-Cu纳米胶束作用下,人源三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、小鼠乳腺癌细胞(4T1)和小鼠正常成纤维细胞(NIH/3T3)的存活率分别为14.87%、62.24%和90.77%,表明PGS-Cu纳米胶束对乳腺癌细胞有显著的细胞毒性,且对MDA-MB-231细胞抑制效果最佳。此外,4T1细胞在pH 7.4和6.0时的存活率分别为62.24%和18.33%,说明该纳米胶束具有pH响应性。结论 成功构建了1种基于化学动力学疗法、以多糖为载体的聚电解纳米胶束,该纳米胶束具有p H响应性和肿瘤靶向性,能有效抑制乳腺癌细胞生长,发挥抗肿瘤活性。

高古罗糖醛酸含量的萱藻(Scytosiphon lomentarius)多糖细微结构研究

将青岛产幼生和成熟期萱藻(Scytosiphon lomentarius)提取分离得到多糖,经1H-NMR分析,表明其为高古罗糖醛酸含量的褐藻胶,在对其G/M值分析基础上,进一步对其二糖嵌段FMM,FMG,FGM,FGG和三糖嵌段FGGG,FGGM,FMGM,FMGG含量进行了比较分析。结果表明,幼生和成熟期萱藻除了总糖含量不同外,其褐藻胶细微结构也有显著差别。幼生与成熟期萱藻中G/M分别为4.34和7.14,FGG含量分别为73%和84%,FGGG含量分别为68%和81%。成熟期萱藻中高含量多聚古罗糖醛酸是一种值得开发的多糖资源。

弧菌DS32褐藻胶裂解酶基因vralg1的异源表达和酶学性质研究

对从福建省东山湾沉积物样品中筛选到的菌株Vibrio sp. DS32的褐藻胶裂解酶基因vralg1进行克隆和异源表达,并对其酶学性质进行评估。以DS32基因组为模板,克隆褐藻胶裂解酶基因vralg1,构建了pET-vralg1重组表达载体,并在大肠杆菌中实现了异源表达,对重组酶VRALG1的酶学性质、底物特异性和完全降解产物等进行了测定。结果表明:重组酶VRALG1最适温度为35℃,在5~50℃范围内相对酶活力达到80%以上,最适pH为6.5~7.5,在pH为6.0~9.0范围内保温1 h后相对酶活力在90%以上;重组酶VRALG1最大反应速率为5.919 mmol/(L·min),米氏常数为3.712 mmol/L,最适条件下比活力为5.874 U/mg;K^(+)、Cs^(+)、Na^(+)、咪唑和乙醇对酶活性影响较小,5 mmol/L或50 mg/mL浓度下相对酶活力保持90%以上,EDTA对酶的抑制作用明显,1 mmol/L浓度下可使酶完全失活;重组酶VRALG1对海藻酸钠和聚古罗糖醛酸具有较高的降解活性,TLC分析显示产物主要为单糖、二糖和三糖混合物,结合底物特异性分析,推测重组酶VRALG1是具有明显聚古罗糖醛酸偏好性的内切型双功能褐藻胶裂解酶。本研究成功克隆了弧菌DS32中褐藻胶裂解酶基因并实现了其在大肠杆菌中的异源表达,所得重组酶VRALG1具有优良的海藻酸钠降解活性和明显的聚古罗糖醛酸偏好性,可以用于制备低聚合度的褐藻寡糖。

海藻酸盐裂解酶研究进展

海藻酸盐裂解酶是一类降解褐藻中海藻酸盐的酶。此酶已经在多种有机体中得到分离。对海藻酸盐裂解酶的生物特性、研究方法及其生物学功能进行了介绍。在酶学特性研究的基础上 ,通过酶解构建新型海藻酸盐多聚物 ,可增强和扩展海藻酸盐裂解酶在工业、农业、医药领域中的应用 ,使其在海藻多糖的高值化应用中发挥重要的作用。概述了海藻酸盐和海藻酸盐裂解酶过去和现在的研究状况 ,展望了海藻酸盐和海藻酸盐裂解酶将来的应用前景。