四价HCV聚合抗原的克隆、表达及在抗-HCV ELISA试剂中的应用

本研究通过反转录从丙肝病人血清中克隆了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３ｃ基因，通过ＤＮＡ合成法又分别合成了编码ＨＣＶ核心抗原基因、ＮＳ４抗原及ＮＳ５抗原部分抗原决定簇的基因，利用基因工程手段，在大肠杆菌中表达了含有上述四种抗原的融合蛋白。该融合蛋白具有良好的抗原性和特异性，以该融合蛋白为抗原制备的抗－ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂检测中国药品生物制品检定所１９８份标准血清时，其阳性、阴性符合率分别达到９７％和９８％。

抗原捕获聚合酶链反应分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒

目的 : 建立直接分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒 (HSV)的抗原捕获聚合酶链反应 (AC -PCR)。方法 : 用抗HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体 ,包被聚苯乙烯离心管 ,捕获HSV ,同时加入 3个引物 :HSV - 1 HSV - 2型共同性上游引物及HSV - 1和HSV - 2型特异性下游引物 ,进行PCR扩增。结果 :HSV - 1和HSV - 2标准病毒株均分别扩增出与设计大小相符的 4 77bp和 399bpDNA条带。AC -PCR可检测到 10PFUHSV - 1和 1PFUHSV - 2。用AC -PCR检测了 36 5份妇女生殖器拭子标本 ,阳性 10 1例(2 7.7% ) ,2 3例为HSV - 1(占 2 2 .8% ) ,78例为HSV - 2 (占 77.2 % ) ;其中 112份标本同时用AC -PCR和分离培养法检测 ,AC -PCR的阳性率为 2 6 .8% (30 112 ) ,分离培养法的阳性率为 2 0 .5 % (2 3 112 ) ,两者差异有显著性 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论 : AC -PCR是特异、敏感。

布鲁氏菌M28强毒株O抗原聚合酶基因缺失株的构建及其毒力评价

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)作为标记,筛选缺失突变株(M28-ΔB0107)。M28-ΔB0107经过20余代传代培养,Kanr表达稳定。将M28-ΔB0107与M28以106cfu剂量腹腔接种小鼠,进行体内致病性试验。结果显示,M28-ΔB0107感染组小鼠脾脏荷菌量显著低于亲本M28株感染组,感染6周时,前者低于后者近10倍(p<0.05);而且M28-ΔB0107感染组脾脏重量也显著低于M28强毒株组(p<0.05);小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)感染能力试验结果表明,突变株与亲本株无明显差异(p>0.05)。

聚合OT抗原ELISA检测牛结核血清抗体

以聚合OT为抗原的ELISA检测了结核清净场1026头牛血清的ELISA值((?)=0.07,SD=0.05)。以(?)+3SD为临界值,检测了结核菌素(OT)变反阳性牛118头,阳性率56％。屠宰牛中,OT变反阳性6头,3头有结核病变,细菌学检查阳性,ELISA阳性;另3头无可见病变,1头有肝片吸虫寄生,2头细菌分离培养在肺门淋巴结培养出快生长抗酸菌,此3头ELISA阴性,检测了四种疾病及三种分枝杆菌免疫血清,阳性1例,交叉反应率1.75％。

负载超顺磁性四氧化三铁的抗体靶向聚合物胶束的构建

目的：构建一种新型纳米抗体靶向MRI造影剂，负载超顺磁性四氧化三铁（superparamagnetic iron oxide，SPIO）聚合物胶束。方法：采用两亲聚合物包覆法制备负载SPIO的聚合物胶束，并检测该聚合物胶束的粒径、形貌、顺磁性氧化铁的含量、磁化曲线；用免疫方法检测聚合物胶束连接抗体的情况、普鲁士蓝染色法观察铁在前列腺癌细胞中铁标记率。结果：合成的负载SPIO的抗体靶向聚合物胶束的粒径为38．1±0．4；靶向负载SPION的聚合物胶柬中SPIO的含量为35．8％，电镜下负载SPION的靶向聚合物胶束成球形，粒径小且每个胶束里只有一二个SPIO粒子；功能化后的负载SPIO的性能并没有减弱；通过免疫荧光法证实前列腺干细胞抗原（PSCA）抗体连接在聚合物胶束，能促进了前列腺癌细胞对负载SPIO的抗体靶向聚合物胶束的吸收。结论：成功合成PSCA抗体靶向功能的SPIO聚合物胶束，在体外均显示出较好的靶向效果，可通过进一步的研究探索作为一种活体应用的MR／探针来检测前列腺癌。

SPD1672蛋白对肺炎链球菌磷壁酸合成和细菌增殖的影响

目的鉴定SPD1672基因在肺炎链球菌细胞壁多糖合成及增殖中的作用。方法通过生物信息学分析SPD1672蛋白可能的生物学功能,用替代失活法在肺炎链球菌D39菌株和R6菌株中敲除该基因,用电子显微镜观察基因缺失菌株与野生菌株荚膜厚度,Western blot检测磷壁酸合成量,最后以吸光度法测定肺炎链球菌体外增殖能力。结果成功构建SPD1672基因缺失菌;SPD1672基因缺失菌株与野生菌株相比,荚膜厚度无差异;而缺陷菌株的C反应蛋白结合量较野生菌显著减少(P<0.01),其磷壁酸含量也较野生菌显著下降。此外,SPD1672基因缺失菌体外增殖较野生菌缓慢(P<0.05)。结论 SPD1672蛋白影响肺炎链球菌磷壁酸合成和体外增殖能力,是肺炎链球菌的一种新毒力因子。

甲型肝炎病毒(L-A-1株)基因型分析

目的 分析甲肝病毒基因型,为确定我国甲肝的分子流行病学及疫苗的安全性和免疫原性奠定基础。方法 采用抗原捕获聚合酶链反应（AC/PCR）,依据国际上甲肝病毒分型标准,扩增VP1/2A结合处的168个核苦酸（nt2909～3264）。结果 经生物信息学软件分析,得出L-A-1株病毒属于甲肝病毒基因IB亚型。结论 在我国有IA和IB两个亚型甲肝病毒流行。

抗心磷脂抗体阳性脑梗死与HLA—DQB1基因多态性关系的研究

目的探讨抗心磷脂抗体（ACL）阳性脑梗死与人类白细胞抗原DQB1（HLA—DQB1）等位基因多态性的关系。方法采用聚合酶链反应一限制性片段长度方法（PCR—RFLP）．分析150例脑梗死患者[观察组，其中ACL阳性36例，ACL阴性114例】的基因型．并以96名健康体检者为对照占结果（1）ACL阳性率在观察组中明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）观察组中，DQB1。0303等位基因频率为38．67％（116／300）．高于对照组的29．17％（56／192），差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）观察组中，ACL阳性脑梗死DQB1。0303等位基因频率为52．78％（38／72），明显高于ACL阴性脑梗死的34121％（78／228），差异有统计学意义（P〈001）。DQB1。0303等位基因频率与ACL阳性率呈正相关．相对危险率（RR）值为2．15（P=0．00）。结论DQB1。0303可能是ACL阳性脑梗死的遗传易感基因。