用聚合酶连反应检测异常妊娠妇女弓形虫感染

探讨异常妊娠与弓形虫感染的关系。PCR方法可以用于临床上弓形虫感染的检测。

聚合酶连反应在皮肤科诊断中的应用

聚合酶连反应在皮肤科诊断中的应用黄苹（附属医院皮肤科）由于免疫学诊断受到多种因素的影响，因此有必要寻找更新、更具诊断价值的方法［１］。１９８５年美国Ｃｅ－ｔｕｓ公司人类遗传学研究室Ｓａｉｋｉ等人首创一种种为聚合酶链式反应（ｐｏｃｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉ...

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测下呼吸道痰液标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床应用

目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸,寻求呼吸道标本MRSA的快速检测技术。方法 收集临床分离的75株金黄色葡萄球菌菌株及97份下呼吸道感染患者的合格痰液标本,应用实时荧光定量PCR快速检测法检测标本中Nuc及MecA基因,并以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为标准,判断实时荧光定量PCR与传统方法检测结果的一致性,及该方法对下呼吸道痰液标本检测的敏感度、特异度。结果以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为对照,实时荧光定量PCR快速检测法检测金黄色葡萄球菌菌株中MRSA的敏感度及特异度均为100.0%,检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度为100.0%、特异度为84.7%。结论应用实时荧光定量PCR快速检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度高,特异性强,操作时间短,与常规培养+药物敏感试验的检测结果具有良好的一致性,具有较高的临床应用价值。

病原体RNA和DNA同步聚合酶连反应的方法建立与应用

目的:建立一种可同步检测病原体RNA或DNA的荧光定量RT-PCR方法,以提高突发公共卫生快速检测能力。方法:通过与经典荧光定量PCR的比对来验证新建立的方法能否同步扩增RNA和DNA以及对DNA的扩增效果。结果:新建立的方法可同步扩增RNA和DNA,扩增所需时间为35分钟,扩增曲线呈典型的"S"型,扩增效率E值均在理想值范围(0.916、0.923)、均在理想值范围(相关系数均可达到"1"),重复性良好(s均≤0.34、cv均≤1.13%),扩增灵敏度相同(平均ct值误差分布在0.02～0.25之间,t值分布在0.17～2.50之间,P均>0.05)。结论:新建立的方法可同步检测6种不同核酸类型的病原体,检测时间明显缩短,检测效果与经典荧光定量PCR相同。

嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶及喹诺酮类耐药基因检测

目的检测临床分离嗜麦芽寡养单胞菌耐药基因型并分析其与耐药表型的关系,从而为嗜麦芽寡养单胞菌感染的防治提供理论依据和对策。方法对2005—2008年收集的102株嗜麦芽寡养单胞菌提取全基因组DNA,采用PCR方法检测β-内酰胺酶L1、L2型耐药基因和喹诺酮耐药基因qnr,分析耐药基因与耐药表型的关系。结果 102株嗜麦芽寡养单胞菌对临床常用抗菌药物耐药率以替卡西林/克拉维酸最高达到42.16%,其次为复方磺胺甲基异噁唑29.41%、氯霉素27.45%、头孢他啶22.55%,对米诺环素的耐药率最低11.76%。102株嗜麦芽寡养单胞菌L1基因阳性率76.47%,L2基因阳性率67.65%;其中L1和L2型基因共同阳性率56.86%;头孢他啶及替卡西林/克拉维酸耐药菌株均检测到L1和L2型基因。102株qnr X、qnr Y和qnr Z的阳性率都是100%。结论本地区嗜麦芽寡养单胞菌β-内酰胺酶L1和L2酶检出率较高,喹诺酮耐药基因qnr阳性率达到100%,染色体上Qnr酶单独存在并不会导致对氟喹诺酮类药物高度耐药。

受体酪氨酸激酶EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达及临床意义

背景与目的:EphA1基因是受体酪氨酸激酶家族的成员之一,其过表达可能在恶性肿瘤的发生、发展中起重要的作用。本研究旨在探讨受体酪氨酸激酶EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测50例膀胱癌组织和15例相应癌旁组织中EphA1 mRNA的表达,分析基因表达的差异与临床病理特征间的关系。结果:EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达量为106.86±30.40,高于癌旁组织的表达量10.37±2.69,差异有显著性统计学意义(P<0.001);EphA1 mRNA在高级别膀胱癌中的表达量为210.94±50.51,高于低级别膀胱癌组的52.64±16.01(P<0.001),肌层浸润性膀胱癌EphA1 mRNA的表达量为174.69±43.57,显著高于非肌层浸润性膀胱癌的63.14±17.60(P=0.001)。EphA1 mRNA的表达与性别、年龄、肿瘤大小、数目无显著相关性(P>0.05)。结论:EphA1 mRNA的表达在肿瘤组织中明显高于正常组织,且与病理分级、临床分期呈正相关,因此EphA1基因的过表达可能促进膀胱癌的进展。

皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响

目的研究外源皮质酮对部分肝切除（PH）诱导的大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白水平的影响。方法PH前3d对成年雄性SD大鼠进行双侧肾上腺切除术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠,抗酶mRNA及其蛋白水平的测定采用RT-PCR和Western blotting法。结果与对照组（n=6,以下相同）相比,去肾上腺组及10mg/kg、20mg/kg体重皮质酮处理组抗酶mRNA水平变化不明显,而40mg/kg体重皮质酮处理能显著刺激其转录。在PH后5、7、9h,去肾上腺术鼠抗酶蛋白水平显著低于相应时间点的对照组;皮质酮处理后,蛋白水平在所观察的整个实验过程中均显著上升,且剂量越高,蛋白含量越多,尤其在PH后5h,10、20和40mg/kg体重皮质酮处理组分别比同时间点对照组高43%、79%和93%。结论皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶蛋白的合成具有剂量依赖性促进作用。

丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型在人肺腺癌组织表达上调并促进肺腺癌细胞的增殖

目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型(SPINK1)表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达,并分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系。利用SPINK1慢病毒表达载体及小干扰RNA(si RNA),处理人肺腺癌细胞系,光学显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,ELISA或Real-time PCR检测SPINK1表达水平,细胞计数和集落形成法检测肺腺癌细胞生长情况。结果肺腺癌组织SPINK1 mRNA和蛋白表达均上调(均P<0. 0001),SPINK1高表达组患者总生存时间短于低表达组(50. 0个月vs 64. 5个月,P<0. 001)。SPINK1过表达组,肺腺癌细胞上清液SPINK1蛋白高表达(P <0. 05),增殖与克隆形成能力均上调(P <0. 05);SPINK1敲减组,肺腺癌细胞SPINK1 mRNA表达下调,增殖能力下调(P<0. 05)。结论肺腺癌组织SPINK1高表达提示患者预后不良; SPINK1促进人肺腺癌细胞的增殖。

张家口坝上地区人群环氧合酶-2基因多态性、幽门螺旋杆菌感染与胃癌发生风险的相关性分析

目的分析张家口坝上地区人群环氧合酶-2（COX～2）基因多态性、幽门螺旋杆菌（Hp）感染与胃癌发病的关系。方法选取2015年5月～2017年2月于张家口坝上地区居住10年以上的居民200例为研究对象。将研究对象分为胃癌组（n=100）及对照组（n=100）。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR—RFLP）对两组进行基因分型，以Warhin—starry嗜银法检测两组样本中Hp感染情况。然后经非条件性Logistic回归分析COX-2基因单核苷酸多态性（SNP）rs3218625、Hp感染与胃癌发病风险的相关性。结果Logistic回归分析显示COX-2基因SNP rs3218625与胃癌的发生密切相关。基因型GA出现频率越高，胃癌发生风险越高（P〈0．05）。胃癌组Hp感染率为59．0％，显著高于对照组的42．O％（P〈0．05）。COX-2基因SNP rs3218625位点，Hp感染阳性及阴性患者携带基因型GA、AA或等位基因A（GA＋AA）的频率在胃癌组及对照组中均无显著性差异（P〉0．05）。经Logistic回归分析显示，Hp感染与COX-2基因SNPrs3218625无明显相关性（P〉0．05）。结论张家口坝上地区人群COX-2基因多态性可能会增加当地胃癌的发生风险，其中SNP rs3218625的基因型GA是胃癌发生的危险因素之一,而Hp感染与COX-2基因SNPrs3218625无显著相关性。

聚合酶链反应在医学检验中的应用和进展

随着医疗水平的不断发展与完善,医学检验技术越来越趋向于科技化,聚合酶链反应(PCR)是一种体外DNA扩增技术,该技术已经有近三十年的历史,具有操作方便、敏感性高、精准性高等优势,从而广泛地应用在医学及分子生物学等各个领域。PCR在医学检验工作中体现出了较高的应用价值,其应用保证了样品检测的准确性和可靠性,节省了大量的财力和物力,同时还有效地提高了诊断准确率,在临床肿瘤检验、免疫检验、细菌检验等方面发挥着重要的作用。本文针对PCR在医学检验领域中的应用实际情况展开综述,为临床医学检验研究提供借鉴。

中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理

目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19ARF、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况。结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、p19ARF、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05)。结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、p19ARF、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用。

miR-21在结肠癌与癌旁组织中的表达及其临床意义

目的:检测MicroRNA-21(miR-21)在结肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达,探讨其与结肠癌临床病理指标的关系。方法:应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测50例结肠癌组织标本和癌旁组织标本中miR-21的相对表达量,分析其在2种组织中的表达变化,探讨miR-21表达水平与结肠癌发病位置、临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移的关联性。结果:miR-21在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),右半结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于左半结肠癌组织(P<0.05);Ⅲ期和Ⅳ期结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期结肠癌(P<0.05);miR-21表达水平在不同浸润深度结肠癌之间比较差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移结肠癌组织中miR-21表达水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论:相对于癌旁组织,miR-21在结肠癌组织中表达明显上调,且表达水平与发病位置、临床分期及是否有淋巴结转移有关。

不孕女性支原体、衣原体感染与抗子宫内膜抗体的关系(附147例报告)

目的探讨不孕妇女支原体 (ureaplasmaurealyticum ,UU)、衣原体 (chlamydiatranydia ,CT)感染与抗子宫内膜抗体 (antiendometriumantibody ,AEMAb)的关系 ,以揭示抗子宫内膜抗体产生的可能机制。 方法选择不孕妇女 14 7人 ,其中原发不孕 79人 ,继发不孕 68人 ;并选择健康已孕妇女 70人作为对照组。取宫颈分泌物应用荧光定量聚合酶连反应行UU、CT的DNA检测 ,应用酶联免疫吸附法检测血清中AEMAb。结果不孕组UU、CT感染率、AEMAb阳性率与对照组比较均有显著性差异 (P 均 <0 .0 5 ) ;原发不孕与继发不孕患者UU、CT、AEMAb的阳性率相比无显著性差异 ;不孕组中AEMAb阳性患者与阴性患者的UU、CT感染率相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论UU、CT感染及AEMAb均可造成女性不孕 ,AEMAb的产生与UU、CT感染有关。

大鼠脑损伤后氨基胍的神经保护作用

目的探讨大鼠脑损伤后诱导性一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂———氨基胍(AG)的神经保护作用。方法采用大鼠额叶锐器损伤模型,将SD大鼠随机分成氨基胍(AG)治疗组和生理盐水(NS)对照组。用生物化学方法检测NO含量;RT-PCR法及免疫组织化学染色方法观察iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。将两组结果进行比较。结果AG治疗组创伤区及周边NO含量、iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达量较NS组明显降低,凋亡细胞数量也相应明显减少。结论AG能选择性地抑制iNOS表达,减少NO过量产生,从而减少细胞凋亡,发挥神经保护作用。

细丝蛋白A及其mRNA在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chine reaction,RT-PCR),分别检测32例食管鳞癌组织及距食管癌组织边缘5 cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中FLNa蛋白、FLNa mRNA的表达情况。结果在食管鳞癌组织及正常食管组织中,FLNa蛋白的表达阳性率分别为34.4%、84.4%,FLNa mRNA的表达量分别为0.376±0.053、0.517±0.082,FLNa蛋白明显降低(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中FLNa蛋白和FLNa mRNA的表达均降低,可能与食管癌的发生、发展相关。检测FLNa的表达能对食管癌的临床治疗和预后判断有一定价值。

应用PCR-SSP进行HLA-AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAI类基因分型技术并应用于骨髓配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应 (PCR SSP)进行HLA AB基因分型 ,并与HLAI类血清学分型 (微量淋巴细胞毒试验 )进行比较。结果 运用PCR SSP技术共对 2 2例需骨髓移植的病人和 48例供者进行基因分型 ,2例病人确认了HLA完全匹配的亲缘骨髓供者 ,其中 1例已成功进行了骨髓移植 ;基因分型和血清分型比较 ,43例结果完全一致 (6 1.4% ) ,血清分型错误率高达 38.6 % (2 7/ 70 )。结论 PCR SSP分型技术具有准确性高 ,简便快速等优点 。

丙酸氟替卡松对转化生长因子β1蛋白及其mRNA在大鼠变应性鼻炎鼻黏膜中表达的影响

目的探讨丙酸氟替卡松(fluticasone propionate,FP)对转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)蛋白及其mRNA在变应性鼻炎(AR)鼻黏膜重塑过程中表达的影响。方法选健康SD大鼠120只,随机分成对照组、AR组和FP治疗组,每组各40只。在实验的不同阶段取鼻黏膜进行免疫组化染色及RT-PCR检测TGF-β1蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AR组和FP治疗组TGF-β1蛋白及mRNA的表达均显著高于对照组(P=0.000),而FP治疗组鼻黏膜于第8周开始表达明显下降,与AR组比较,有统计学意义(P=0.000)。结论在AR鼻黏膜重塑过程中,FP可有效降低重塑过程中的TGF-β1蛋白及其mRNA表达,从而抑制其重塑过程的发展。

间接免疫荧光法与RT-PCR法检测鼠肺汉坦病毒带毒率

目的对间接免疫荧光法(IFA)和逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)两种检测鼠肺汉坦病毒(HV)的实验方法进行比较,为进一步完善出血热病毒实验室检测方案提供依据。方法采用IFA和RT-PCR对2018年收集的200份鼠肺进行HV检测、分型,统计鼠种和数量。结果锦州市鼠带汉坦病毒率2014年最高为5.42%(11/203),2010年最低为0.95%(1/105)。人间肾综合征出血热发病率2014年最高为6.77/10万,2010年最低为2.27/10万。鼠带毒指数与人间出血热发病率正相关(r=0.75,P<0.05);IFA检测鼠肺HA抗原阳性率为2.00%(4/200);RT-PCR检测鼠肺HA核酸阳性率为4.00%(8/200),两种方法检测结果有统计学差异(χ~2=13.01,P<0.01);锦州地区主要流行株为汉城(SEO)型HV。结论 RT-PCR检测鼠肺HV核酸的敏感性高于IFA检测鼠肺HV抗原的敏感性,可以推广应用RT-PCR检测鼠肺带毒率的实验室检测技术。

人乳头瘤病毒基因检测及分型方法研究进展

流行病学和分子生物学资料表明,人乳头瘤病毒(HPV)的感染能够引起子宫内上皮样瘤变(CIN)及宫颈癌的发生。并且HPV的不同型别致病力也存在差异,高危型别、高病毒载量的持续感染是促使宫颈癌发生的重要因素。因此,HPV感染的早期发现、准确分型及病毒定量对宫颈癌的防治具有重要意义。作者对HPV基因的检测和分型方法如核酸杂交、PCR、荧光定量PCR等,以及各方法的优缺点进行综述。

氯沙坦对大鼠慢性心力衰竭的干预作用

目的通过氯沙坦对慢性心力衰竭(慢性心衰)干预,研究慢性心衰时心肌细胞凋亡变化的原因及其机制,为慢性心衰的治疗提供理论依据。方法采用阿霉素制作慢性心衰大鼠模型,以氯沙坦为干预剂,采用透射电镜、免疫组织化学、RT-PCR及原位缺口末端标记法(TUNEL)对心肌细胞凋亡的形态和凋亡蛋白Bax、Bcl-2及通路蛋白细胞外信号调节激酶(ERK1)、氨基末端激酶(JNK1)和促分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的mRNA表达变化进行研究。结果氯沙坦治疗后,与心衰组动物相比,心肌细胞的超微结构明显好转;凋亡指数明显降低(P<0.01);Bcl-2的含量明显升高而Bax的含量显著下降(Bcl-2χ2=6.81、P=0.0074;Baxχ2=6.6149、P=0.0078,均P<0.01);ERK1mRNA表达明显增加而JNK1mRNA表达则显著下降(q=15.3514,P<0.01;q=22.0156,P<0.01)。结论氯沙坦对慢性心衰的干预作用与ERK1和JNK1途径密切相关,而p38MAPK途径与此过程相关性不大。