聚合酶链反应-酶联免疫法筛选孢子丝菌特异性探针

目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'、M85053及AF117945)进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数(EI)值。结果 PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上;在相同的ELISA条件下,探针U26852显色最强,EI值最高。结论针对28Sr RNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。

质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。

缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。

预制备抗体-DNA偶联物的免疫聚合酶链反应检测HBsAg

目的 探讨一种实用敏感的乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)检测方法。 方法 利用亲和素作为桥梁连接生物素化DNA和抗体 ,形成抗体 亲和素 DNA偶联物。在抗原抗体特异性反应的基础上 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增抗体所连的DNA片段 ,通过检测DNA来判断相应抗原存在与否。结果 免疫PCR检测敏感度为常规酶联免疫试剂盒的 30 0倍。结论 预制备抗体

逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法检测呼吸道合胞病毒及其亚型感染

目的:建立一种呼吸道合胞病毒(RSV)及其亚型核酸检测方法并初步应用于临床,检测浙南地区RSV及其亚型的流行情况。方法:根据RSVG蛋白基因核苷酸序列设计引物和探针,通过逆转录-聚合酶链反应-酶联夹心杂交法(RT-PCR-ELSH)随机检测了浙南地区连续两年冬春季期间202例急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽部分泌物中RSV及其亚型的病毒核酸;与病毒分离培养、直接免疫荧光法(DFA)、OligoDetect试剂盒比较探讨其临床实用性。结果:202例标本中RSV阳性123例,阳性检出率为60.9%,2002～2003年和2003～2004年冬春季分别为68.2%和52.6%;两个冬春季都以RSVA亚型为主,占78.9%,2002～2003年冬春季A亚型占RSV阳性标本中的76.7%,2003～2004年A亚型占82.0%;RT-PCR-ELSH阳性检出率与其他三种方法的阳性检出率差异无显著性(P>0.05)。结论:RT-PCR-ELSH法用于检测RSV及其亚型,是一种灵敏度高、特异性强,方便、快速的方法,非常适用于临床标本的大批量检测和流行病学调查;RSV是引起浙南地区冬春季婴幼儿急性下呼吸道感染的最主要的病原体,并以A亚型为主。

聚合酶链反应和酶联免疫法检测小儿呼吸道常见病毒的研究

目的 探讨小儿急性呼吸道病毒感染快速、特异、准确的检测方法 ,以了解小儿急性呼吸道病毒感染发病情况。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)技术及酶联免疫 (ELISA)技术分别对 2 0 1例急性呼吸道感染患儿及2 0例正常对照组呼吸道分泌物中病毒DNA或RNA抗原及血清中特异性IgM抗体进行了检测。 结果 以两种方法同时检出同一病毒者为感染患儿 ,有 79例阳性 ,阳性率为 39.30 % ;呼吸道合胞病毒 (RSV)及腺病毒 (AdV)检出率分别为 14 .92 %及 17.4 1%。结论 PCR方法与ELISA方法联合检测可提高呼吸道病毒检出的准确性。RSV及AdV是引起该地区小儿急性呼吸道感染特别是肺炎的主要病毒。

酶联免疫法检测PAF受体RNA的聚合酶链反应产物

目的 :建立PCR ELISA法检测PAF受体RNA。方法 :提取 2 0例银屑病病人和 2 0例正常对照组血液单个核细胞标本中的总RNA ,用双标记的PAF R(Biotion与Digoxin标记 )及 β actin(Biotin与Fluorescein标记 )引物进行PT PCR ,用ELISA检测PCR产物 ,用传统的琼脂糖凝胶电泳对照。结果 :ELISA法和琼脂糖凝胶电泳法对 β actin检测结果均为阳性 ;ELISA法检测PAF R ,2 0例病人标本均为阳性 ,2 0例对照组 16例阳性 ;琼脂糖凝胶电泳法检测PAF R ,2 0例病人标本 18例阳性 ,2 0例对照组 16例阳性。结论 :PCR ELISA引物双标记法检测PAF R操作简单 ,有较高的敏感性。

聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

目的 :评价聚合酶链反应 -酶联免疫吸附试验 (PCR- EL ISA)测定乙型肝炎病毒 DNA(HBV DNA)的临床应用价值。方法 :采用定量 PCR- EL ISA法和 EL ISA法分别检测 2 0 8例乙型肝炎患者血清的 HBV DNA和 HBV血清标志物(HBVm ) ,3 4份健康体检者作为阴性对照。结果 :血清 HBV DNA含量 >4× 10 6 拷贝 /ml分别是抗 HBc Ig M组、HBe Ag组、抗 HBc组、抗 HBe组和三抗体组 (抗 HBs、抗 HBBe、抗 HBc) ,其 HBV DNA阳性率分别为 10 0 % ,97.75 % ,62 .3 0 % ,41.67% ,16.0 0 %。结论 :PCR- EL ISA法定量检测 HBV DNA具有较强的特异性和灵敏度 ,为临床早期诊断 ,了解乙型肝炎病毒复制情况 。

逆转录—聚合酶链反应—酶联夹心杂交法定量检测人IL-6mRNA

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的逆转录—聚合酶链反应—微孔板酶联夹心杂交技术定量检测人IL-6mRNA的方法。方法:从人外周静脉血单个核细胞提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物经热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交,用链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物系统检测杂交信号。结果:该方法检测IL-6mRNA的灵敏度明显高于逆转录—聚合酶链反应—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于细胞因子mRNA的定量检测。

酶联免疫吸附法与聚合酶链式反应法对慢性肝病检测结果比较

选取2012年6月至2014年6月本院收治的81例肝病患者作为研究样本,分别对其应用免疫吸附法(ELISA)与聚合酶链式反应法(PCR)法开展相关检验,比较两种检测方法的符合率并分析临床最佳应用方案。结果 ELISA法与PCR法检验的临床符合率分别为71.6%和96.3%,PCR法显著高于前者,具有统计学差异(P<0.05)。慢性肝病患者的临床治疗效果与早期诊断密切相关,采用PCR法开展血清病毒相关检验具有更好准确程度,可充分保证治疗的合理性,值得临床推广应用。

聚合酶链反应-直接测序法在强直性脊柱炎患者HLA-B27检测中的应用

目的探讨聚合酶链反应-直接测序法(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT)检测人类白细胞抗原B27(human leukocyte antigen B27,HLA-B27)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)临床诊断中的价值。方法应用PCR-SBT法和临床常用的IMS-ELISA法对120例疑似AS患者外周血进行HLA-B27检测。以SPSS17.0软件的配对χ2检验和受试者工作特征曲线下面积对两种方法检测HLA-B27在AS诊断中的价值进行评价。结果 120例疑似AS患者中,PCR-SBT和IMS-ELISA法HLA-B27检测阳性率分别为45.83%(55/120),37.50%(45/120)。两种方法检测HLA-B27有统计学差异(P=0.031)。PCR-SBT法敏感度和特异度分别为96.36%,96.92%;IMS-ELISA法的敏感度和特异度分别为69.09%,89.23%。两者的AUC分别为0.966和0.792。结论与传统的IMS-ELISA法相比,在AS的临床诊断中PCR-SBT法检测HLA-B27的敏感度和特异度更高,方法更优。

逆转录-聚合酶链反应诊断IBDV的免疫后感染

用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)对 5个养鸡场的 13份病死鸡腔上囊、腺胃标本进行了检测 ,诊断为免疫后感染传染性腔上囊病毒 (IBDV) 。

酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应检测生殖器标本中的单纯疱疹病毒

目的 评价酶联免疫吸附试验 (ELISA)诊断生殖器疱疹的临床应用价值。方法 对 12 0例具有生殖器皮肤、粘膜损害的病人 ,采用ELISA和分型聚合酶链反应 (PCR)检测其生殖器标本中的单纯疱疹病毒 (HSV) ,两种试验结果不符合者采用第二种PCR检测。结果 12 0例受检者中 ,ELISA检出 4 9例HSV阳性 ,分型PCR检出 5 0例阳性。单纯HSV 1感染者占生殖器疱疹的 10 0 % ,单纯HSV 2感染者占 80 0 % ,HSV 1和HSV 2混合感染者占 10 0 %。在 12 0例标本中 ,10 7例两种试验结果是符合的 ,13例结果不符合。与“扩大金标准”比较 ,ELISA的敏感性、特异性、阳性预期值分别为 92 0 %、95 7%、93 8% ,分型PCR的敏感性、特异性、阳性预期值分别为 94 0 %、95 7%、94 0 %。结论 ELISA法检测HSV感染 ,其敏感性和特异性高 ,方便、快速 ,尤其适合大批量样本的检测 ,值得在临床应用。

聚合酶链反应微孔酶免疫法检测新型隐球菌

目的 建立一种检测脑膜炎新型隐球菌聚合酶链反应 (PCR)产物的微孔酶免疫方法 .方法 对 PCR所用 2条引物进行双标记 ,使扩增产物一端标记上生物素 ,另一端标记上地高辛 ,通过包被在微孔板上的亲和素捕获固定 ,然后用碱性磷酸酶标记的地高辛抗体反应后显色测定 .结果 三种 PCR产物检测方法的对照分析表明微孔板酶免疫法敏感性最强 ,加样量 38n L 时即可显色 ,模板 DNA经过 10 1 1倍稀释后仍为阳性结果 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳则分别可检测到 0 .312 5 μL,1.2 5 μL 及 10 7,10 4稀释度 .对临床脑脊液标本的检测结果微孔板酶免疫法和聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为 10 0 % ,二者敏感性均高于琼脂糖电泳 .结论 建立的方法与常规电泳法相比灵敏准确 ,结果判断客观 ,重复性也较好 ;所测结果可相对反应 PCR产物量的多少 ,此方法可取代电泳法成为常规检测

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核杆菌的临床应用及其评价

目的 对聚合酶链反应 ( PCR) -微孔板杂交法检测结核杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法 收集 1130份临床标本 ,分别用抗酸染色、培养、PCR电泳及 PCR微孔板杂交法进行结核杆菌检测 ,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果 10 0份临床证实无结核病的体液标本经抗酸染色和 PCR电泳 ,分别有 1例和 2例假阳性 ,但经培养和 PCR微孔板杂交法未查出阳性 ;其余 10 30份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果 ,以 PCR微孔板杂交阳性检出例数最高 ( 481/ 10 30 ) ,其次为 PCR电泳 ( 40 6 / 10 30 )、培养 ( 36 5 /10 30 )以及抗酸染色 ( 2 5 6 / 10 30 ) ;χ2 检验结果显示 ,PCR微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著性差异 ( P<0 .0 0 83及 P<0 .0 0 17)。结论 PCR-微孔板杂交方法是特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法 。