端粒酶和CYFRA 21-1测定对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的研究胸腔积液端粒酶活性及CYFRA21-1在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法用聚合酶链反应—酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)检测胸腔积液端粒酶活性,用免疫放射分析法(IRA)测定胸液CYFRA21-1水平,并与细胞学诊断结果进行比较,根据最终的诊断结果,67例患者分成2组:(1)非恶性胸腔积液35例;(2)恶性胸腔积液32例。结果非恶性胸腔积液中端粒酶阳性2例(5.7%),恶性胸腔积液阳性26例(81.3%),端粒酶活性测定诊断恶性胸腔积液的灵敏度为81.3%,特异度94%,正确率93%。CYFRA21-1诊断灵敏度68.8%,特异度87%,正确率73%。端粒酶和CYFRA21-1均阳性者与细胞学诊断符合率57.0%。结论胸腔积液端粒酶活性和CYFRA21-1对鉴别良恶性胸腔积液均有一定的价值,联合检测能提高诊断的准确率。

PCR-ELISA法检测食品中空肠弯曲菌

针对空肠弯曲菌16S rRNA基因应用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,核酸探针5’端标记生物素,将聚合酶链式反应(PCR)、核酸液杂交以及酶联显色技术结合,对检测条件进行优化,建立食品中空肠弯曲菌的聚合酶链式反应-酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)。该方法特异性强、灵敏度高(比PCR高10倍),可以快速、准确检测食品中污染的空肠弯曲菌。该方法可应用于临床诊断、食品卫生监控及出口食品的病原微生物检测等各个领域。

化学发光微粒子免疫分析在丙型肝炎诊断中的应用价值

目的研究化学发光微粒子免疫分析(CMIA)在丙型肝炎诊断中的应用价值。方法收集2014年4月至2015年4月该院住院患者350例血清标本,依照临床诊断分为丙型肝炎病例组(128例)和非丙型肝炎对照组(222例),分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)、CMIA、PCR-荧光探针法和重组免疫印迹法(RIBA)检测,并对结果进行比较。结果丙型肝炎病例组的ELISA,CMIA及PCR-荧光探针法检测阳性率高于非丙型肝炎对照组,RIBA则较低。CMIA的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和约登指数分别为95.3%、95.5%、92.4%、97.3%、95.4%和90.8%。CMIA与ELISA比较,CMIA的特异度、阳性预测值、符合率和约登指数比ELISA高,差异有统计学意义(P<0.05)。CMIA与PCR比较,CMIA的灵敏度、阴性预测值、符合率和约登指数比PCR-荧光探针法高,差异有统计学意义(P<0.05),特异度比PCR-荧光探针法低,差异有统计学意义(P<0.05)。CMIA与RIBA比较,CMIA的灵敏度、阴性预测值和约登指数比RIBA高,差异有统计学意义(P<0.05),特异度比RIBA低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CMIA具有高的灵敏度和阴性预测值,较高的特异度和阳性预测值,符合率高,约登指数高且诊断价值高。

胸腔积液端粒酶活性检测及其临床意义

目的 :探讨端粒酶活性测定对恶性与良性胸腔积液的诊断与鉴别诊断价值。方法 :采用聚合酶链反应 -酶联免疫吸附分析法 (PCR ELISA)检测 4 3例恶性胸腔积液和 2 4例良性胸腔积液的端粒酶活性 ,并与胸腔积液细胞学及癌胚抗原 (CEA)测定结果进行比较。结果 :恶性胸腔积液组端粒酶阳性率为 74 .4 2 % ,良性胸腔积液组阳性率为 1 2 .5 0 % ,差异有显著性 (P <0 .0 0 5 ) ;端粒酶活性检测对恶性胸腔积液诊断敏感性为 74 .4 2 % ,特异性为 87.5 %。恶性胸腔积液组胸腔积液细胞学检查与CEA测定阳性率分别为 5 1 .1 6 %和 4 6 .5 1 % ,均低于端粒酶活性检测 (P <0 .0 1 )。结论 :胸腔积液端粒酶活性检测对恶性胸腔积液诊断有重要价值 ,与细胞学检查。

前列腺素E_2合成酶与类风湿关节炎

目的 研究膜相关前列腺素E2 合成酶 (membrane associatedprostagladinE2 synthase ,mPGES)与类风湿关节炎的关系。方法 用反转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)等方法分析环氧化酶 2(cyclooxygenase 2 ,COX 2 ) ,mPGES基因转录和表达以及前列腺素E2 (PGE2 )合成。结果 白细胞介素 (IL) 1β可诱导滑膜成纤维细胞COX 2 ,mPGES转录水平升高 ,主要的炎性介质PGE2 合成增加。COX 2抑制剂NS 398和mPGES抑制剂MK 886可降低IL 1β诱导的PGE2 合成增加。提示COX 2、mPGES、PGE2 三者密切相关。丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑止剂PD和SB可降低IL 1β诱导的滑膜成纤维细胞COX 2 ,mPGES转录水平。

不同病期慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞端粒酶活性的变化

为探讨慢性粒细胞白血病临床分期与端粒酶活性的关系,采用聚合酶键反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)测定骨髓细胞端粒酶活性。结果发现,正常骨髓细胞端粒酶活性低,慢性粒细胞白血病各期端粒酶活性均高于正常骨髓组(P<0.05),加速期和急变期高于慢性期(P<0.05),但加速期和急变期两组无差别。结论提示,端粒酶活性可做为慢性粒细胞白血病分期和判断预后的有用指标。

不同组合形成乙型肝炎被动免疫性抗体中HBVDNA的检测分析

目的:应用聚合酶链反应(PCR)方法检测乙型肝炎抗原阴性标本中HBVDNA的数量,以指导临床。方法:应用酶联反应免疫吸附法(ELISA)检测出乙型肝炎抗原阴性、免疫性抗体阳性的标本,然后分组检测HBVDNA的数量。结果:496例7种组合形式的被动免疫性抗体中检出HBVDNA86例,阳性率为17.3%。结论:存在着免疫学表现形式为抗原阴性的乙型肝炎,抗原阴性乙型肝炎患者在检测血清学标志物的同时应检测HBVDNA。

端粒酶活性检测在乳腺癌诊断中的意义

[目的 ]探讨细针穿刺乳腺肿瘤组织的端粒酶活性检测在乳腺癌诊断中的意义 .[方法 ]用聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定法检测 79例术前乳腺肿瘤细针穿刺活检标本和大体标本的端粒酶活性 ,并与病理诊断进行比较 .[结果 ]乳腺癌 6 5例中穿刺组织端粒酶呈阳性的为 5 7例 ,阳性率为 88% ;大体组织端粒酶呈阳性的为 5 4例 ,阳性率为 83% .淋巴结转移者端粒酶活性高于无淋巴结转移者 .乳腺良性疾病 14例中端粒酶呈阳性的为 2例 ,阳性率为 14 % .[结论 ]术前乳腺肿瘤穿刺组织的端粒酶活性检测有利于乳腺肿瘤的早期诊断及鉴别诊断 .

腹泻患儿粪便轮状病毒胶体金法检测分析

轮状病毒（RotaVims RV）作为非细菌性版泻的重婴病原体广泛分布于自然界中，它主璎通过粪-口感染多种动物。人作为被感染对象，常在秋冬季引起大范围流行，是婴幼儿急诊和死亡的第二大疾病。检验方法一般有酶联免疫吸附试验（ELISA）、电子显微镜直接观察、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。由于这些方法实验设备要求高、耗费用、耗时间，因此我科采用轮状病毒肢体金法对腹泻患儿进行了检测，结果报道如下。

白细胞介素-1家族细胞因子等位基因对相关细胞因子的产生及全身感染预后的影响

目的 探讨白细胞介素-1(IL- 1)家族细胞因子基因多态性中等位基因对细胞因子m RNA表达、蛋白质合成以及全身感染预后的影响。方法 选择全身感染患者及健康志愿者各6 0例。分离健康志愿者外周血单核细胞,体外培养并给予脂多糖(L PS)刺激,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析细胞因子IL -1α、IL -1β、IL 1ra m RNA表达,酶联免疫吸附法(EL- ISA)检测细胞因子浓度。盐析法提取所有受试者基因组DNA,行IL- 1A(内合子6 ,VNTR) ,IL- 1B(5 11,RFL P)及IL- 1RN (内合子2 ,VNTR)基因多态性分析。结果 与健康志愿者比较,全身感染患者中等位基因IL -1RN2携带者显著增多,而IL- 1A2、IL -1B2及IL 1RN2携带者病死率增加。体外研究表明,等位基因IL RN2较IL 1RN 1携带者外周血单核细胞在受L PS刺激时细胞因子IL- 1ra分泌及m RNA表达显著增加,而IL- 1A、IL- 1B各等位基因不影响相应细胞因子表达。结论 遗传因素可能是导致全身感染患者发生不同程度炎症反应的重要原因。等位基因IL- 1RN2通过上调细胞因子IL- 1ra表达,影响全身感染患者预后,可能是全身感染的高危遗传学标志。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制烫伤诱导的小鼠皮肤巨噬细胞炎症蛋白-2的表达

目的探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对局部烫伤诱导的小鼠皮肤组织巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达的影响。方法将52只昆明种小鼠随机分为空白对照组、烫伤组和烫伤EGCG处理组,其中48只小鼠进行局部皮肤烫伤。利用实时定量PCR和ELISA法检测皮肤组织MIP-2 mRNA和MIP-2蛋白水平。结果局部烫伤可引起受损部位皮肤组织的MIP-2 mRNA和MIP-2水平升高,而涂敷0.2g/kg EGCG膏剂可使MIP-2表达水平下降。结论 0.2g/kg EGCG膏剂抑制局部烫伤诱导的皮肤组织MIP-2表达,减弱由MIP-2引起的炎症反应,促进受损皮肤修复。

MiR-9-5p调控瞬时受体电位M7对心肌缺血/再灌注大鼠的保护作用

目的探讨miR-9-5p调控瞬时受体电位M7(TRPM7)对心肌缺血/再灌注(MIR)大鼠的作用。方法将32只SD大鼠分为假手术组、模型组、miR-9-5p过表达组及空载体对照组,通过左冠状动脉结扎法建立MIR模型,假手术组不结扎,miR-9-5p过表达组和空载体对照组于模型建立前24 h分别尾静脉注入miR-9-5p agomir和agomir NC。通过HE染色观察各组大鼠心肌损伤情况;Real-time PCR检测各组大鼠心肌组织中miR-9-5p表达水平;酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)水平以及心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况;双荧光素酶实验验证miR-9-5p与TRPM7的关系;免疫印迹法检测各组大鼠TRPM7、Bcl-2、Bax、磷酸化核因子κB 65(p-NF-κB p65)、toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果MiR-9-5p在大鼠心肌组织中低表达(P<0.05);miR-9-5p过表达能够降低CK-MB、cTnI、LDH表达水平,改善大鼠心肌损伤程度;与模型组相比,miR-9-5p过表达组心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA、IL-6、TNF-α及IL-1β含量均下降,而Bcl-2蛋白表达和SOD含量上升(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示,TRPM7为miR-9-5p的靶基因,且miR-9-5p过表达组TRPM7、p-NF-κB p65、TLR4蛋白表达均较模型组降低(P<0.05)。结论MiR-9-5p通过调控TRPM7抑制心肌缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应,并抑制TLR4/NF-κB通路。

脐带间质干细胞移植治疗对MRL/lpr狼疮鼠单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的:探讨脐带间质干细胞(UC-MSCs)治疗MRL/lpr狼疮鼠的作用机制。方法:24只MRL/lpr鼠随机分为UC-MSCs1次移植治疗组(G1)、UC-MSCs3次移植治疗组(G2)、对照组(G3)。酶联免疫吸附法检测血清和尿液单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,蛋白印迹法检测肾脏MCP-1蛋白水平的表达,实时定量PCR检测肾脏MCP-1基因mRNA表达,免疫组化检测MCP-1蛋白在肾脏表达。结果:(1)29周时G2组血液MCP-1水平为827.70±259.36pg/mL,显著低于G3组1 325.45±352.28pg/mL(P<0.05);28周时G2组尿液MCP-1为239.93±31.47pg/mL,显著低于对照483.52±184.37 pg/mL(P<0.01)。(2)G2组(0.30±0.02)和G1组(0.40±0.02)MCP-1蛋白表达与G3(0.67±0.05)组比较差异有统计学意义(P<0.01);G2组也显著低于G1组(P<0.05)。(3)G2组(0.30±0.01)和G1组(0.39±0.02)MCP-1基因mRNA表达显著低于对照组(0.79±0.15)(P<0.05),G2组显著低于G1组(P<0.05)。(4)MRL/lpr鼠MCP-1主要定位于肾小球系膜区和肾间质炎性细胞浸润处及肾小管。G3组肾小球系膜区强表达MCP-1,治疗G1、G2组表达明显减弱。结论:UC-MSCs可能通过抑制MCP-1表达而发挥治疗作用。

慢性乙型肝炎346例血清学指标检测结果分析

目的:探讨慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV PreS1-Ag)、乙肝五项、HBV-DNA和肝功能之间的关系及其联合检测的临床应用价值。方法:分别采用酶联免疫法、时间分辨免疫荧光分析法、荧光定量-聚合酶链反应法、全自动生化分析仪检测346例慢性乙型肝炎患者的前S1抗原、乙肝五项、HBV-DNA含量以及肝功能指标。结果:慢性乙型肝炎346例患者中,HBV PreS1-Ag(+)214例(61.8%),HBV-DNA(+)230例(66.5%),两者间呈正相关(P<0.05);HBeAg(+)和HBeAg(-)标本中HBV PreS1-Ag(+)率分别为86.1%和50.8%;慢性乙型肝炎患者肝功能指标中的ALT、AST、GGT异常率较其他指标高,其中ALT异常率最高(52.6%),AST异常率次之(49.1%)。结论:HBVPreS1-Ag与HBV-DNA相关性较好,在一定程度上HBV PreS1-Ag可替代HBV-DNA,同时与HBeAg相比,更能反映病毒复制情况。ALT、AST是较灵敏的肝功能指标。慢性乙肝患者可以HBV PreS1-Ag、ALT及AST作为长期随访指标。

转基因食品检测方法的现况与进展

为给转基因食品检测提供参考 ,介绍包括除草剂生物分析法 (herbicidebioassays)、western印迹法 (Westernblot)、酶联免疫吸附试验法 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)、southern印迹法(Southernblot)、聚合酶链反应法 (PolymeraseChainReaction ,PCR)在内的蛋白质检测和DNA检测方法。一些新的方法如近红外光谱法 (near infraredspectroscopy)、DNA微阵列技术法 (Microarray)等略做介绍。对这些方法的基本原理、优缺点和应用范围以及存在的问题进行了分析 ,可供转基因食品检测研究选择分析方法时借鉴。

ELISA检测HBsAg结果在临界值附近的体检者感染HBV的风险分析

目的探讨ELISA检测血清标本HBsAg结果在临界值附近(S/CO值0.8~2.5)的体检者感染HBV的风险。方法选用CLIA复检结果一致的127份血清标本分别进行胶体金法、PCR、ELISA两种试剂检测。结果 CLIA检出阳性106份,HBsAg ELISA试剂①(检出阳性92份)、试剂②(检出阳性89份)阳性率与CLIA比较,差异有统计学意义(P<0.05);PCR检出阳性109份,与CLIA比较,差异无统计学意义(P > 0.05);胶体金法检出阳性标本2份,与CLIA比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ELISA检测HBsAg结果在临界值的体检者存在HBV感染的可能,对可疑标本应联合应用PCR或CLIA进一步检测。

神经生长因子在食管鳞癌细胞中的表达及分泌

目的探讨神经生长因子(NGF)与食管鳞癌细胞分化的相关性。方法采用有限稀释法分选出圆形和梭形单细胞克隆,采用无血清悬浮培养获得细胞球细胞,贴壁的Eca109细胞分别在含血清和不含血清培养基中培养48h;分别采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和免疫印迹法,检测NGF在食管鳞癌细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达;免疫荧光技术检测NGF在食管鳞癌细胞中的表达定位;免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中NGF的表达定位;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测NGF在Eca109细胞培养基中的分泌情况。结果在Eca109细胞中能检测到NGF的mRNA水平和蛋白水平的表达,其中NGF在细胞球细胞中的mRNA水平和蛋白水平的表达量最高。食管癌组织中检测到NGF表达于细胞质。Eca109细胞在无血清培养条件下能够分泌NGF,且明显高于含血清培养基中的含量。结论食管癌细胞系Eca109表达并分泌NGF,并且食管癌组织中表达NGF,NGF可能在维持食管鳞状细胞癌的干细胞特性发挥了重要作用。