半套式聚合酶链反应检测牛奶中部分肠道致病菌

目的 建立一套食物中的单核细胞增生性李斯特氏菌、耶尔森氏菌和副溶血性弧菌等肠道致病菌的快速检测方法。方法 采用裂解法提取DNA与各自的三条引物进行二次聚合酶链反应扩增(简称半套式PCR),检测模拟阳性牛奶中部分肠道致病菌。结果 常规PCR能检出100个活菌的存在,在其产物进行半套式PCR检测时有10个活菌存在时即可扩增出特异性产物,提高10倍。最低检测限可达10 cfu(集落形成单位)。结论 本方法具有特异性强、敏感性高、简便快速等特点。

逆转录多重套式聚合酶链反应在儿童病毒性脑炎病原学研究中的应用

目的探讨早期同步检测病毒性脑炎(VE)主要病原新方法.方法应用逆转录多重套式聚合酶链反应(RT-M-nPCR)对100例VE患儿及73例对照组脑脊液(CSF)标本进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA与肠道病毒(EV)RNA同步检测.结果整个过程约需5 h.该法与ELISA及经典nPCR方法比较,符合率分别为96%及100%.100例VE患儿CSF标本中,HSV阳性18例,EV阳性17例,在100例VE中,有26例重症,其中HSV感染14例(53.85%),EV感染7例(26.92%),不明病原5例(19.23%).不同病原检出率与年龄的关系:年龄～3岁、～7岁、～14岁HSV分别检出7.4%、11.9%、35.5%,EV分别检出25.9%、19.05%、6.5%.结论RT-M-nPCR是一种能在早期同步检测HSV及EV的具有巨大潜在应用价值的病原检测技术;在VE重症中HSV感染最常见;HSV感染在年长儿发病率高,而EV感染在学龄前及婴幼儿中多见.

应用套式聚合酶链反应技术分析细菌与胆固醇结石形成关系的初步研究

目的 :旨在从分子水平研究细菌感染与胆固醇结石形成之间的关系 ,以期阐明胆固醇结石发病的分子机理和探讨可能防治的新途径。 方法 :从 36例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取 DNA,应用套式聚合酶链反应 ( NP- PCR)技术 ,从中特异性地扩增细菌 DNA片段。 结果 :发现 30例 ( 83.33% )胆固醇结石中有细菌 DNA存在。其中胆固醇含量在 30 %～ 69%之间 6例 ( 6/ 6) ;70 %～ 90 %之间 14例 ( 14/ 17) ;>90 % 10例 ( 10 / 13) ,尚未发现结石中胆固醇和水分含量多少与细菌 DNA存在与否有关。采用 16S r RNA基因序列对照分析鉴定细菌种类 ,在 10例( 2 7.78% )胆石中发现与大肠杆菌相似的 DNA片段 ;从 8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石中得到痤疮丙酸杆菌型 DNA序列 ;2例 ( 5.56% )胆石中残留的细菌 DNA片段与化脓性链球菌相关 ;8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石内细菌的 DNA片段具有多样性 ,类似于大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、艰难梭状芽胞杆菌或其它未鉴定细菌 ,可能有多种细菌混合感染。另有 2例胆石的细菌 DNA分子量较低 ,不同于大肠菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿色假单胞菌 ,归类于其它未鉴定细菌。 结论 :证实多数胆固醇结石内有细菌 DNA存在。至于这些微生物在胆固醇结石形?

套式聚合酶链反应在豚鼠巨细胞病毒宫内感染模型中的应用价值

目的 运用套式聚合酶链反应 (N -PCR)检测豚鼠巨细胞病毒 (GPCMV)宫内感染 ,并探讨N -PCR在模型建立中的应用价值。方法 选择无感染史豚鼠 ,受孕后腹腔接种GPCMV ,分娩后 2 4h内处死 ;观察妊娠结局 ,运用N -PCR检测亲代及子代感染情况 ,并对标本进行病理学检查。N -PCR的特异性实验设阴性、空白和阳性对照。结果 感染孕鼠出现病毒血症征象 ,胎仔出现流产、死胎等异常结局。N -PCR检测显示 ,亲代 10 0 % ( 10 / 10 )感染 ,子代 96 .0 % ( 2 4 / 2 5 )感染 ,且感染脏器均出现非特异性组织病理学变化。N -PCR有较高的GPCMV检测特异性和灵敏性。结论 N -PCR检测GPCMV宫内感染 ,简便、快速、灵敏、准确 。

用双重式聚合酶链反应技术检测鼠疫现场材料的应用研究

采用双重式聚合酶链反应 (Pla- F1- PCR)技术 ,对文山县鼠疫现场部分材料经 8% Clexe- 10 0处理后进行扩增 ,以探讨本法在现场的应用 ,结果从采集的 11份材料 (鼠类 10份 ,病人淋巴穿刺液 1份 )中扩增出 4份阳性 ,高于常规实验诊断 。

双重式聚合酶链反应检测印鼠客蚤鼠疫菌的观察

为建立蚤类感染鼠疫的快速诊断方法 ,应用双重式聚合酶链反应 (PL- FI- PCR)技术 ,对感染鼠疫菌的 4 0只印鼠客蚤进行检验 ,同时单体拉胃培养作比较。结果显示细菌培养阳性 2 2只 ,双重式聚合酶链反应阳性 4 0只 ,阳性率后者明显高于前者 ,且特异性扩增带比较清晰、典型、稳定。

套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBcVccDNA

目的:建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。方法:根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列,设计两套相对保守的引物,建立HBV cccDNA套式PCR,并用该法检测200例慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA。结果:该法检测200例慢性乙型肝炎患者,HBV cccDNA阳性率为60%。结论:套式PCR法简便、灵敏,可用于测定PBMC中HBV cccDNA。

套式聚合酶链反应直接测序法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因

目的 建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱 β 内酰胺酶菌TEM全基因 ,以便TEM分型和发现新的亚型。方法 根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列 ,在保守区自行设计 4条引物 ,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因 ;并对A段作正向测序 ,B段作反向测序。结果 大肠埃希菌TEM 1、TEM 2、TEM2 6等 3种典型菌株均成功扩出A、B两段 ,产物直接测序波峰锐利 ,信噪比值高。该三株菌测得的序列与已在Genbank登录的序列一致。

套式-聚合酶链反应在山东省恙虫病检测中的应用

目的 :利用分子生物学手段对山东省部分地区的人和鼠进行调查 ,了解恙虫病在山东省的感染情况。方法 :采用套式 -聚合酶链反应 (nested- PCR)技术 ,对在山东省 6个市 (县、区 )捕获的野鼠或家鼠的肝、脾、肾组织标本 ,以及临床诊断为恙虫病的病人血标本进行检测。结果 :共检测鼠脏器标本 198份 ,阳性 8份 ,阳性率为 4 .2 4 % ;共检测临床诊断恙虫病病人血标本 14份 ,阳性 7份 ,阳性率为 5 0 %。结论 :首次在山东省黄河以北地区捕获的鼠体内检测到恙虫病东方体 ,其中两只鼠为褐家鼠 。

微滴式数字聚合酶链反应在传染病检测中的应用

1999年,VOGELSTEIN等[1]正式提出了数字聚合酶链反应(dPCR)的概念。目前,dPCR主要分为3类:微反应室/孔板数字PCR、微流控芯片数字PCR和微滴式数字聚合酶链反应(ddPCR)[1-3]。其中,ddPCR是利用微滴发生器将反应体系一次性生成单分子水平的油包水微滴,再独立地进行循环扩增反应,扩增结束后分别对每个反应单元的荧光信号进行采集,有荧光信号的标记为“1”,无荧光信号的标记为“0”,使用泊松概率分布函数进行计算,最终得出反应体系最初的DNA拷贝量。ddPCR与实时荧光定量PCR(qPCR)采用相同的引物及探针,通过有限稀释法和泊松分布原理直接定量分析,计算出DNA水平。

微滴式数字聚合酶链反应在病原体检测中的研究进展

聚合酶链反应是一种分子生物学技术,用于使某些脱氧核糖核酸(DNA)片段扩增,它是一种常见且不可或缺的技术,已应用于许多领域,特别是在临床实验室中。第三代聚合酶链反应,微滴式数字聚合酶链反应(ddPCR),是常规聚合酶链反应方法的生物技术改进,可用于直接定量和克隆扩增DNA。ddPCR现在广泛用于低丰度核酸检测,可用于感染性疾病的诊断。该文介绍了ddPCR检测手段的发展及原理,总结了其在病毒性疾病、细菌性疾病和真菌性疾病临床诊断中的潜在优势:ddPCR对低丰度病原体的检测更灵敏、准确、可重复,可能在未来临床应用中是比定量聚合酶链反应更好的选择。

微滴式数字聚合酶链反应在重症感染病原学诊断中的应用进展

重症感染是导致人类死亡的主要病因之一,尤其对于重症监护病房患者,传统的病原微生物检测手段存在灵敏度和特异度低、耗时长等问题,严重影响脓毒症患者病原学早期快速诊断,导致其病死率增加。近年,随着分子诊断技术在重症感染疾病中的广泛应用,病原学的诊断效率及准确性均显著提高。其中,微滴式数字聚合酶链反应(ddPCR)凭借高灵敏度、高特异度、绝对定量等优势,在病原菌载量动态监测和抗生素疗效评估中具有巨大潜力。因此,ddPCR技术或可提高重症患者的诊断率,改善其预后。

筑巢式聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARαmRNA

目的 :观察急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者PML RARαmRNA的表达情况。方法 :应用逆转录筑巢式聚合酶链反应(NestedPCR)检测了 3 0例APL患者的PML RARαmRNA。结果 :3 0例APL患者中 2 2例检测到PML RARαmRNA ,其中 16例为L型 ,6例为S型。结论 :NestedPCR是检测APL患者PML

套式聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中胎儿细胞

目的 探讨利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的可行性。 方法 采用套式聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)技术扩增孕妇外周血中男性胎儿性别决定基因 (sex-determ ining region Y,SRY) ,并与胎儿实际性别相对照。 结果 74例孕 7～ 4 0周的孕妇中 38例怀男胎 ,其中 2 3例扩增出 Y特异带 ;另外 36例怀女胎孕妇中 ,仅 1例出现 Y特异带。SRY套式 PCR扩增系统在孕中期 ,孕晚期检查孕妇外周血中男胎灵敏度 (72 .7%、 71.4 % )、特异度 (10 0 .0 % )和符合率 (87.0 %、 90 .5 % )高 ,误诊率为 0 ,而在孕早期灵敏度 (5 0 .0 % )、特异度 (90 .0 % )及符合率 (6 3.3% )较低 ,误诊率 (10 .0 % )、漏诊率 (5 0 .0 % )较高。 结论 胎儿细胞在孕早期即存在于孕妇外周血中 ,但直接利用孕妇外周血中胎儿细胞检查