E-选择素基因多态性及血清可溶性水平与慢性HBV感染临床结局的关系

目的:探讨E-选择素(E-selectin)基因第2号外显子G98T和第4号外显子A561C多态性及血清可溶性水平与慢性HBV感染临床结局之间的关系.方法:从外周血中提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测367例慢性HBV感染者(其中慢性HBV携带者97例,慢性乙肝101例,肝硬化121例,肝癌48例)和281例健康对照者E-选择素基因G98T和A561C位点多态性,同时采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组可溶性E-选择素(sE-选择素)水平.结果:E-选择素A561C多态性中A/C+C/C基因型和C等位基因频率在肝硬化组与对照组相比差异有统计学意义(P=0.006,0.002).A/C+C/C基因型患肝硬化的风险是AA基因型的2.45倍(OR=2.45,95%CI:1.28-4.72).E-选择素G98T多态性中各基因型频率和等位基因频率在各病例组与对照组相比差异无统计学意义,但在肝硬化患者中,Child-pughB+C级与A级相比较,G/T+T/T基因型频率差异有统计学意义(P=0.034),G/T+T/T基因型发展到Child-pughB或C的风险是GG型的3.07倍(OR=3.07,95%CI:1.05-8.97).慢性乙肝组和肝硬化组血清sE-选择素水平明显高于对照组(P<0.01);在肝硬化组中,血清sE-选择素水平从Child-pughA级到C级明显降低(P<0.05);在各组中,C等位基因携带者血清sE-选择素水平明显高于A等位基因携带者(P<0.05).结论:E-选择素A561C基因多态性可能与慢性HBV感染后肝硬化的发生相关,并参与调控血清可溶性E-选择素的表达;E-选择素G98T基因多态性与慢性HBV感染后的临床结局无相关性,但可能与肝硬化的严重程度相关.

原发性高血压患者的β-纤维蛋白原-455G/A基因多态性研究

目的 探讨 β-纤维蛋白原 - 4 5 5G/A基因多态性在山东地区汉族人群的分布以及该多态性与原发性高血压病的关系。方法 应用聚合酶链反应和限制性内切酶片段长度多态性技术 (PCR RFLP)检测了 14 8例健康人和 14 9例原发性高血压患者的 β Fg 4 5 5G/A基因多态性 ,比浊法测定血浆纤维蛋白原水平。 结果 β Fg 4 5 5G/A基因多态性分布在患病组和对照组均符合Hardy Weinberg平衡定律。在两组内A等位基因携带者血浆纤维蛋白原水平均显著高于GG基因型者。A等位基因频率在高血压组 (0 171)略高于正常对照组 (0 15 2 ) ,但差别无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 β Fg 4 5 5G/A基因多态可能不是原发性高血压的遗传易感标志。

α_1-抗糜蛋白酶基因多态性与阿尔茨海默病相关性探讨

目的 :探讨阿尔茨海默病 (AlzheimerDisease,AD)患者中α1 抗糜蛋白酶 (AACT)基因的多态性及其与AD的相关性。方法 :利用聚合酶链反应 (PCR) 限制性片段长度多态性 (RFLP)技术 ,对 4 8例AD患者及 86例对照者的AACT信号肽基因进行分型 ,并进行AD与AACT信号肽基因多态性的相关分析。结果 :①AD病人AACT信号肽A/T基因型占 2 7 1% ,明显低于对照组的 5 1 2 % (P <0 0 1,RR =0 35 5 ) ,T/T占 6 0 4 % ,明显高于对照组的 37 2 % (P <0 0 1,RR =2 5 76 ) ,A/A占 12 5 % ,与对照组 11 6 %无显著性差异 (P >0 0 5 ,RR =1 0 86 )。②AD病人中AACT信号肽等位基因A的频率为 2 6 0 % ,T的频率为 74 0 % ,与对照组 (A37 2 %、T 6 2 8% )无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :AD病人的AACT T/T可能与AD存在正相关 ;而AACT

湖北地区汉族人群E-选择素第4外显子S128R基因多态性研究

目的 研究E 选择素基因第 4外显子S12 8R多态性在湖北地区健康汉族人群中的分布。方法 随机选择 16 5例湖北地区无血缘关系的汉族健康人 ,用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术检测E 选择素基因型 ,并进行不同种族间比较。结果 湖北地区汉族健康人群基因型以SS型最为常见 ,其次为SR型 ,其频率依次为 92 .7%和 7.3% ;其等位基因以S型最为常见 ,其次为R型。与美、德、英等国人群相比 ,该位点多态性均存在统计学差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 湖北地区汉族人群E 选择素基因第 4外显子 12 8位点存在S/R多态性 ,其在不同种族间的分布可能存在显著性差异。

AT1R及MCP-1基因多态性与脑梗死患者预后的相关性分析

目的探讨血管紧张素受体Ⅰ型(AT1R)和人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因多态性与脑梗死(CI)患者预后相关性。方法将2018-01—2019-10郑州市惠济区人民医院神经内科收治的145例首发性CI患者纳入观察研究,均接受专科对症治疗,依照改良Rankin量表(mRS)评测预后,通过连接酶反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测AT1R位点A1166C及MCP-1基因位点-2518多态性,对比分析预后良好和不良患者的检测数据。结果随访评估本组预后良好90例(mRs评分≤1分),预后不良55例(mRs评分>1分);通过检测,预后良好组的AT1R AA、AC基因型频率及C等位基因频率分别为86.67%、23.33%、5.56%,预后不良组分别为45.45%、54.55%、70.35%,相比差异有统计学意义(P<0.05);预后良好组MCP-1-2518 GG基因型频率为27.78%、G等位基因频率为43.33%,低于预后不良组的36.36%、54.55%(P<0.05)。结论AT1R及MCP-1基因多态性和CI的预后存在一定相关性。

肾素血管紧张素系统三个关键基因多态性与冠心病关系分析

目的 研究肾素血管紧张素系统 (RAS)三个关键基因———血管紧张素原 (AGT)、血管紧张素转换酶 (ACE)及血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的多态性与冠心病的相关性。方法 用聚合链 限制性片段长度多态性技术 (PCR RFLP)检测 94例正常人和 130例造影确诊冠心病患者的AGT、ACE及AT1R多态性。结果 冠心病组三个基因的各等位基因频率与对照组无明显差异 (P>0 0 5 )。两两结合后与对照组相比较亦无显著差异。

中国北方汉族人载脂蛋白E基因多态性与血脂代谢的关系

目的从基因水平探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与中国北方汉族人血脂的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术测定150例心血管病患者(病例组)和130例正常对照者(对照组)的ApoE基因多态性,并测定血脂代谢的指标,研究ApoE基因多态性与血脂水平的关系。结果在3种等位基因间,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及载脂蛋白B(ApoB)水平均按ε4基因携带者>ε3基因携带者>ε2基因携带者的顺序递减,差异有显著性(对照组均P<0.05,病例组均P<0.01),而三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)水平差异无显著性(均P>0.05)。结论ApoE基因多态性影响中国北方汉族人的血脂代谢,ε4等位基因对TC、LDL-C及ApoB有升高作用。

血小板粘合素α_2β_1基因多态性与2型糖尿病微血管病变相关性研究

目的 探讨血小板粘合素α2 β1分子α亚单位第 7内含子BglⅡ限制性片段多态性与2型糖尿病微血管并发症 (DMAP)的关系。方法 运用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术 (PCR RFLP)检测 2 10例 2型糖尿病 (DM )患者的基因型 ,其中无微血管并发症 (NCD) 94例 ,糖尿病视网膜病变 (DR) 62例 ,糖尿病肾病 (DN) 5 4例 ,对照组 65例。结果 ( 1)DR组BglⅡ ( +/+)基因型频率及BglⅡ ( +)等位基因频率明显高于NCD组及对照组 ,差异有显著性 ;( 2 )BglⅡ ( +/+)基因型频率及BglⅡ ( +)等位基因频率在DN组与NCD组之间及NCD组与对照组之间分布的差异均无显著性。结论 血小板粘合素α2 β1分子α亚单位遗传变异与DR发生相关 ,与DN及DM发生无关 ;BglⅡ ( +)等位基因可能是DR的易感基因 。

应用多重PCR-RFLP技术检测头发、口腔腭粘膜的ABO基因型

目的 探讨对头发、口腔腭粘膜等组织标本进行ABO基因分型的可行性。方法 应用多重聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (多重PCR RFLP)技术 ,检测 8例头发和 6例口腔腭粘膜标本的ABO基因型 ,标本的基因组DNA经 2对引物同时进行扩增 ,扩增后的产物同时用MspⅠ和KpnⅠ 2种限制酶进行消化 ,通过消化后产生的片段即可判断结果。然后将分析结果与血清学技术检测的ABO表现型和受检者血液标本的基因型进行比较。结果 14例标本共检出 6种ABO基因型 ,与表现型和血液标本的基因型结果完全一致。结论 该方法操作方便 ,重复性、稳定性好 ,可鉴定 15种基因型 ,应用于法医学鉴定具有可行性。

血小板GPIa基因多态性与糖尿病视网膜病分型的关系

目的:探讨血小板糖蛋白Ia/IIa分子Ia链(GPIa)BglⅡ限制性片段长度多态性与2型糖尿病视网膜病(DR)分型的关系。方法:运用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测180例2型糖尿病(DM)患者(DR+组62例,DR-组118例)及85例正常对照组的(CON)基因型。其中单纯型DR44例,增殖型DR18例。结果:(1)DR+组BglⅡ(+/+)基因型频率及BglⅡ(+)等位基因频率-明显高于DR-组及CON组(P<0.01),BglⅡ(+)等位基因与DR明显相关(OR=2.01,95%CI,1.29～3.12);(2)单纯型DR组与增殖型DR组BglⅡ基因型及等位基因频率分布差异无显著性(P>0.05)。结论:BglⅡ(+)等位基因可能是2型DM合并视网膜病变的危险因子,但与DR的分型无明显关联。

实验用小型猪封闭群中OB基因多态性的研究分析

为研究分析实验用小型猪封闭群中肥胖(Obese,OB)基因型,本研究采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术检测了实验用小型猪封闭群核心群中30头小型猪的OB基因。结果表明,OB基因有三种基因型:AA\AB\BB,在30个检测个体中,5个个体为AA基因型,19个个体为AB基因型,6个个体为BB基因型。

基于线粒体DNA多态性鉴定烟台海鲜市场鱼种

由烟台海鲜市场随机采集具有相对重要商业价值的10种海鱼(小黄鱼、牙片、鲅鱼、面条鱼、鲐鱼、鲳鱼、鲈鱼、偏口、黑鱼、白姑鱼),利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对鱼种进行鉴定.首先提取10种海鱼的基因组DNA,利用自行设计的通用引物对其线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ基因(MT-co3)进行PCR扩增,对扩增产物克隆、测序,用NCBI数据库检索,确定了10种海鱼的鱼种.依据测序结果进行限制性内切酶酶切分析,选用NlaⅢ和HinfⅠ2种内切酶进行酶切,获得了各种鱼类特异的酶切片段图谱.研究结果表明,PCR-RFLP能有效地区分以上10种海鱼,在鱼种鉴定上具有简便、准确的优势,可为鱼类食品检测提供科学依据.

TNFR1基因多态性与早期自然流产的相关性

目的探讨肿瘤坏死因子受体1基因启动子区-383A/C和第1外显子+36A/G的多态性与不明原因早期自然流产的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测256例不明原因早期自然流产患者和138例对照组肿瘤坏死因子受体1基因-383和+36位点多态性,比较两组基因型和等位基因的分布频率。结果肿瘤坏死因子受体1基因启动子区-383位点的CC、AC和AA基因型在不明原因早期自然流产组中分别为4.69%、13.28%、82.03%,在对照组中分别为2.90%、8.70%、88.41%,两组基因型分布的频率无显著性差异(χ2=2.75,P>0.05);肿瘤坏死因子受体1基因第1外显子+36位点的GG、AG和AA基因型在不明原因早期自然流产组中分别为2.75%、12.84%、84.41%,在对照组中分别为1.56%、20.13%、78.13%,两组基因型分布频率比较亦无明显差异(χ2=2.63,P>0.05)。结论肿瘤坏死因子受体1基因-383和+36位点多态性分布与不明原因早期自然流产的发病无明显相关性。

广州番禺区汉族人群2型糖尿病与Preproghrelin基因rs96217位点单核苷酸多态性的关系

目的探讨广州番禺区汉族人群2型糖尿病与Preproghrelin基因rs96217位点单核苷酸多态性的关系。方法提取番禺汉族人群中非糖尿病的正常人和2型糖尿病患者的DNA,采用PCR-RFLP,分析对照组和T2DM组Preproghrelin基因rs96217位点的基因型及组间基因型、等位基因频率分布的差异。结果对照组116例样本中,CC 96例、AC 20例,AA 0例;基因型频率分别为:82.8%、17.2%、0。T2DM组118例样本中,CC 89例、AC 24例、AA 5例,基因型频率分别为:75.4%、20.3%、4.3%。组间基因型和等位基因频率差异无统计学意义。结论广州番禺区汉族人群2型糖尿病与Preproghrelin基因rs96217位点单核苷酸多态性之间未见显著相关性。但T2DM组中发现AA基因型,而对照组未显,原因有待进一步研究。

PCR-RFLP技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用

目的:探讨mtDNA分析技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用。方法:应用限制酶RsaI和MnlI消化mtDNA D-LOOP区(HVI16106-16297)PCR扩增产物,聚丙烯凝胶电泳进行RFLP分型的方法,对随机个体血液样品150例,正常组织10例和甲醛固定石蜡包埋组织5例进行检验。结果:在150例随机个体中,RsaI和MnlI酶切分别发现3和8种表型。在10例正常组织中,各个组织的带型完全相同。5例包埋组织的RFLP分型与对照组织一致。结论:PCR-RFLP技术适合于甲醛固定石蜡包埋组织的检验。

碱基错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点的多态性

目的:细胞周期蛋白H(CCNH)基因rs3093816位点的多态性与许多癌症的发生风险升高有关,但由于此位点缺少合适的限制性内切酶位点,使聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)的使用受到限制。因此,本研究拟建立碱基错配长PCR引物法用于检测CCNH基因rs3093816位点。方法:通过创造性酶切位点PCR-RFLP方法在CCNH扩增产物中引入新的酶切位点,然后利用Cvi Q I酶区分PCR产物。本研究同时设计了碱基错配长PCR引物和碱基错配相对短PCR引物,比较分析碱基错配长PCR引物是否更简便经济。结果:与短引物法相比,长引物占扩增总片段的比例越大,酶切产物越容易区分,凝胶电泳需要的时间越短。结论:成功建立了错配长PCR引物法检测CCNH基因rs3093816位点。

溃疡性结肠炎患者和人类白细胞抗原-DQA_1基因关联的研究

目的 研究广东地区汉族人人类白细胞抗原 DQA1 (HLA DQA1 )基因与溃疡性结肠炎 (UC)的遗传关联。方法 应用HLA基因聚合酶链反应 限制性片段长度多态性核苷酸分型技术 ,以等位基因特异性的限制性内切酶 (ApalⅠ、BsajⅠ、HphⅠ、FokⅠ、MboⅡ、MnlⅠ )消化DQA1座位特异的PCR扩增产物 ,对 60例UC患者和 60例对照组的HLA DQA1 等位基因进行分析。结果 UC患者HLA DQA1 0 30 1等位基因频率 (0 .5 0 )与对照组 (0 .19)比较 ,差异有显著性 (P =0 .0 0 2 9,RR =5 .881,Pc=0 .0 2 3)。结论 HLA DQA1 0 30 1与溃疡性结肠炎有一定关联 。

梅花鹿鞭与马鹿鞭PCR-RFLP鉴别研究

目的建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)鉴别梅花鹿鞭与马鹿鞭的方法。方法根据梅花鹿与马鹿的细胞色素b基因序列的差异,设计并选取DNA限制性内切酶MseI来区分梅花鹿鞭和马鹿鞭。采用改良SDS法提取样本基因组DNA,经PCR扩增后进行RFLP分析,并优化PCR-RFLP反应体系及反应条件,用优化的PCR-RFLP体系对市售鹿鞭样本进行鉴定。结果经PCR-RFLP分析,MseI可切割梅花鹿与马鹿Cyt b片段,前者被切成2个片段,后者被切成3个片段,从而将两者进行鉴别。结论本实验建立的PCR-RFLP方法可准确鉴别梅花鹿鞭与马鹿鞭。

血浆同型半胱氨酸水平及N^5,N^(10)-亚甲四氢叶酸还原酶基因多态性与老年期抑郁症的关联研究

目的探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平及N5,N10-亚甲四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与老年期抑郁症发病的关系。方法采用毛细管电泳-紫外检测法、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术测定60例老年期抑郁症患者(抑郁症组)和80名正常人(对照组)的血浆总Hcy水平和MTHFR基因多态性。患者入组时评定汉密尔顿抑郁量表(HAMD),治疗第6周末评定疗效(HAMD减分率≥50%为有效,<50%为无效)。结果(1)抑郁症组的血浆Hcy水平[(17±6)μmol/L]明显高于对照组[(12±4)μmol/L],差异有统计学意义(P<0.01)。<60岁首次发病(以下简称首发)患者(n=30)的血浆Hcy水平[(16±5)μmol/L]与≥60岁首发患者[n=30,(19±6)μmol/L]的差异无统计学意义(P>0.05);单次发作患者(n=17)的血浆Hcy水平[(18±6)μmol/L]与反复发作患者[n=43,(17±5)μmol/L]的差异无统计学意义(P>0.05);伴心脑血管疾病患者(n=27)的血浆Hcy水平[(19±6)μmol/L]与不伴心脑血管疾病患者[n=33,(16±5)μmol/L]的差异无统计学意义(P>0.05);治疗有效患者(n=40)的血浆Hcy水平[(18±5)μmol/L]与治疗无效患者[n=20,(17±6)μmol/L]的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)抑郁症组治疗前后HAMD评分的减分率与血浆Hcy水平无显著相关性(P>0.05)。(3)MTHFRC677T基因型有3种,即纯合子突变型(T/T)、杂合子突变型(T/C)和野生型(C/C)。抑郁症组的基因型及等位基因频率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。抑郁症组患者的首发年龄、发病次数、是否伴发心脑血管疾病及抗抑郁药治疗第6周末的疗效与MTHFRC677T基因型分布均无关联(P>0.05)。(4)不同基因型的受试者(不论是抑郁症组还是对照组)血浆Hcy水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论血浆Hcy水平升高可能是老年期抑郁症发病的一个独立危险因素。