聚天冬酰胺衍生物的合成及细胞毒性研究

目的合成一种聚天冬酰胺衍生物并对其细胞水平的安全性进行评价,为其作为药物载体应用提供研究基础。方法通过L-天冬氨酸热缩聚合成聚琥珀酰亚胺,利用苯丙氨酸甲酯盐酸盐和乙醇胺对聚琥珀酰亚胺进行开环反应得到载体PSI-Phe-EA;利用1H NMR进行聚合物结构表征;采用内标法磁氢谱计算其开环率;通过水溶性的比较验证其亲水性变化;采用MTT法对聚合物的细胞增殖抑制进行研究,利用倒置显微镜观察聚合物对细胞微观形态的影响;利用碘化丙啶(PI)染色法通过流式细胞仪研究聚合物对细胞周期的影响。结果1H NMR确证了开环衍生物PSI-Phe-EA的结构,PSI的开环率为40%;乙醇胺开环后聚合物的亲水性得到了明显改善;MTT实验表明,PSI-Phe-EA在所检测浓度范围内(<100 mg/L),对NIH3T3和Hep G2两种细胞的24 h细胞存活率均在80%以上;倒置显微镜观察表明,50 mg/L的PSI-Phe-EA孵育24 h后以上两种细胞的形态与对照组无明显差异;细胞周期分析表明PSI-Phe-EA处理与否对细胞周期分布的影响无明显差异。结论合成的聚天冬酰胺衍生物PSI-Phe-EA亲水性明显提高,且对细胞的存活、微观形态以及周期分布均无明显影响,是一种安全的高分子材料。

聚天冬酰胺衍生物载体(PHEA-Suc和Gal-PHEA-Suc)的合成、表征和体外试验

背景:寻找一种新的大分子作为靶向药物载体。目的:制备一种新型聚天冬酰胺衍生物——琥珀酰化的α,β-聚-(2-羟乙基)-D,L-天冬酰胺(PHEA-Suc)和半乳糖基化的琥珀酰化的α,β-聚-(2-羟乙基)-D,L-天冬酰胺(Gal-PHEA-Suc),对材料进行了表征,体外观察其细胞毒性。设计、时间及地点:体外观察实验,于2005-06/2007-06在南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室完成。材料:L-天冬氨酸,无水N,N-二甲基甲酰胺,乳糖酸,异硫氰酸荧光素,二甲亚砜,MTT购自美国Sigma公司;人宫颈癌细胞系HeLa和肝癌细胞系HepG2均购自上海细胞所细胞库;新生牛血清购自杭州四季青生物公司;胰蛋白酶购自美国Hyclone公司;其余试剂均为国产分析纯。方法:采用红外图谱、核磁共振、元素分析、分子量测定等方法对材料进行了表征,通过四唑盐比色法测定PHEA-suc和Gal-PHEA-suc的细胞毒性。主要观察指标:聚天冬酰胺衍生物载体的结构及细胞毒性。结果:PHEA-suc和Gal-PHEA-suc的结构通过红外光谱和核磁共振分析确认。由元素分析算得PHEA-suc和Gal-PHEA-suc的琥珀酰化度为43%(mol/mol),Gal-PHEA-suc的半乳糖基化度为7.6%(mol/mol)。PHEA-suc和Gal-PHEA-suc的体外细胞毒性分析表明,它们对HeLa和HepG2细胞生长的抑制作用很小,在浓度低于500mg/L时没有抑制作用。结论:聚天冬酰胺衍生物PHEA-suc、Gal-PHEA-suc细胞毒性低,且具有-suc活性基团和-gal靶向基团,可以作为理想的靶向药物载体。

炔基化聚天冬酰胺开环衍生物的合成及生物相容性研究

目的合成一种新的炔基化聚天冬酰胺-g-苯丙氨酸衍生物用作功能化药物载体。方法以L-苯丙氨酸为原料制备苯丙氨酸甲酯盐酸盐,对聚琥珀酰亚胺(polyasparamide,PSI)进行开环反应得到聚天冬酰胺-g-苯丙氨酸衍生物PSI-Phe-OMe,使用炔丙胺进一步开环得到炔基化的聚天冬酰胺-g-苯丙氨酸衍生物PSI-Phe-OMe-PA;通过1HNMR进行聚合物结构确证;通过MTT法、显微观察法和碘化丙啶(PI)染色法等确定PSI-Phe-OMe-PA对细胞增殖、形态以及细胞周期的影响。结果1HNMR确证了PSI-Phe-OMe-PA的分子结构,苯丙氨酸甲酯盐酸盐对PSI的开环率为40%,炔丙胺进一步开环后可使开环率接近100%;MTT实验表明PSI-Phe-OMePA对NIH 3T3和Hep G2 2种细胞的毒性较小,在浓度为100μg/m L时细胞存活率仍在80%左右,且对细胞形貌和细胞周期无显著影响。结论苯丙氨酸甲酯和炔丙胺可依次对聚琥珀酰亚胺进行开环合成炔基化的聚天冬酰胺开环衍生物PSI-Phe-OMe-PA,且PSIPhe-OMe-PA是一类安全的功能化药物载体。

聚(α,β-N-2-二羟乙基-DL-天冬酰胺)及其共价复合物的制备及体外缓释性能研究

目的 :制备一种新型聚天冬酰胺衍生物聚 (α,β-N -2 -二羟乙基 -DL -天冬酰胺 ) (PDHEA)。方法 :采用 GPC、F TIR、DSC等方法对该材料进行了表征 ,研究了反应条件对分子量的影响 ,并对影响其降解的因素进行了探讨。用两种方法将乙酰水杨酸键合到 PDHEA上 ,研究了不同分子量对复合体载药率及药物缓释性能的影响。结果 :该复合体释药速率稳定 ,通过调节

PHEA-MTX和PHEA-suc-MTX的合成与表征

背景:在大分子药物的设计中,往往需要在载体与药物之间引入新的基团,即连接基。选择合适的连接基,可以控制药物在体内的释放形式和释放速率。目的:制备和表征一种新的大分子靶向抗肿瘤药物。设计、时间及地点:观察实验,于2007-06/2008-11在南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室完成。材料:L-天冬氨酸,无水N,N-二甲基甲酰胺,BOP试剂购自美国Sigma公司,其余均为国产试剂。甲氨蝶呤由连云港恒瑞制药有限公司赠送。方法:实验把甲氨喋呤与PHEA和PHEA-suc偶联,制备琥珀酰化的α,β-聚-(2-羟乙基)-D,L-天冬酰胺-甲氨喋呤(PHEA-Suc-MTX)和α,β-聚-(2-羟乙基)-D,L-天冬酰胺-甲氨喋呤(PHEA-MTX)。主要观察指标:采用红外图谱、核磁共振、元素分析方法检测大分子靶向药物的结构,紫外分光光度法测定PHEA-Suc-MTX和PHEA-MTX中甲氨喋呤的含量。结果:PHEA-MTX和PHEA-suc-MTX的结构通过红外光谱和核磁共振分析确认。甲氨喋呤与PHEA及PHEA-suc共价偶联,其甲氨喋呤含量分别为5.80%及5.86%。结论:合成的大分子靶向药物PHEA-MTX、PHEA-suc-MTX结构稳定。