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全柱成像等电聚焦毛细管电泳法对双特异性Fc融合蛋白的电荷异质性分析
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作者 袁国刚 罗顺 +2 位作者 林军 林康 昌根琼 《中国科技期刊数据库 医药》 2024年第3期0129-0132,共4页
建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融... 建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融合蛋白的WCID-CIEF分析平台;通过液相质谱法(LC-MS)鉴定了唾液酸相关N-糖构型;通过液相荧光法(LC-FLR)测定了唾液酸的含量。结果 经唾液酸酶酶切和方法优化后,此方法在2.5~7.5 mgmL-1浓度范围内线性良好,R2=0.998,回收率在96.3%~104.6%之间,准确性、专属性和耐用性均满足要求。结论 结合酶处理和方法优化手段,WCID-CIEF可较好地分析融合蛋白的电荷异质性,提供了一种简单、有效的融合蛋白质控手段,并可应用于产品放行及稳定性监测。 展开更多
关键词 全柱成像等电聚焦毛细管电泳法 双特异性Fc融合蛋白 唾液酸酶酶切 方法开发和确认
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术在重组蛋白疫苗电荷异质性分析中的应用 被引量:1
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作者 陈全姚 杜加亮(综述) +1 位作者 刘万卉 王兰(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第21期2643-2648,共6页
重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键。重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性。其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一。电荷异质性监测有助于推动生产工... 重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键。重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性。其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一。电荷异质性监测有助于推动生产工艺的优化,反映产品生产的一致性和稳定性等,对保证重组蛋白产品的安全和质量至关重要。开发可靠快速、灵敏稳健的电荷异质性分析方法一直是生物制药行业所追求的目标。经典的电荷异质性分析方法主要有离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)以及全柱成像毛细管等电聚焦电泳(WCID-CIEF)等,其中WCID-CIEF提供的等电点(pI)和峰形的生化指纹有助于对疫苗多蛋白成分的分析。基于以上该文将对WCID-CIEF的原理和特点及其在重组蛋白疫苗质量控制中的应用进行概述。 展开更多
关键词 电荷异质性 重组蛋白疫苗 质量控制 全柱成像毛细管等电聚焦电泳
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聚焦毛细管在极紫外平行光管中的应用 被引量:1
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作者 周媛媛 周泗忠 邓颖 《光学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期246-252,共7页
采用聚焦毛细管将通用的极紫外光源引出法兰口之外,并控制光束发散角,以匹配平行光管孔径角。分析计算了直接用光源照亮靶盘的情形,光束不能充满有效主镜面上的直径;设计使用聚焦毛细管,使光束充满平行光管孔径角,并对极紫外平行光管有... 采用聚焦毛细管将通用的极紫外光源引出法兰口之外,并控制光束发散角,以匹配平行光管孔径角。分析计算了直接用光源照亮靶盘的情形,光束不能充满有效主镜面上的直径;设计使用聚焦毛细管,使光束充满平行光管孔径角,并对极紫外平行光管有无毛细管两种状态进行测试。测试结果表明,采用聚焦毛细管后,扩大了光束的发散角,并且无毛细管的最大光子计数接近1×105个,加毛细管后最大光子计数能达到1×104个。测试数据说明极紫外聚焦毛细管的传输效率可以达到10%,能够满足极紫外平行光管的各项技术指标要求。 展开更多
关键词 光学器件 极紫外平行光管 聚焦毛细管 光束发散角 孔径角
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毛细管等电聚焦分离蛋白质 被引量:7
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作者 刘晓达 廖杰 +3 位作者 杨景庚 王全立 刘耀清 马立人 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期8-11,共4页
采用均匀设计法进行未涂壁石英毛细管等电聚焦研究,考察两性电解质、甲基纤维素、四甲基乙二胺和牛磺酸几种组分对等电聚焦的影响,确定出了比较合适的浓度范围。当中性蛋白质迁移通过检测窗后,在进样端施加一低气压,从而使酸性蛋白... 采用均匀设计法进行未涂壁石英毛细管等电聚焦研究,考察两性电解质、甲基纤维素、四甲基乙二胺和牛磺酸几种组分对等电聚焦的影响,确定出了比较合适的浓度范围。当中性蛋白质迁移通过检测窗后,在进样端施加一低气压,从而使酸性蛋白质得到很好的分离,适用于较宽的pI范围。方法的重复性好,为蛋白质分离鉴定提供一种有力的工具。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 蛋白质 均匀设计
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毛细管等电聚焦/加压毛细管电色谱二维分离体系在多肽分离中的应用 被引量:8
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作者 魏娟 谷雪 +1 位作者 王彦 阎超 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第2期188-192,共5页
以毛细管等电聚焦(cIEF)为第一维分离模式,以反相加压毛细管电色谱(pCEC)为第二维分离模式,开展离线二维色谱分离研究,并对复杂肽段进行分离。羟丙基纤维素(HPC)涂层的毛细管用于cIEF分离,对6种标准蛋白质的平均分离柱效约为31万。在毛... 以毛细管等电聚焦(cIEF)为第一维分离模式,以反相加压毛细管电色谱(pCEC)为第二维分离模式,开展离线二维色谱分离研究,并对复杂肽段进行分离。羟丙基纤维素(HPC)涂层的毛细管用于cIEF分离,对6种标准蛋白质的平均分离柱效约为31万。在毛细管末端引进电隔离槽,方便了第一维样品的收集。在加电6 kV下,第二维pCEC对多肽的分离比不加电时的分辨率和分离速度提高。实验中用牛血清白蛋白的酶解肽段对cIEF/pCEC二维体系进行考察,理论峰容量约为30000。将该平台用于人血红细胞破碎液酶解多肽的分离,7个片段共检测到约200个峰。结果表明,cIEF/pCEC二维能较好地完成对复杂多肽的分离。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 加压毛细管电色谱 多维分析 多肽
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性 被引量:9
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作者 孟晓光 甄里 +5 位作者 刘悦玫 侯利平 刘丹 李斌 欧阳伟民 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期343-348,共6页
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特... 评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。 展开更多
关键词 全柱成像毛细管等电聚焦电泳 电荷异质性 重组蛋白质药物 抗体 药学研究
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新型固定化pH梯度毛细管等电聚焦方法用于蛋白分离 被引量:4
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作者 谢瑶 尹开吉 +2 位作者 罗爱芹 屈锋 邓玉林 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期25-28,共4页
通过化学键合建立一种固定化pH梯度的方法,用于毛细管等电聚焦分离蛋白质。采用微流控泵驱动毛细管内的聚焦区带,通过调节泵的流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。该方法避免了自由溶液聚焦时两性电解质所带来的影响,实现了高灵敏度及检... 通过化学键合建立一种固定化pH梯度的方法,用于毛细管等电聚焦分离蛋白质。采用微流控泵驱动毛细管内的聚焦区带,通过调节泵的流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。该方法避免了自由溶液聚焦时两性电解质所带来的影响,实现了高灵敏度及检测波长自由选择等优点,适用于两步法毛细管电泳等电聚焦分离蛋白质等两性电解质。本文考察了对牛血清白蛋白和血红蛋白两种蛋白质混合物的分离,证明了该方法可行。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 固定化pH梯度 蛋白分离 化学键合
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毛细管等电聚焦/毛细管无胶筛分电泳二维蛋白质分离平台的构建 被引量:6
8
作者 刘和春 杨春 +2 位作者 杨青 张维冰 张玉奎 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期273-277,共5页
设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速... 设计并制作了一种新型的中空纤维接口 ,以此为核心构建了毛细管等电聚焦 (CIEF) /毛细管无胶筛分 (CNGE)电泳二维蛋白质分离技术平台 ,实现了将二维凝胶电泳从平板转移到毛细管中。利用该二维分离平台 ,对血红蛋白样品进行了高效、快速分离分析 ,验证了该二维分离平台的可行性及分离效能。实验结果表明 :二维分离系统总的峰个数和分离效能都比各自一维分离系统有较大提高。 展开更多
关键词 蛋白质 二维分离平台 毛细管等电聚焦 毛细管无胶筛分电泳 中空纤维接口
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毛细管等电聚焦方法及其应用 被引量:2
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作者 刘晓达 王全立 马立人 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期400-404,共5页
讨论了毛细管等电聚焦中所涉及的问题,如分离机理、电渗、迁移方法、检测器及其应用。由于毛细管等电聚焦操作方式的多样性,使其可适用于不同的仪器条件。非交联丙烯酰胺涂层能很好地消除电渗和蛋白吸附;而采用未处理的毛细管时,动... 讨论了毛细管等电聚焦中所涉及的问题,如分离机理、电渗、迁移方法、检测器及其应用。由于毛细管等电聚焦操作方式的多样性,使其可适用于不同的仪器条件。非交联丙烯酰胺涂层能很好地消除电渗和蛋白吸附;而采用未处理的毛细管时,动态涂敷纤维素类亲水聚合物对碱性和中性蛋白亦能取得较好的分离效果。电荷耦合器件成像检测器尚待进一步发展才能成为常用的检测工具。对于复杂样品来说,仍需解决的问题是保证在较宽的pH范围内pI的线性。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 蛋白质 迁移方法 电渗 IEF
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毛细管等电聚焦和电渗泵驱动聚焦区带分离蛋白质 被引量:3
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作者 舒馨 陈令新 +1 位作者 马继平 关亚风 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期1-4,共4页
建立了一种利用电渗泵驱动毛细管内的聚焦区带,实现毛细管电泳等电聚焦分离蛋白质的方法。通过控制电压来调节泵的输出流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。适用于毛细管电泳等电聚焦两步法分离蛋白质等两性物质。考察了对牛血清白蛋白和... 建立了一种利用电渗泵驱动毛细管内的聚焦区带,实现毛细管电泳等电聚焦分离蛋白质的方法。通过控制电压来调节泵的输出流量,从而调节聚焦区带的迁移速度。适用于毛细管电泳等电聚焦两步法分离蛋白质等两性物质。考察了对牛血清白蛋白和溶菌酶两种粗提蛋白质混合物的分离,迁移时间的RSD分别为1.6%和1.3%,峰面积的RSD均为1.6%,证明方法可行。 展开更多
关键词 毛细管电泳等电聚焦 蛋白质 分离分析 电渗泵
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用于蛋白质分析的毛细管等电聚焦-电喷雾质谱接口的改进 被引量:3
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作者 许崇峰 宋浩威 +3 位作者 杨原 王谦 王洪海 许云敏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1035-1037,共3页
An important interface modification for capillary isoelectric focusing mass spectrometry(CIEF MS) is reported. A capillary needle with a sheath flow tube pre mounted in one device serves as both the CIEF cathodic end ... An important interface modification for capillary isoelectric focusing mass spectrometry(CIEF MS) is reported. A capillary needle with a sheath flow tube pre mounted in one device serves as both the CIEF cathodic end and the ESI interface. The needle was inserted into the cathode reservoir at the focusing stage, and then removed to the front of sampler orifice of MS at the detection stage. Therefore, the shut off of the high voltage is not necessary and a better focusing protein zone is maintained during the ESI stage. The optimization of the experimental condition has been investigated and the two dimensional image of the E. coli proteins has been obtained, which is comparable with that from a 2D gel. 展开更多
关键词 蛋白质 毛细管等电聚焦-质谱 接口 分离 鉴定 大肠杆菌 蛋白质组学
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毛细管等电聚焦-毛细管区带电泳二维蛋白质分离平台的构建及其性能 被引量:3
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作者 刘和春 杨春 +1 位作者 张维冰 张玉奎 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1451-1453,M010,共4页
A two-dimensional separation platform of capillary isoelectric focusing(CIEF)-capillary zone electrophoresis(CZE) for proteins was constructed by a microdialysis hollow fiber interface. The interface provided ease of ... A two-dimensional separation platform of capillary isoelectric focusing(CIEF)-capillary zone electrophoresis(CZE) for proteins was constructed by a microdialysis hollow fiber interface. The interface provided ease of fabrication,speed of mass delivering and convenience of column switching. Chrome c was selected to demonstrate the 2D separation systems feasibility and resolving performance. The 2D separation system was found to greatly increase the resolving power and overall peak capacity over those obtained for either dimension alone. 展开更多
关键词 微透析中空纤维膜接口 二维分离平台 毛细管等电聚焦 毛细管区带电泳
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新型毛细管等电聚焦驱动方法的建立及其应用 被引量:1
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作者 朱贵杰 杨春 +3 位作者 刘和春 张丽华 张维冰 张玉奎 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期654-656,共3页
A simple method for mobilizing the focused zones of capillary isoelectric focusing(CIEF) for single-point detectors was developed, in which a linear polyacrylamide(LPA) coated capillary was connected with an uncoated ... A simple method for mobilizing the focused zones of capillary isoelectric focusing(CIEF) for single-point detectors was developed, in which a linear polyacrylamide(LPA) coated capillary was connected with an uncoated capillary by an etched porous joint. The etched section allows electrical conductivity but blocks the hydrodynamic flow. The focused zones of mixed proteins was mobilized by this method successfully. Compared with the traditional gravity mobilization step, it was found that this method can mobilize the focused zones more effectively without sacrificing separation efficiency. 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 电渗流驱动 蛋白质 多肽
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毛细管等电聚焦电泳技术进展 被引量:2
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作者 杨春 姬磊 +1 位作者 张维冰 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-125,共5页
介绍了毛细管等电聚焦电泳(CIEF)技术的发展和现状,特别对载体两性电解质、柱内表面处理和检测技术等方面的最新进展加以系统评述,并且对CIEF的定性能力、峰容量、重现性及其在生命科学方面的应用前景进行了讨论。引用文献59篇。
关键词 毛细管等电聚焦电泳技术 毛细管 微分离技术 载体两性电解质 管壁处理 进样 迁移 检测技术
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浊度/分光光度法与毛细管等电点聚焦法测定明胶等电点及其分布的比较研究(英文) 被引量:1
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作者 陆扬 彭必先 《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 2007年第1期114-118,共5页
等电点是蛋白质最重要的物理化学性质之一.目前有多种测定等电点的方法.本文利用最简单的浊度/分光光度法和最先进的毛细管等电点聚焦法分别测定了河南牛皮明胶的等电点,对两种方法进行比较并论证了后一种方法的优势.
关键词 等电点 明胶 浊度/分光光度法 毛细管等电点聚焦
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浊度/分光光度法和毛细管等电点聚焦法测定明胶等电点及其分布的比较研究 被引量:11
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作者 陆扬 《明胶科学与技术》 CAS 2006年第1期44-47,共4页
等电点(IEP)是蛋白质最重要的物理化学性质之一,目前有多种测定等电点的方法。本文利用最简单的浊度/分光光度法和最先进的毛细管等电点聚焦(CaIPF)法分别测定了河南牛皮明胶的等电点,对两种方法进行比较,并论证了后一种方法的优势。
关键词 等电点 明胶 浊度/分光光度法 毛细管等电点聚焦
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毛细管等电聚焦分离蛋白质
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作者 刘彦方 丁天惠 《分析仪器》 CAS 1997年第2期52-56,共5页
毛细管等电聚焦(CIEF)可分离等电点(pI)相差0.02pH单位的蛋白质。本文介绍了CIEF分离蛋白质的基本原理、方法和特点;阐述了CIEF分离蛋白质应解决的基本问题,包括消除或减小电渗的涂层方法。检测方法和条件。蛋白质区带的迁移及p... 毛细管等电聚焦(CIEF)可分离等电点(pI)相差0.02pH单位的蛋白质。本文介绍了CIEF分离蛋白质的基本原理、方法和特点;阐述了CIEF分离蛋白质应解决的基本问题,包括消除或减小电渗的涂层方法。检测方法和条件。蛋白质区带的迁移及pI测定方法。讨论了影响CIEF分离效能的因素,如两性电解质的组成和浓度、毛细管长度、聚焦电压等。列举了应用CIEF分离具有不同pI蛋白质混合物的实例,对CIEF的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 等电点 蛋白质分离
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一步法和两步法毛细管等电聚焦测定蛋白质和多肽等电点的比较 被引量:3
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作者 高培峰 赵新颖 +2 位作者 贺木易 刘庆生 屈锋 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期537-542,共6页
利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(cIEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI)。讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响。并对一步法和两步法进行了比较。对... 利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(cIEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI)。讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响。并对一步法和两步法进行了比较。对细胞色素C、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白和牛血清白蛋白以及6种多肽的分析结果表明:一步法步骤简单,分离速度快,可测定单一组分的pI,也能快速分离混合蛋白和多肽,但分离度较差,且不能同时准确测定各组分的pI;两步法步骤复杂,分析时间较长,但能够同时分离并准确测定混合样品中各组分的pI,所测的pI值与单一组分进行测定的结果基本一致。两种方法可相互结合、互为补充,可广泛应用于两性生物微粒等电点的快速和准确测定。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 一步法 两步法 蛋白质 多肽
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固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱的制备及在蛋白质等电点分析中的应用 被引量:2
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作者 刘让东 许歆瑶 +2 位作者 王薇薇 王彦 闫超 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1090-1097,共8页
通过聚合物原位聚合反应,制备了部分填充的毛细管整体柱。pH3~10的载体两性电解质被固化在该毛细管整体柱上。在引入八通进样阀、三通阀和四通连接单元的基础上,构建了适用于固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱(M-IPG)的平台。在蛋白质药... 通过聚合物原位聚合反应,制备了部分填充的毛细管整体柱。pH3~10的载体两性电解质被固化在该毛细管整体柱上。在引入八通进样阀、三通阀和四通连接单元的基础上,构建了适用于固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱(M-IPG)的平台。在蛋白质药物测定过程中,用M-IPG柱和羟丙基纤维素(HPC)涂层毛细管柱同时对曲托珠单抗和依那西谱的等电点进行了测定。结果表明,两种等电聚焦柱都能够同时分离混合蛋白质样品并测定蛋白质类药物中单抗和融合蛋白质的等电点(pI),M-IPG柱所测的pI值与HPC涂层毛细管柱测定的结果基本一致,表明了该柱在进一步构建多维分离平台进行蛋白质组学研究方面的潜力。 展开更多
关键词 毛细管等电点聚焦 固化pH梯度 等电点 在线平台 蛋白质分离
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定艾塞那肽等电点 被引量:2
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作者 刘洁欣 方均建 +4 位作者 王心正 李海静 程建华 吴胜明 董方霆 《生物技术通讯》 CAS 2014年第3期381-384,共4页
目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行... 目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行考察。结果:测得艾塞那肽等电点为5.46,与凝胶电泳结果基本一致,相对标准偏差为0.11%。CIEF-WCID方法快速准确,相对误差小于2.5%,重复性良好。结论:CIEF-WCID作为一种新的技术手段可用于艾塞那肽等电点的分析,方法快速、准确、重复性好,可为多肽的质量控制提供一种可靠的分析方法。 展开更多
关键词 全柱成像毛细管等电聚焦电泳 等电点 艾塞那肽
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