光谱分析利培酮影响聚肌胞对蛋白的抑制

利用光谱法探究在血浆中常见的5种金属元素存在下,利培酮对聚肌胞抑制血清白蛋白的影响.研究表明:在利培酮的影响下,聚肌胞以动态猝灭的模式对蛋白的荧光进行抑制.确定了各种常数、抑制位点、相互作用力、结合部位和协同作用等.添加的铜和镍只能略微增加抑制作用,铬、锰和镁反而削弱了抑制作用.

胸腺肽聚肌胞治疗扁平疣111例疗效比较

目的 河山胸腺肽、聚肌胞治疗扁平疣 111例疗效比较。方法 采用随机对照治疗 ,将扁平疣患者分为河山胸腺肽治疗组 62例 ,聚肌胞治疗组 49例。分别 1次用 10mg、2mg肌肉注射 ,隔日 1次 ,连用 3 0天。 结果 两组总有效率 (痊愈、显效 )分别为 69.3 5 %、3 6.73 %。结论 河山胸腺肽组疗效优于聚肌胞组 (P =0 .0 0 1)。

聚肌胞对小鼠的急性毒性和蓄积毒性

目的:测定非病毒类干扰素诱导剂聚肌胞对昆明种小鼠的急性毒性和蓄积毒性。方法:实验于2006-04/05在南京农业大学药理与毒理教研室实验室完成。实材料:聚肌胞注射液(南京富纳生物技术有限公司),批号:060509-3,规格为3mg/mL。清洁级昆明种小鼠购自南京中医药大学实验动物中心(动物生产许可证号为SYXK(苏)2005-0009)。实验方法:①急性毒性实验:选取体质量18～22g的50只小鼠,按随机数字表法分为5组,每组10只,雌雄各半,用药前6h禁食不禁水。在预实验基础上确定各组小鼠聚肌胞注射液用药量,相邻的两组间剂量的比值r为1.2。5组小鼠具体用药剂量为36.17,43.40,52.08,62.50,75.00mg/kg。每只小鼠按0.25mL/10g体质量腹腔注射,不同剂量组按同体积不同浓度给药。②蓄积毒性实验:选取体质量15～18g小鼠60只,随机数字表法分为聚肌胞蓄积毒性实验组40只,对照组20只,各组小鼠雌雄均各半。采用剂量递增连续染毒法来评价聚肌胞的蓄积毒性,以LD50为基础选择剂量,起始剂量为0.1LD50,4d为1期,按1.5倍等比级数递增,分5期共20d。将药用生理盐水配成适合的浓度,每天按体质量1次性腹腔注射给药,每只小鼠给药体积均为0.25mL/10g,连续给药20d,对照组小鼠给予相同容积的生理盐水。实验期间观察小鼠一般表现并按时称体质量,记录小鼠死亡的情况并计算蓄积系数,观察各组小鼠对聚肌胞的耐受性。结果:110只小鼠均进入结果分析。①急性毒性实验:各组小鼠注射聚肌胞后均表现行动迟缓,精神沉郁,畏寒扎堆,被毛竖立,用药后3h呈现不同程度的腹泻,4h后相继出现死亡。小鼠的死亡多集中在用药后4～12h,用药后24h未死亡小鼠的精神、食欲都逐渐恢复,继续观察6d未见小鼠再有死亡。小鼠腹腔注射聚肌胞注射液的LD50为59.73mg/kg,LD5095%可信限为:29.49～120.97mg/kg。②蓄积毒性实验:实验组小鼠未发现有明显毒性反应,无小鼠死亡。实验组小鼠体质量与对照组相比差异不显著(P>0.05)。③耐受性实验:实验组小鼠死亡率明显低于对照组(0,20%,P<0.01)。结论:聚肌胞腹腔注射对小鼠毒性较大,但相对于临床应用剂量,聚肌胞注射液的使用仍较为安全;聚肌胞注射液对小鼠没有或仅有轻微的蓄积毒性,小鼠对本品可产生明显的耐受性。

聚肌胞对小鼠前列腺癌内微血管的影响

目的探讨聚肌胞(polvriboinsine-polyribocyaidylic acid,polyI:C)对小鼠前列腺癌组织内血管生成的影响,初探其可能机制。方法将16只C57BL6/J纯系荷瘤小鼠按瘤重随机分为对照组和polyI:C组,分别瘤内注射生理盐水和polyI:C(每3d1次),用药7次后切除瘤灶。HE染色,镜下观察肿瘤组织组织形态学变化及血管分布情况。利用试剂盒检测肿瘤组织内NO水平。免疫组织化学染色,观察肿瘤组织eNOS、VEGF和AQP1蛋白表达情况。结果对照组和polyI:C组小鼠前列腺癌组织内的NO含量分别为(8.73±5.34)μmol和(1.22±0.77)μmol,两组比较差异有显著性(P<0.05)。免疫组化结果显示,对照组和polyI:C组的VEGF阳性染色前列腺癌细胞计数占同类肿瘤细胞的比例分别为(37.91±7.62)%和(9.64±2.90)%;C组的eNOS阳性染色前列腺癌细胞计数占同类肿瘤细胞的比例分别为(54.43±10.39)%和(22.00±8.07)%;AQP1平均值分别为(14.8±3.5)和(3.2±1.3),两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论polyI:C可能通过下调小鼠前列腺癌组织中eNOS和VEGF蛋白的表达,抑制小鼠前列腺癌组织内血管的生成;通过影响组织内AQP1蛋白水平、减少NO生成和释放,影响血管内皮细胞的功能和肿瘤组织的微循环。

多潘立酮聚肌胞与奥美拉唑治疗Hp(-)慢性浅表性胃炎疗效的比较研究

目的比较多潘立酮聚肌胞与奥美拉唑治疗幽门螺杆菌(HP)阴性慢性浅表性胃炎的疗效。方法选择确诊为慢性浅表性胃炎且Hp(-)的患者89例,随机分为治疗组45例,对照组44例,治疗组采用多潘立酮聚肌胞治疗;对照组采用奥美拉唑治疗;3周后进行疗效观察;统计学处理。结果治疗组总有效41例,显效28例,对照组总有效30例,显效13例,治疗组总有效率及显效率均明显高于对照组;统计学处理,差异有统计学意义。结论治疗组的治疗效果优于对照组治疗效果。

聚肌胞免疫刺激下仔猪外周血单核细胞的基因表达分析

聚肌胞(Poly I:C)是一种天然双链RNA(Double strand RNA,dsRNA)的拟似物,能够模拟病毒感染后所形成的dsRNA及刺激机体产生抗病毒免疫反应。文章以抗病力存在差异的大蒲莲和长白仔猪为研究对象,分离外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),在20μg/m L的Poly I:C的免疫刺激下体外培养24 h,对影响免疫应答过程中的7个细胞因子(IRF3、IL6、IL8、IL10、TNFα、IFNγ和IFNα)和3个模式识别受体(TLR3、TLR4和RIG1)利用实时荧光定量PCR检测Poly I:C免疫刺激组相对于对照组的基因表达变化倍数。结果表明:检测的大部分细胞因子和受体(6个)表达量变化倍数很大,其中3种白细胞介素IL6、IL8和IL10免疫刺激变化倍数最大,平均变化倍数分别为20.71、10.87和5.18倍。对不同个体和品种间的比较发现,不仅大蒲莲和长白两品种间(大蒲莲猪的变化倍数平均高于长白猪)而且同品种的3头全同胞仔猪间对Poly I:C免疫刺激的应答也存在较大的变化。文章利用Poly I:C体外模拟dsRNA对PBMC的感染,为下一步筛选仔猪对Poly I:C刺激的免疫应答基因及鉴定大蒲莲猪特殊的抗性基因奠定了基础。

皮损内注射聚肌胞治疗寻常疣及跖疣126例疗效观察

目的探讨皮损内注射聚肌胞对寻常疣及跖疣的治疗效果。方法对我科近年来采用皮肤内注射聚肌胞方法治愈的126例寻常疣及跖疣患者的临床资料进行回顾性分析。结果第1疗程结束时,痊愈81例,有效率为89.7%;第2疗程结束时,痊愈111例(88.1%),有效率95.2%。结论皮损内注射聚肌胞治疗寻常疣及跖疣疗效好,副作用少,不留疤痕,复发率低,值得应用,对于多发性寻常疣或跖疣患者可作为首选治疗。

聚肌胞浓度和免疫刺激时间对猪外周血单核细胞基因表达的影响

【目的】聚肌胞(Poly I:C)是聚肌苷酸和聚胞苷酸的共聚物,能够模拟病毒感染后所形成的ds RNA,刺激机体产生抗病毒免疫反应和炎症反应。利用Poly I:C作为免疫刺激剂对猪外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的免疫刺激试验中Poly I:C的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间的研究还未见报道。本研究探讨不同的Poly I:C免疫剂量和免疫刺激时间对猪PBMC各细胞因子和受体基因表达的影响,确定Poly I:C进行免疫试验的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间,为利用Poly I:C进行RNA病毒感染的免疫应答调控机理研究提供试验依据。【方法】以长白仔猪为研究对象,利用分离的PBMC和1﹕5稀释的EDTA-抗凝血,设置Poly I:C浓度梯度(0、10、20和40μg·m L-1)和不同的体外免疫刺激培养时间(4、8、12和24 h),通过荧光定量PCR方法测定Poly I:C免疫刺激下机体激活或者诱导表达的主要细胞因子(IL6,IL8,TNFα,IL10,IRF3,IFNα和IFNγ)和模式识别受体(TLR3和TLR4)的相对表达量,分析利用Poly I:C对猪全血和PBMC进行免疫刺激试验的最佳作用浓度和时间。【结果】猪PBMC中细胞因子和受体基因的表达量受Poly I:C浓度和免疫刺激时间的影响。各基因具有特征性的表达量变化曲线,达到最高表达变化倍数的浓度和体外培养时间各不相同。对于两个干扰素基因IFNα和IFNγ,最高表达量出现在Poly I:C免疫刺激培养4 h,而后随着培养时间的延长表达量逐渐降低,而其他5个细胞因子(IL6,IL8,TNFα,IL10和IRF3)和2个模式识别受体(TLR3和TLR4)基因随着Poly I:C浓度的增加和免疫刺激时间的延长变化倍数逐渐增加,在Poly I:C浓度为20-40μg·m L-1,免疫刺激时间为12-24 h达到最高表达量。但是,对于最高表达量出现在浓度20μg·m L-1和培养时间12 h的基因,其在浓度为40μg·m L-1和培养时间24 h表达变化量只有小幅下降。另外本研究还对比检测了1﹕5稀释血在Poly I:C免疫刺激下主要细胞因子和受体的表达变化,结果表明全血中各细胞因子和受体的整体表达变化倍数比PBMC低很多,特别是对于IL6和IL8这两个PBMC中表达变化很大的基因,全血中表达变化量不仅很小,而且变化趋势相反。相对于PBMC,稀释全血完整地保存了机体的原始状态,但是利用全血进行免疫试验的主要缺点是抗凝剂保留在全血中。研究中EDTAK2抗凝剂能与血液中的钙离子结合成为螯合物,从而阻止血液凝固,但是钙离子是细胞的重要信号分子,钙离子与EDTA的结合对后续的细胞功能可能产生一定的影响。另外,全血中的某些化合物与血浆蛋白的等成分可能参与免疫细胞对Poly I:C免疫刺激的调节,减少了对Poly I:C免疫刺激的应答。【结论】(1)综合分析所检测的细胞因子和受体的变化趋势,利用Poly I:C进行猪PBMC免疫刺激试验的最佳浓度和体外培养时间分别为20μg·m L-1和24 h。(2)1﹕5稀释的EDTA-抗凝血对Poly I:C免疫反应反应小,与PBMC对Poly I:C免疫应答有不同的应答反应趋势。

聚肌胞(polyI:C)抗肿瘤作用和免疫调节作用

本文观察了国产聚肌胞(polyI:C)在小鼠体内抗瘤作用和免疫调节功能。结果表明,5mg/kg polyI:C对小鼠肉瘤180,Lewis肺癌和小鼠肝癌抑瘤率分别为37.3％、61.6％和44.2％。在免疫调节作用中,polyI:C在体内外均增加NK,Mφ和抗体依赖的Mφ活性。注射polyI:C后的小鼠血清较正常小鼠血清在体外对P_(388)细胞有较强的抑制DNA合成作用。polyI:C本身无明显细胞毒作用(100μg/ml抑制P_(388)细胞~3HTdR掺入率为16.5％)。实验提示polyI:C通过免疫调节发挥抗肿瘤作用。

聚肌胞对雏鸡新城疫抗体水平的影响

为研究聚肌胞(polyinosinic-polycytidylic acid,PolyI:C)对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响,在肉仔鸡7日龄免疫的前后注射PolyI:C,并测定各处理组中雏鸡血清抗体水平。结果显示,免疫之前48、24和12h注射PolyI:C,雏鸡血液中抗体效价仅在10日龄明显升高;免疫新城疫疫苗的同时及免疫之后12、24h注射PolyI:C,9～12日龄雏鸡血清抗体滴度均明显提高。PolyI:C可以提高雏鸡免疫抗体滴度,对由弱毒苗刺激的免疫反应具有调理作用。

聚肌胞对RSV感染哮喘加重小鼠气道分泌TSLP和炎症的影响

目的探讨聚肌胞(poly I:C)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重小鼠气道分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和气道炎症的影响。方法雌性BALB/c小鼠32只,随机分成4组:分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/polyI:C组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘,聚肌胞1mg/kg肌肉注射;无创肺功能检测各组小鼠气道反应性;ELISA法检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)中TSLP含量;BALF行细胞分类计数;病理观察小鼠肺组织炎症反应,免疫组化观察小鼠气道上皮细胞TSLP表达水平。结果无创肺功能检测显示聚肌胞抑制RSV感染哮喘加重小鼠气道反应性的增高,OVA/RSV/polyI:C组小鼠Penh值明显低于OVA/RSV组(P<0.01);OVA/RSV/polyI:C组小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13和BALF中TSLP浓度均明显低于OVA/RSV组(P<0.05);OVA/RSV/poly I:C组小鼠BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数及淋巴细胞数明显少于OVA/RSV组(P<0.05);病理观察显示聚肌胞减轻RSV感染哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实聚肌胞抑制RSV感染哮喘小鼠气道上皮细胞TSLP表达。结论聚肌胞前期注射减少RSV感染哮喘加重小鼠气道上皮细胞表达TSLP,抑制哮喘小鼠气道炎症反应。

聚肌胞诱导鸡胚成纤维细胞和鸡胚及肉鸡抵抗新城疫病毒感染的研究

为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验。结果显示:125和250μg.mL-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍TC ID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg.mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数。聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg.kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率。但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说明,聚肌胞对鸡胚成纤维细胞的增殖有一定程度的抑制。

光谱法研究聚肌胞与牛血清白蛋白的相互作用及共存金属离子的影响

用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究聚肌胞(PPA)和牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及共存金属离子对两者结合作用的影响.结果表明:PPA对BSA的荧光有猝灭作用,其猝灭过程属于动态猝灭.通过计算得出PPA与BSA的结合常数Kb及结合位点数n.根据热力学参数确定了PPA和BSA之间的作用力类型主要表现为疏水作用力.PPA在BSA中的结合位点主要位于ⅡA中.Hill系数略小于1,表明PPA对BSA的结合为弱的负协同作用.此外还详细探讨了共存金属离子对PPA与BSA结合作用的影响.

不同长度的聚肌胞对SPF鸡固有免疫增强作用的研究

聚肌胞(poly I:C,p IC)作为强干扰素诱生剂,在人类医学上被用作抗病毒和抗肿瘤药物。已有的研究表明,聚合长度不同的p IC对哺乳动物细胞的免疫增强作用不同。为明确p IC的聚合长度是否会影响其对鸡的固有免疫增强作用,本研究将低分子量p IC(0.3 kb^1 kb)和高分子量p IC(6 kb^8 kb)分别肌肉注射1月龄的SPF鸡,各设置2个p IC浓度梯度。在p IC作用后的6 h、12 h、24 h和36 h,分别采集EDTA抗凝血,分离外周血淋巴细胞(PBL),通过荧光定量PCR方法检测PBL固有免疫信号通路相关基因的转录水平变化。结果表明,低和高分子量范围的p IC刺激SPF鸡后均可以迅速激活鸡体固有免疫应答,引起TLR3、MDA5、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6和IL-17等免疫相关基因转录水平的上调。该结果与哺乳动物模型的研究报道截然不同,而与本实验室以多种鸡源细胞为模型的研究结果相似。10μg/kg(质量/体质量)的p IC即可以引起PBL固有免疫相关基因转录水平上调,而且大部分基因在p IC刺激后6 h即达到转录峰值,表明p IC作为鸡用免疫增强剂的高效性。总之,本研究表明短链和长链p IC均可用作鸡免疫增强剂。

聚肌胞注射液对罗曼蛋鸡免疫机能的影响

选用罗曼蛋公鸡120羽,随机分为4组,聚肌胞用药低剂量组、中剂量组和高剂量组,聚肌胞用药组分别按0.5、1.0和2.0mg·kg-1剂量一次性胸肌注射聚肌胞注射液,对照组注射生理盐水。所有处理组注射容量均为0.5mL。用药后分别在第2、6、10天检测血液生化指标,第2、10天检测免疫学指标。结果显示,用药后第2天,高剂量组血清内总蛋白含量显著高于对照组,高剂量组淋巴细胞数显著高于对照组(P<0.05);高剂量组和中剂量组血清内球蛋白含量、T细胞总数E-玫瑰花环形成率、法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05)。研究结果表明,聚肌胞可以提高罗曼蛋鸡的免疫机能。