固定化细胞转化脱氧胸苷合成2'-脱氧腺苷

目的选择最优的载体包埋固定化AEM0957细胞酶促催化脱氧胸苷和腺嘌呤合成脱氧腺苷。方法分别用琼脂、聚丙烯酰胺、明胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚乙烯醇等6种材料包埋固定细菌AEM0957细胞,以此为催化剂转化脱氧胸苷合成脱氧腺苷。结果通过优化反应条件,聚丙烯酰胺固定化细胞催化脱氧胸苷的转化率可达57%,高于游离细胞反应能力,并能多次重复使用,10次重复反应的转化率仍能够保持在32%左右。结论聚丙烯酰胺在稳定性、转化性能等方面优于其它材料,该研究为脱氧腺苷的工业化生产奠定了重要基础。

2′,3′-双脱氢-2′,3′-双脱氧胸苷(d4T)5′-硫代磷酰氨基酸酯的合成和谱学分析

HIV逆转录酶是治疗艾滋病的有效靶点 ,核苷 -磷酰氨基酸酯是HIV逆转录酶的有效抑制剂 ,但是这类化合物容易在体内被核酸酶水解 .本研究设计合成了对核酸酶具有抵抗作用的 2′ ,3′ 双脱氢 2′ ,3′ 双脱氧胸苷 5′ 硫代磷酰氨基酸酯化合物 ,这类化合物可以有效地透过细胞膜经过细胞激酶的作用 ,进入HIV逆转录酶的作用位点 ,病毒实验表明该类化合物对MT 4细胞具有较好的抗HIV病毒活性 .报道了 2′ ,3′ 双脱氢 2′,3′ 双脱氧胸苷 5′ 硫代磷酰氨基酸酯化合物的合成 ,及利用NMR ,IR和ESI

一锅法合成O-(3-薯蓣甙元)-O′-[5′-(3′-叠氮-3′-脱氧胸苷)]-氢亚磷酸酯

Azido-3′-deoxythymidine(AZT) was the first clinically approved drug against HIV infection, despite its undesirable side reactions, such as bone marrow suppression. In our aim to develop new chemical entity of anti-tumor and anti-HIV, the H-phosphonate 6 of AZT conjugate with diosgenin was synthesized by a tandem transesterification reaction for the first time. There are the merits of easy operation and high yield in the reported method. It could be extended to synthesize other diosgenin phosphonate conjugates such as carbohydrate and peptide.

肿瘤增殖显像剂3'-脱氧-3'-^(18)F-氟代胸苷

18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)是广泛用于肿瘤诊断的PET显像剂,由于所有细胞都利用葡萄糖,因此,18F-FDG不是特异的肿瘤显像剂。3'-脱氧-3'-18F-氟代胸苷(18F-FLT)克服了18F-FDG的局限性,并可以进行细胞增殖显像。对于肿瘤的PET研究,18F-FLT是理想的反映增殖特性的示踪剂,18F-FLT利用胸苷激酶催化的磷酸化作用来评价DNA复制过程,可以准确地评估肿瘤细胞DNA的合成和细胞增殖活性,可用于肿瘤的早期诊断及鉴别诊断、化疗和放疗的疗效监测,是很有希望和发展前途的PET显像剂。

2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧腺苷的合成

以腺苷为原料，利用Corey-Winter烯化反应分4步合成了2’，3’-双脱氧-2’，3’-双脱氧腺苷，总收率51％。用1HNMR和13CNMR表征了中间体及目标产物。

重组胸苷磷酸化酶在大肠杆菌中的表达和1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的生成

研究了大肠杆菌BL21(DE3)中重组胸苷磷酸化酶的最佳诱导表达条件及1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(1)的最佳生成条件。菌体培养3.5h时加入8mmol/L乳糖诱导6h后,胸苷磷酸化酶的酶活力为2.14×104u/mg湿菌体。5%湿菌体在pH7.0的0.1mol/L Tris-HCl缓冲液中与底物胸苷、1,2,4-三唑-3-甲酰胺于50℃反应5h后,所得1的转化率大于90%。

5,6-二甲基苯并咪唑(DMB)对丙酸杆菌生长及合成脱氧腺苷钴胺素的影响

在丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)厌氧发酵生产脱氧腺苷钴胺素(deoxyadenosylcobalamin,简称ADO)的过程中,中间体腺苷钴啉醇酰胺(adenosylcobinamide,简称CBI)和5,6-二甲基苯并咪唑(DMB)结合后生成产物ADO。目前维生素B12脱氧腺苷钴胺素发酵过程中的实时在线检测方法相对匮乏,为了解决该问题,提高维生素B12的发酵单位,以CBI为目标,运用代谢调控方法改善DMB的加入时间,研究不同时间加入DMB对丙酸杆菌生长以及ADO合成的影响。在分批次发酵情况下,实时检测了菌体发酵过程中具体的CBI合成量、ADO产量,并进一步绘制了菌体的生长曲线。结果表明,DMB对丙酸杆菌生长的抑制作用并不明显,但是可以抑制单位菌体产量,发酵周期为120h,最佳添加时间为90～100h,相比60h添加DMB可提高发酵单位59.08%。方法简便、快捷、高效,对维生素B12的发酵调控研究具有一定的参考价值。

N^4-烷基-5-甲基-2′-脱氧胞苷的合成

3′,5′- O-二苯甲酰胸苷在三氯氧磷存在的条件下与 1,2 ,4-三唑缩合可得到 1- (3′,5′- O-二苯甲酰 - β- D-呋喃核糖 ) - 4- (1,2 ,4-三唑 - 1-基 ) - 5 -甲基 -嘧啶 - 2 - (1H) -酮 ,再用不同的胺取代核苷 C4上的三唑基团可制备一系列全新的N4-烷基取代的 5 -甲基胞苷。方法简便 ,收率高。

5'-脱氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对6株大肠癌细胞的抑制作用

目的:测定大肠癌细胞的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量,探讨dThdPase与5’-脱氧氟尿苷(5’-DFUR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对大肠癌细胞的生长抑制作用的相互关系。方法:采用ELISA法对6株大肠癌细胞系LS174T、CloneA、Col0320、CX-1、Lovo和MIP101进行dThdPase蛋白定量分析,然后进行5’-DFUR、5-FU对6株大肠癌细胞的生长抑制实验。把大肠癌细胞分别接种于96孔培养板的每孔中培养24 h,分别加入2倍梯度稀释的5’-DFUR和5-FU.继续培养96 h后应用MTT分析分别测定5’-DFUR和5-FU对6株大肠癌细胞的半数有效剂量(IC50)。结果:除LS174T检出0.5 u/mg、Lovo检出8.9 u/mg的dThdPase蛋白外,其它4株癌细胞未检出。6株大肠癌细胞均对5-FU高度敏感,其半数有效浓度(IC50)分别为1.52～13.68μmol/L,而5’-DFUR对6株大肠癌细胞的IC50则分别为68.71～528.15μmoL/L,是5-FU的15倍-94倍,差异有显著性(P<0.01)。结论:6株大肠癌细胞很少有dThadPase蛋白表达;每一株大肠癌细胞对5’-DFUR的敏感性均明显低于5-FU。

5’-脱氧氟尿苷联合干扰素对转染TP基因结肠癌细胞株裸鼠实验模型的影响

背景与目的:人结直肠癌细胞基本无胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)表达。本实验主要探讨人结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠肿瘤组织中对抗癌药物5’-脱氧氟尿苷(5’-deoxy-5-fluorouridine,5’-DFUR)、氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和干扰素-α2a(interferon-α2a,INF-α2a)干预效果的影响。方法:以慢病毒为载体转染TP基因至结肠癌细胞株LS174T,得到稳定传代的高TP表达株。将96只BALB/c裸鼠分成2组,分别应用野生型及转染TP基因后的LS174T细胞株接种裸鼠背部皮下,制成结肠癌TP低、高表达模型。每组再随机分为6组,分别应用0.9%Na Cl溶液、INF-α2a、5-FU、5-FU+INF-α2a、5’-DFUR和5’-DFUR+INF-α2a干预5 d,2周后处死裸鼠,分离肿瘤称重后,分别应用鼠抗人CD34、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和抗PD-ECGF单克隆抗体进行免疫组织化学染色。判定是否有TP表达及对微血管进行计数。结果:在野生型LS174T裸鼠荷瘤模型中,使用抗肿瘤药物的3~6组肿瘤质量与对照组相比均明显降低,抑癌率分别为48%、27%、48%和57%,差异有统计学意义(P<0.05)。其中5’-DFUR组(48%)与5’-DFUR+INF-α2a组(57%)、5-FU+INF-α2a组与5’-DFUR+INF-α2a组(27%与57%)相比,抑癌率差异有统计学意义(P<0.05)。在LS174T-TP细胞株裸鼠模型中,5’-DFUR组和5’-DFUR+INF-α2a组抑癌率分别为27%和48%,而使用5-FU的两组未显示出良好的抗肿瘤效果(7%和3%)。免疫组织化学染色显示,野生型LS174T接种形成的肿瘤组织中TP表达阴性,微血管数目较少,而转染TP基因后,肿瘤组织中TP表达明显上升,微血管密度明显增多(P<0.05)。结论:结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠实验肿瘤模型中,TP表达明显增加,使细胞内激活抗癌药物5’-DFUR的抗癌作用明显增强,联合应用INF-α2a能进一步增强这种抗癌作用。而转染TP基因或联合应用INF-α2a对常规抗癌药物5-FU的抗癌效果无明显影响。

胸腺嘧啶和5-溴脱氧尿嘧啶诱导小鼠白血病细胞同步化

目的；用胸腺嘧啶和５－溴脱氧尿嘧啶联合作用小鼠红白血病细胞，建立白血血病细胞同步化方法。方法：参照遗传学人外周血细胞同步化方法，细胞生长状态好的加入胸腺嘧啶，培养一定时间后加入５－溴脱氧尿嘧啶培养４．５－５小时后加入积水仙素，常规制备中期染色体标本，根据分裂相的多少了解同步化的效率。结果：经诱导后可获得大量中期染色体分裂相。

反相高效液相色谱法测定脱氧核苷酸钠及其制剂含量

目的：建立反相高效液相色谱法测定脱氧核苷酸钠及其制剂含量．方法；采用Kromasil C18色谱柱，流动相为0．02mmol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH5．2），流速1．0ml·min^-1，柱温36℃，检测波长260nm。结果：脱氧核苷酸钠中dAMP、dGMP、dCMP、dTMP均基线分离，在250．0～15．6ug·ml^-1范围内。相关系数均为0．99914种脱氧核苷酸钠回收率在100．3％～101．1％之间。结论：该方法快速、简便、准确，制荆中辅料无干扰，可用于该药物原料及其制荆的含量测定。

胸苷磷酸化酶表达与结直肠癌关系研究进展

胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)是嘧啶核苷合成与分解过程中的一个关键酶。目前认为TP与血小板源性内皮细胞生长因子(platelet-derived endothelial cell growth factor,PD-ECGF)具有同源性,其诱导血管形成和抗凋亡的作用与结直肠癌的生长、转移密切相关。同时TP也是使5'-脱氧氟尿苷(5'-deoxy-5-fluorouridine,5'-DFUR)等(5-fluorouracil,5-FU)前体药物转化为5-FU的关键酶,其活性与结直肠癌细胞对氟尿嘧啶类药物的敏感性及靶向治疗密切相关。因TP在肿瘤的生长、转移、治疗和预后方面均有重要作用,阐明其表达机制具有重要意义。本文将对近年TP在结直肠癌中的表达与肿瘤血管新生及与激活5'-DFUR发挥细胞毒作用、治疗结直肠癌的研究进展进行综述。

Bcl-2反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增生的实验研究

目的 探讨不同浓度的Bcl 2反义寡核苷酸 (bcl 2AS ODN)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生活性的影响。方法 使用不同浓度 ( 0、15、3 0、45、60 μmol/L)的bcl 2AS ODN和bcl 2S ODN处理人RPE细胞 2 4h后 ,使用MTT、氚 -标记脱氧胸苷掺入试验 ( 3 H TdR)测定RPE细胞增生的抑制率及DNA合成抑制率 ;使用流式细胞仪检测其对RPE细胞周期的影响 ;使用免疫组织化学染色法检测不同浓度bcl 2AS ODN作用下的RPE细胞bcl 2的表达。结果 不同浓度bcl 2AS ODN处理过的RPE细胞的抑制率和DNA合成抑制率随bcl 2AS ODN浓度的增高而升高 ,bcl 2AS ODN将RPE细胞阻滞在G0 /G1期 ,免疫组化结果显示 :bcl 2AS ODN可抑制RPE细胞bcl 2的表达。结论 bcl 2AS ODN对RPE细胞的增生有抑制作用且呈浓度依赖性 ,这一结果有可能成为增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)基因治疗的一个新靶点。

近紫外光辅助硫胸苷治疗癌症的探索

本文介绍和评述利用近紫外光/4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的癌症治疗方法。从分子水平上探讨含硫核苷类似物和紫外光之间的协同作用,及其作为癌症(皮肤癌和膀胱癌)和其他疾病治疗方法和该治疗的发展前途。

4-硫脱氧胸苷及类似物在UVA光辅助治疗抗癌药物方面的研究

本文叙述了含硫碱基DNA的化学和医疗应用。硫碱基(thio-base)有其独特的性质,比如,易烷基化,易氧化和强的紫外长波(315—400nm,UVA)吸收。这些特定化学和物理性质存于含硫碱基、含硫核苷和含硫碱基的DNA中,它们对制备修饰的DNA和含硫碱基的DNA与其他生物大分子之间进行光诱导的交联反应非常有用。功能化的含有硫碱基的DNA及其类似物可用于DNA的修复研究。本文介绍和评述了利用紫外光/含硫胸腺嘧啶脱氧核苷(UVA/thiothymidine)的抗癌疗法,同时,探讨了含硫核苷类似物和紫外光之间的协同作用,为癌症和其他疾病治疗提供一种新的方法。

^(18)F-FLT Micro PET/CT显像评价奥拉帕尼对裸鼠乳腺癌模型的放疗增敏作用

目的探讨^(18)F-脱氧胸腺嘧啶核苷(^(18)F-FLT)正电子发射计算机断层显像(PET/CT)评价奥拉帕尼(Olaparib)对裸鼠乳腺癌模型的放疗增敏作用。方法建立24只BALB/C裸鼠MCF-7乳腺癌模型,按随机数字表法分为4组,每组6只,分别为对照组、单纯放疗组、Olaparib组、Olaparib+放疗组,分别于治疗前和治疗后48 h对裸鼠行^(18)F-FLT Micro PET/CT显像。比较4组治疗前后肿瘤最大标准化摄取值(SUV max)、总增殖体积(TPV)及肿瘤体积的变化。显像完成后,取出肿瘤进行称重观察肿瘤质量变化。通过免疫组化法分析肿瘤增殖指数Ki-67及增殖细胞核抗原PCNA的表达情况,并分析肿瘤的SUV max与免疫组化指标Ki-67及PCNA的相关性。结果治疗前,4组肿瘤的SUV max、TPV及肿瘤体积差异无统计学意义(F=0.041、0.061、0.045,P>0.05);治疗结束后48 h,对照组和Olaparib组的肿瘤SUV max较治疗前升高(t=-12.111,P<0.001;t=-3.001,P=0.03);单纯放疗组和Olaparib+放疗组肿瘤的SUV max较治疗前减低(t=5.829,P<0.01;t=4.448,P<0.01),Olaparib+放疗组肿瘤的SUV max、TPV和肿瘤体积均低于单纯放疗组(t=3.388、5.884、5.990,P<0.01)。Olaparib+放疗组瘤体质量明显低于其他3组(F=44.405,P<0.001)。免疫组化检测显示Ki-67及PCNA在Olaparib+放疗组中表达均少于其他3组(F=16.289、39.645,P<0.001)。相关性分析显示SUV max与Ki-67及PCNA表达均呈正相关(r=0.920、0.918,P<0.01)。结论^(18)F-FLT Micro PET/CT显像可以评价Olaparib对裸鼠乳腺癌模型的放疗增敏作用。

3'-叠氮-3'-脱氧胸苷-α-羟基膦酸酯衍生物的合成

在碱性条件下,抗病毒核苷衍生物3'-叠氮-3'-脱氧胸苷(AZT)-5'-氢亚膦酸二酯与芳香醛加成反应得到4个3'-叠氮-3'-脱氧胸苷-α-羟基膦酸酯类衍生物,通过31PNMR,1HNMR,ESI-MS及元素分析对其结构进行了表征确认.

近紫外光辅助4-硫脱氧胸苷抗癌作用的研究

4-硫脱氧胸苷（4-thiothymidine,S4TdR）作为硫代类核苷类似物的典型代表,其具有较强的亲脂特性和强的紫外长波长（315~400 nm,UVA）吸收。这些特性使得4-硫脱氧胸苷能够靶向进入肿瘤细胞并以核苷酸的形式嵌入DNA链中,在近紫外UVA的辅助下发生光化学反应,损伤肿瘤细胞DNA,诱导细胞走向凋亡途径,达到抗癌的目的。本文系统地介绍和评述了长波紫外光/含硫脱氧胸苷（UVA/thiothymidine）的抗癌疗法及原理,探讨4-硫脱氧胸苷与人血清蛋白间的相互作用,为这种新型光化学疗法在今后的癌症治疗中提供基础的理论依据。

结直肠癌组织中胸苷磷酸化酶表达与5’-脱氧氟尿苷靶向治疗的关系

胸苷磷酸化酶(TP)是嘧啶和核苷代谢过程中的关键酶,近年发现其具有肿瘤血管新生作用,并与肿瘤病人的预后转归密切相关。同时TP还是5’-脱氧氟尿苷(5’-DFUR,商品名为氟铁龙)抑制肿瘤细胞生长的关键转化酶。目前,TP在结直肠癌细胞中是否表达尚无定论,但因其对肿瘤血管新生及增进5’-DFUR治疗效果的双重作用而倍受临床关注。文中对TP在结直肠癌组织中的表达与5’-DFUR细胞内激活、治疗的研究进展进行综述。