中国的肉座菌科Ⅲ.肉座菌属的菌生种

对肉座菌属的系统分类史进行了回顾，并对3个菌生种进行了报道；其中硫磺肉座菌（新拟）Hypocreasulphurea（Schwein．）Sacc．为中国新记录种，拟层孔肉座菌H.formitopsisP．G.LiuetY．Doi为新种;讨论了它们与其近线种的区别和在本属下的系统分类位置。采用了全型世代特征集要分类法（MTSCH）的研究方法。

东方肉座菌EU7-22纤维素酶基因的克隆及序列分析

东方肉座菌EU7-22与XC-9、里氏木霉、康宁木霉、黑曲霉、斜卧青霉进行产纤维素酶比较,结果表明菌株EU7-22具有较高的产纤维素酶能力及完整的纤维素酶系。根据里氏木霉和绿色木霉的外切葡聚糖酶,内切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶相关基因序列,设计引物PCR扩增出菌株EU7-22 cbhⅠ、cbhⅡ、egⅠ、egⅡ及bglⅠ。基因序列经NCBI Blast分析表明,cbhⅠ与绿色木霉cbh1基因(FJ871063)同源性最高达99%;cbhⅡ与康宁木霉cbh2基因(DQ504304)同源性最高达99%;egⅠ与长枝木霉eg1基因(GU144298)同源性最高达99%;egⅡ与绿色木霉eg2基因(EF602036)同源性最高达99%;bglⅠ与菌株Trichodermasp.SSLbgl基因(FJ040193)同源性最高达100%。5种纤维素酶基因编码的相应氨基酸序列与其他木霉纤维素酶的氨基酸序列相似性也非常高。对上述纤维素酶基因编码的相应蛋白的分子量、等电点、N-糖基化位点、信号肽序列进行分析;对纤维素结合区及糖基水解酶家族特征结构区进行了定位;用SWISS-Model模拟了酶蛋白的三级结构。

东方肉座菌EU7-22木聚糖酶和木糖苷酶基因克隆及生物信息学研究

东方肉座菌EU7-22具有高产半纤维素酶的能力。根据已报道的同属里氏木霉及绿色木霉木聚糖酶,木糖苷酶相关基因序列,设计PCR引物扩增出东方肉座菌内切木聚糖酶(XYNⅠ,XYNⅡ)及β-木糖苷酶(β-BXL)基因。序列经NCBIBlast分析:东方肉座菌xynⅠ基因与里氏木霉xyn1基因(X69573.1)的同源性最高达到91%;xynⅡ基因与绿色木霉xyn2基因(EF079061)同源性最高达到93%;β-bxl基因与里氏木霉β-bxl1基因(Z69257.1)的同源性最高达到94%。生物信息学分析表明内切木聚糖酶Ⅰ和Ⅱ均属于糖基水解酶家族11,N末端前19个氨基酸均为信号肽。内切木聚糖酶Ⅰ分子量为24.13kD,等电点为7.87,含有3个糖基化位点;内切木聚糖酶Ⅱ分子量为24.44kD,等电点为4.86,含有1个糖基化位点;β-木糖苷酶属于糖基水解酶家族3,分子量为87.27kD,等电点为5.49,N末端前20个氨基酸为信号肽,含有8个糖基化位点。利用SWISS-Model对木聚糖酶,木糖苷酶蛋白质三级结构进行了预测和模拟。对木聚糖酶和木糖苷酶基因及其编码蛋白质的生物信息学分析,为进一步研究这些基因的表达与调控、构建高效利用纤维素组份的工程菌株奠定基础。

产于吉林长白山的中国子囊菌一新记录属——类肉座菌属(Hypocreopsis)(英文)

报道了采自吉林长白山的中国子囊菌一新记录属---类肉座菌属(Hypocreopsis)。该属隶属于子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌纲(Ascomycetes)、粪壳菌亚纲(Sordariomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、肉座菌科(Hypocreaceae)。同时地衣状类肉座菌(Hypocreopsis lichenoides)也是中国的新记录种,对该种进行了详细描述和显微结构绘图。

肉座菌Z28产纤维素酶工艺研究

采用液体发酵法,对肉座菌(Hypocrea sp.)Z28的最适产纤维素酶条件进行了研究。结果表明:在以稻草粉为碳源,硫酸铵为氮源,接种量2%,发酵时间6d,温度为30℃,pH值6.0,转速为180r/min的条件下,纤维素酶活力最高,其CMCase活力为66.35U/mL,FPA活力为13.75U/mL,β-葡萄糖苷酶活力为14.26U/mL。

正交试验法研究肉座菌(Hypocrea sp.)Z28生长及产纤维素酶工艺

通过设计正交试验,分别对影响肉座菌(Hypocrea sp.)Z28生长与产纤维素酶的4个因子进行了研究。结果表明:在偏酸性,生长60 h,高C/N的条件下,Z28长势最好;在优化条件下,CMCase活力为69.8 U/mL,FPA活力为22.0 U/mL,β-葡萄糖苷酶活力为15.2 U/mL。

中国的肉座菌科V. 肉棒菌属(英文)

所有保存于HMAS、HKAS和 HMIGD的采自中国的肉棒菌属Podostroma标本被重新研究,鉴定出肉棒菌P. alutaceum和粗肉棒菌P. grossum两个种,并对这两个种重新进行了详细的描述。鹿角状肉棒菌P. cornu-damae由于缺乏可靠的标本仍存有疑问。滇肉棒菌P. yunnanensis被作为粗肉棒菌P. grossum的异名。

东方肉座菌GH10家族木聚糖酶基因的克隆及异源表达

木聚糖酶是降解半纤维素最主要的酶,对于开发可再生生物能源具有重要的应用价值。分别以东方肉座菌(Hypocrea orientalis)EU7-22的基因组DNA和c DNA为模板,利用染色体步移和PCR技术首次克隆获得该菌GH10家族木聚糖酶Ⅲ的基因(xynⅢ),并对其进行生物信息学分析。结果表明:该基因全长1283 bp(gxynⅢ),含有3个内含子;CDS序列为1044 bp(cxynⅢ),编码347个氨基酸,N端含有一个16 aa的信号肽序列;XYNⅢ氨基酸序列与Trichoderma pseudokoningii的endoxylanase具有较高的同源性。经生物信息学分析,XYNⅢ成熟蛋白可能含有18个N-糖基化位点,其理论等电点(p I)为6.14,蛋白质分子质量为36.55 ku,属于亲水性蛋白;SWISS-Model建模预测,XYNⅢ成熟蛋白中含有11个α螺旋,其核心结构为8个β折叠片围成一个柱状结构。同时将编码成熟蛋白的基因片段mxynⅢ与p PIC9K质粒连接构建表达载体后转化毕赤酵母,对重组子表达产物进行酶活检测显示该基因能在毕赤酵母中表达有生物活性的XYNⅢ并分泌到胞外,发酵液中的木聚糖酶活在诱导培养168 h后可达到127.5 IU/m L。

乳酸对东方肉座菌β-葡萄糖苷酶的抑制动力学

为探讨糖化共发酵同步进行的过程中发酵产物对纤维素酶活力的影响,研究了乳酸对纤维素酶组分中β-葡萄糖苷酶(BG)活力的影响.结果显示:乳酸对BG活力有不同程度的抑制,该作用具有显著的浓度效应,其半抑制浓度IC_(50)=0.19mol/L;乳酸对BG的抑制类型是可逆的竞争性抑制,抑制常数K_I=0.149mol/L.应用底物反应动力学方法研究酶抑制动力学,建立了抑制动力学模型,发现乳酸对BG的影响是缓慢可逆失活的过程,底物对其有明显的保护作用,测得其正向速率常数k_(+0)为0.4L/(mol·min),逆向速率常数k-0为0.056min^(-1).该结果为纤维素糖化共发酵进程调控提供了理论依据.

转录调控因子BglR对东方肉座菌纤维素酶表达的影响

东方肉座菌(Trichoderma orientalis)EU7-22菌株是一株高效分泌纤维素酶的丝状真菌,对生物质转化具有重要价值.采用交错式热不对称PCR(TAIL-PCR)方法克隆得到纤维素酶转录调控因子bglr基因及其上下游序列,并经同源交换获得bglr基因敲除的菌株EU7-22Δbglr.其生产的滤纸酶、外切葡聚糖酶、木聚糖酶活力和分泌蛋白最高值较对照菌株分别增加了39%,22%,16%和20%,而β-葡萄糖苷酶活力下降47%,β-葡萄糖苷酶基因bgl1的表达量显著降低.进一步分析发现BglR的缺失抑制了菌株EU7-22在以特定多糖/寡糖为碳源的培养基上的生长,且引起发酵液pH值的改变.上述结果证明BglR对β-葡萄糖苷酶起正调控作用,可为构建高效降解纤维素的工程菌株提供参考.

美国肉座菌目(Hypocreales)野外采集简报

作为木霉(Trivhoderma)及其有性型系统分类学研究内容之一,1997年10月9日至15日,作者先后在美国密苏里州、北卡罗林纳州、佐治亚林区或国家公园进行了肉座菌目(Hypocreales)的标本采集.采集地的海拔100～400m;林区树种为栎树、松树、枫树、杜鹃等.从树皮、腐朽树枝干上共采集到Hypocreales标本34份,其中Hypocrea26份,初步鉴定,结果如下1 Helminthosphaeria clavariarum2 Hypocrea aureovirdis3 H.citrina4 H.gelatinosa5 H.latizonata6 H.muroiana7 H.nigricans8 H.pachybasioides9 H.rufa10 Hypomyces aurantius11 H.tremellicola12 Nectria episphaeria13 N.haematococca14 N.oropensoides15 N.peziza16 Protocrea spp.对Hypocrea标本,在Beltscille实验室进行了子囊孢子的单孢分离,获得Trichoderma菌株20个.

台湾北部山区无囊盖盘菌与肉座菌的研究

本研究报导近年来在台湾北部山区,包括:台北市阳明山国家公园、宜兰县与台北县交界的福山植物园与乌来哈盆古道以及新竹县雪霸国家公园观雾山区,以盘菌与肉座菌为主的资源调查结果,介绍自枯枝、落叶、蕨及土壤样本所获得的,包括属于白毛盘菌属(Albotricha)、棕粉盘菌属(Baeomyces)、双头孢属(Dicephalospora)、肉座菌属(Hypocrea)、层杯菌属(Hymenoscy-phus)、卡斯登盘菌属(Karstenia)、蓝斯盘菌属(Lanzia)、软毛菌属(Mollisia)、圆盘菌属(Orbilia)、假肉座菌属(Pseudohypocrea)、点盘菌属(Stictis)以及毛钉菌属(Lachnum)等,最常见的十二个属二十二个菌种,其中盾毛钉菌(Lachnum controversum)、印度粒毛盘菌(Lachnum indicum)、伊黎卡斯登盘菌(Karstenia idaei)和放射点盘菌(Stictis radiata)为台湾尚未发表的新纪录种,而汉斯白毛盘菌则为2003年12月刚发表于Mycotaxon期刊的新种.此外,更进一步介绍成功获得单孢分离的蓝斯盘菌、红褐肉座菌、巴西毛钉菌与红硬双头孢等菌种,分别于四个不同的温度下在四个不同培养基中的生长状况.

肉座菌目一新科（英文）

在吉林、河南和湖北等地大蚕蛾科昆虫的虫茧上发现一种肉座菌目真菌,其子实体非子座型,子囊壳表生、肉质、梨形、淡橙色,子囊长柱形、具帽状加厚的顶端和细长的顶孔,子囊孢子线形、多分隔、易断裂。ITS、LSU、SSU多基因序列分析的结果表明,它属于肉座菌目,并与Flammocladiaceae和线虫草科Ophiocordycipitaceae系统发育关系略近。形态学与序列分析的结果支持将其处理为一新属(茧壳菌属Cocoonihabitus)中的一个新种(茧壳菌Cocoonihabitus sinensis),并代表了该目的一个新科(茧壳菌科Cocoonihabitaceae)。

肉座菌目3个中国新记录种（英文）

报道了来自黑龙江和广东的肉座菌目3个中国新记录种:异梗枝穗霉Clonostachys impariphialis、罗斯曼枝穗霉C.rossmaniae和原肉座菌Protocrea farinosa。对其宏观和微观特征进行了描述和图示,对我国材料与上述种的原始描述进行了比较,并利用ITS和28S r DNA的序列比对为准确鉴定提供了依据。此外,首次在大陆地区报道密集枝穗霉C.compactiuscula和大孔光壳Stilbocrea macrostoma并发现黄壳Ochronectria calami在广东分布。[中文摘要附注:Clonostachys属的汉名首次在综述性文章"真菌杀线虫代谢物的研究进展"中引证国外文献时提及,被译为"螺旋聚孢属"(董锦艳等2001)。随后,在作为中国新记录属发表时,文章题目将其译为"枝穗霉属"(Gao et al.2008)。考虑到后者是第一次根据我国材料对该类群进行分类学研究时提供的汉名,其译法体现了属的形态学特征,因此本文采用后一种译名作为该属的名称,并建议永久使用。]

丝状真菌红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)纤维素酶基因的转录调控研究进展

红褐肉座菌(Hypocrea jecorina,即Trichoderma reesei的有性型)是工业上重要的纤维素酶生产菌株,也是用于研究纤维素酶和半纤维素酶基因转录调控机制的模式菌株。在诱导物存在的条件下,H.jecorina可以迅速启动这些糖苷水解酶基因的转录表达,但不同的诱导物对纤维素酶和半纤维素酶基因的诱导表达模式存在一定差异。目前对不溶性诱导物如结晶纤维素如何诱导这些基因的起始转录问题有3种假设;并且已发现某些参与调控纤维素酶基因转录的正调控因子(Xyr1、Ace2、Hap2/3/5)和负调控因子(Ace1、Cre1),这些调控因子可在纤维素酶基因启动子上结合且彼此间可能发生相互作用。本文系统综述了红褐肉座菌纤维素酶基因转录表达调控中的关键因素及其相互作用的相关研究进展。

亚肉座菌天然产物的分离鉴定及抗肿瘤活性

亚肉座菌能侵染粉虱和介壳虫,具有悠久的生物防治历史,但关于其天然产物的种类及抗肿瘤活性研究尚不深入。本研究借助硅胶柱、HPLC等色谱技术从亚肉座菌发酵液中分离纯化到6个化合物。基于核磁共振和质谱数据解析,化合物1–6依次鉴定为:5α,8α-表二氧-24(R)-甲基胆甾-6,22-二烯-3β-醇5α,8α-epidioxy-24(R)-methylcholesta-6,22-diene-3β-ol(1),杜斯塔宁dustanin(2),3β-乙酸基-15α,22-二羟基何伯烷3β-acetoxy-15α,22-dihydroxyhopane(3),麦角固醇ergosterol(4),7β,15α,22-三羟基何伯烷7β,15α,22-trihydroxyhopane(5)和5-(羟甲基)呋喃-3-羧酸flufuran(6),化合物1和6为首次从虫生真菌中获得。对化合物进行抗肿瘤活性测试发现,化合物1和5对人肝癌细胞(BEL-7404)展示显著的抗肿瘤活性,IC50值分别为28μmol/L和12.4μmol/L,而它们对人正常肝脏细胞(HL-7702)和肾脏上皮细胞(HEK-293T)均未呈现出明显活性。该研究对阐明亚肉座菌代谢产物及其活性提供了重要数据,为开发抗肿瘤新药提供了理论参考。

三株亚肉座菌乙酸乙酯提取物生物活性及GC-MS分析

采用乙酸乙酯提取3株亚肉座菌菌丝体,测试虫生真菌乙酸乙酯提取物(EAE)的抗肿瘤、抗菌和抗氧化活性,并借助GC-MS方法分析各提取物中的化学成分。结果发现2株亚肉座菌的菌丝体EAE对HepG2细胞的抑制活性较强,IC50均小于9μmol/L;抗菌结果表明2株真菌的提取物具有抑制细菌生长的作用;1株供试菌的EAE表现出较强的DPPH自由基清除活性(清除率可达85%)。GC-MS分析表明从亚肉座菌JXJG201717、JXJG201720和ARSEF7697的EAE中分别鉴定出21、35和39种成分,主要成分为酯类、醇类和酸类;盘状亚肉座菌JXJG201720与ARSEF7697有相同化合物13个,与暹罗亚肉座菌JXJG201717存在7个相同化合物。本研究表明虫生亚肉座菌具有产生丰富活性成分的能力,彰显出多种利用价值。

东方肉座菌EU7-22纤维素内切酶Ⅰ的异源表达

[目的]实现东方肉座菌纤维素内切酶EGⅠ在毕赤酵母中的表达,获得重组EGⅠ。[方法]通过RT-PCR获得EGⅠ开放阅读框。将EGⅠ成熟肽和PHO1信号肽的DNA片段插入p PIC3. 5K后,重组表达载体电转化毕赤酵母。通过甲醇诱导表达和镍柱纯化获得EGⅠ。以羟甲基纤维素钠检测活性,以肽N-糖苷酶F分析N-糖基化,以SDSPAGE分析表达情况和糖基化修饰。[结果]获得EGⅠ分泌表达菌株,诱导96 h后上清液活性为0. 513±0. 002 U/m L,纯化后的EGⅠ活性为0. 558±0. 012 U/mg。SDS-PAGE表明EGⅠ分子量在100～180 k Da,远高于预测值47. 3k Da,经肽N-糖苷酶F处理后,降至63～75 k Da。[结论]实现了EGⅠ的分泌表达,获得活性为0. 558±0. 012 U/mg的糖基化重组EGⅠ。

鸭毛藻内生真菌Hypocreales sp．的化学成分研究

从采自大连近海的红藻鸭毛藻(Symphyocladia latiuscula)中分离到一株肉座菌目真菌(Hypocreales sp.),对其发酵代谢产物的化学成分进行了研究。利用正相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱层析、制备薄层层析(PTLC)以及重结晶等分离手段,并通过一维、二维核磁共振技术、质谱技术等从该菌发酵液中分离鉴定了10个化合物:双酚A(1);邻羟基苯甲酸(2);吲哚甲酸(3);吲哚乙酸(4);N-乙酰色胺(5);(22E,24R)-麦角甾-7,9,22-三烯-3β-醇(6);过氧化麦角甾醇(7);(22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇(8);(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6β-甲氧基-3β,5α-二醇(9);啤酒甾醇(10)。这些化合物均为首次从该菌中分离得到,其中化合物1为首次作为天然产物分离得到。

产紫杉醇内生真菌Z58的分离和鉴定

本研究从曼地亚红豆杉(Taxus x media)树皮内表皮分离得到一株产紫杉醇的内生真菌Z58,通过高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法对其紫杉醇提取物进行了分析.结果表明,内生真菌Z58的紫杉醇提取物具有和紫杉醇标准品相近的色谱特征峰,其保留时间为10.2 min;也与紫杉醇标准品具有相同的质谱特征峰((M+Na)+=876)和1H-NMR谱带.并通过形态学特征分析和18S rDNA序列分析,将内生真菌Z58初步鉴定为肉座菌属(Hypocrea sp.)真菌.肉座菌Z58的紫杉醇产量约为2.5～3.0μg/g(紫杉醇/菌丝干重),是一株具有潜在应用价值的产紫杉醇内生真菌.