肉毒碱乙酰转移酶基因敲除对长链二元酸生产代谢过程的影响

在利用热带假丝酵母发酵生产长链二元酸的过程中 ,脂肪酸将进入 β 氧化途径 ,代谢产生能量 ,从而降低产物收率。首次以负责运输的肉毒碱乙酰转移酶为改造目标 ,在肉毒碱乙酰转移酶基因中插入潮霉素B抗性基因 ,构建DNA转化质粒 ,并进行一次同源重组 ,得到肉毒碱乙酰转移酶基因单拷贝敲除的基因工程菌。根据摇瓶实验结果 ,该基因工程菌与原始菌株相比 ,十三碳二元酸的产量与摩尔转化率分别提高了 13 0 %和 11 8%。

热带假丝酵母肉毒碱乙酰转移酶酶活测定及重组菌的性质

建立了快速部分提纯和测定热带假丝酵母中肉毒碱乙酰转移酶 (carnitine acetyltransferase, CAT) 酶活的方法. 并考察了重组热带假丝酵母的CAT酶活、产酸能力及烷烃转化率. 结果表明, 重组菌的 CAT酶活比原始菌降低了45%, 胞内二元酸通过β 氧化的无益消耗得到有效抑制. 相应地, 重组菌的产酸能力和烷烃转化率分别提高了11%和12%.

热带假丝酵母及其重组菌产十三碳二元酸的补糖发酵实验

利用热带假丝酵母原始菌F10-1及已构建的肉毒碱乙酰转移酶基因单拷贝缺失重组菌CZ-15,在5L发酵罐中进行了补糖发酵批式培养,生产十三碳二元酸(DCA13).结果表明,肉毒碱乙酰转移酶基因单拷贝缺失后,CZ-15菌株的最佳补糖时间和补糖浓度都与原始菌F10-1不同.采用补糖工艺后,F10-1与CZ-15的十三碳二元酸的产量分别提高了25.0%和23.4%,达到99.5和108.1g/L,烷烃转化率分别提高了35.5%和28.6%.