孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路关键信号分子表达的影响

目的观察孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限（IUGR）胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho—ROCK）通路中关键信号分子及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响，以探讨牛磺酸是否可通过该信号途径促进IUGR胎鼠皮质神经元增殖。方法采取低蛋白饮食法建立IUGR模型，将30只孕鼠按妊娠顺序分为对照组、IUGR模型组（IUGR组）及IUGR＋孕鼠补充牛磺酸组（IUGR＋牛磺酸组），牛磺酸组自妊娠第12天开始于饲料中添加牛磺酸300mg／（kg·d）直至自然分娩。采用实时定量（Real．time）-PCR法检测各组胎鼠脑组织中Ras同源基因（Rho基因）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶基因（ROCK2基因）及PCNA基因mR．NA水平，同时采用免疫组织化学法检测各组胎鼠脑组织PCNA蛋白的表达。结果1．IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织鼢oA、ROCK2及PCNAmRNA水平：肋oAmRNA分别为1．757±0．041、1．498±0．011和1．000±0．000（P〈0．05），ROCK2mRNA分男1为1．548±0．231、1．094±0．049和1．000±0．000（P〈0．05）．PCNAmRNA分别为2．007±0．800、3．034±0．670和1．000±0．000（P〈0．05）。2．IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织PCNA免疫组织化学阳性细胞数分别为（22．24±6．17）、（77．80±14．60）和（11．30±3．18）个／高倍视野（P〈0．05）。结论孕鼠补充牛磺酸可能通过抑制Rho—ROCK信号途径而发挥对IUGR胎鼠的脑保护作用及促进IUGR胎鼠脑发育，为产前补充牛磺酸促进IUGR脑发育提供了理论依据。

对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变

目的探讨对香豆酸(p-CA)对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法将大鼠分为6组:对照组(n=10)、DN组(n=10)、低剂量对香豆酸组(L-p-CA)(n=10)、中剂量对香豆酸组(M-p-CA)(n=10)、高剂量对香豆酸组(H-p-CA)(n=10)和RhoA激动剂U-46619组(U-46619)(n=12)。对照组大鼠为健康SD大鼠,其他组大鼠均为高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠。造模后,对照组和DN组大鼠灌胃2 mL 0.5%羧甲基纤维素溶液,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠分别灌胃2 mL剂量为50,100,200 mg/(kg·d)的对香豆酸溶液,U-46619组大鼠同时灌胃1 mL对香豆酸溶液(剂量为200 mg/(kg·d))以及1 mL剂量为30μg/(kg·d)的RhoA激动剂U-46619。各组大鼠均干预12周。治疗后检测各组大鼠生化指标水平:空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和24 h尿蛋白;以及血清氧化应激指标水平:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)。通过苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色评价大鼠肾脏损伤和纤维化。通过qRT-PCR检测肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)转录活性。通过Western blot检测肾脏TNF-α、IL-1β、MCP-1、RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果与对照组比较,DN组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平升高(P<0.05);肾组织发生明显病变,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与DN组比较,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与L-p-CA组和M-p-CA组比较,H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与H-p-CA组比较,U-46619组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平均升高(P<0.05);肾组织病变加重,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变。

麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。

飞燕草素调控RhoA/ROCK信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响

目的:探讨飞燕草素调控Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响。方法:将人结肠癌细胞SW620随机分为对照组、飞燕草素低浓度组(含45μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素中浓度组(含90μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度组(含180μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度+RhoA过表达组(转染RhoA过表达质粒+含180μmol/L飞燕草素培养基培养)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、Transwell及划痕实验分别检测SW620细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用流式细胞术检测SW620细胞凋亡情况。血管生成实验检测SW620细胞血管生成拟态形成情况。采用RT-qPCR检测SW620细胞RhoA、ROCK mRNA表达。采用Western blot检测SW620细胞RhoA、ROCK、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与对照组比较,飞燕草素低、中、高浓度组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平呈浓度依赖性降低,凋亡率呈浓度依赖性升高(均P<0.05)。与飞燕草素高浓度组比较,飞燕草素高浓度+RhoA过表达组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:飞燕草素可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减弱结肠癌细胞恶性生物学行为及血管生成拟态形成,并促进细胞凋亡。

活血通络方调控Rho/ROCK通路对脑卒中大鼠肢体运动功能恢复的影响

目的:探讨活血通络方对脑卒中大鼠前肢运动功能的影响,及对肉瘤同源基因A(RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)通路的调控作用,初步探讨其影响肢体运动功能恢复的机制。方法:取Wistar大鼠,用中动脉线栓阻塞法复制大鼠脑卒中模型,并随机分为假手术组、模型组、活血通络方低剂量组(8.68 g/kg)、高剂量组(34.72 g/kg)、RhoA激动剂(LPA,5 nmol/kg)组、活血通络方+LPA组(活血通络方34.72 g/kg+LPA 5 nmol/kg),每组20只。各组于术后1周开始给药,术后5周后,足失误试验及走横木试验评价大鼠肢体运动功能恢复状况;生物素化葡聚糖胺(BDA)法染色结合生长相关蛋白(GAP-43)免疫荧光法检测颈髓纤维束走行变化;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测颈髓组织RhoA、ROCK2、髓鞘相关阻断因子(Nogo-A)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)等蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠足失误比率升高,走横木评分降低,大鼠出现肢体运动功能障碍。术后5周给药结束后,模型组大鼠肢体运动功能较术后1周有所恢复,损伤侧与未损伤侧颈髓组织BDA、GAP-43阳性表达及未损伤侧颈髓组织RhoA、ROCK2、Nogo-A、MAG蛋白表达降低(P<0.05)。活血通络方低剂量组、高剂量组大鼠肢体运动功能恢复好于模型组,未损伤侧颈髓组织BDA、GAP-43阳性表达及RhoA、ROCK2、Nogo-A、MAG蛋白表达较模型组进一步降低,损伤侧颈髓组织BDA、GAP-43阳性表达较模型组进一步升高(P<0.05)。LPA组大鼠肢体运动功能恢复最差,上述指标变化与模型组相反(P<0.05)。活血通络方+LPA组肢体运动功能恢复低于活血通络方高剂量组(P<0.05)。结论:活血通络方可能通过抑制脑卒中未损伤侧皮质脊髓束RhoA/ROCK2通路活化,促进皮质脊髓束异常路径重塑,发挥促进肢体运动功能恢复的作用。

针刺调节RhoA/ROCK信号通路对创伤性脑出血大鼠血脑屏障的影响

目的:探究针刺调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对创伤性脑出血(TICH)大鼠血脑屏障的影响。方法:随机将SD大鼠分为假手术(Sham)组、TICH组、针刺组、RhoA抑制剂组,除Sham组外,其余各组均采用自由落体击打法制备TICH模型,于TICH模型大鼠苏醒后,针刺组给予百会穴透刺患侧曲鬓穴针刺干预,RhoA抑制剂组给予Rhosin(40 mg/kg)腹腔注射干预,连续干预3 d。3 d后采用Loeffler评分法评估神经缺损程度(Loeffler评分与神经缺损程度呈负相关);烘干法测定脑组织含水量;原位末端标记测定法(TUNEL)染色检测脑组织神经元凋亡情况;伊文思蓝染色(Evans blue)检测血脑屏障损伤情况(伊文思蓝渗透量与血脑屏障损伤严重程度呈正相关);蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Sham组比较,TICH组Loeffler评分减少(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组Loeffler评分增加(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组比较,TICH组脑组织RhoA、ROCK蛋白表达增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组RhoA、ROCK蛋白表达减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺可保护TICH大鼠血脑屏障,可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路激活而改善脑水肿以及神经损伤。

骨髓间充质干细胞基于Rho/ROCK信号通路对膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对比各组软骨组织Mankin评分,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及RhoA、ROCK蛋白表达水平,分析BMSCs对KOA大鼠软骨细胞凋亡的影响。结果BMSCs组Mankin评分高于正常组、低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组血清MMP-1、TNF-α、Bax、RhoA、ROCK表达水平低于模型组、高于正常组,IL-10、Bcl-2表达水平高于模型组、低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组软骨细胞凋亡指数低于模型组、高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Rho/ROCK信号通路调控BMSCs可改善KOA大鼠膝关节软骨病理状态、抑制炎症反应蔓延、调控Bax、Bcl-2蛋白表达、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关,证实BMSCs具有良好的抗软骨细胞凋亡疗效。

绿茶提取物介导Rho/ROCK通路缓解脑梗死大鼠脑组织损伤的实验研究

目的:探讨绿茶提取物对Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)通路的调控作用及对脑梗死大鼠脑损伤的影响,初步探讨其作用机制。方法:用线栓法复制大鼠脑梗死模型,并随机分为假手术组、模型组、绿茶提取物组(200 mg/kg)、Rho抑制剂组(给予盐酸法舒地尔15 mg/kg)、Rho激动剂组(给予溶血性磷脂酸50 mmol/kg)、联合组(绿茶提取物+Rho激动剂),每组18只。给药结束后,观察大鼠行为变化;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死状况;尼氏及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的黏性末端标记(TUNEL)染色法观察神经元损伤及凋亡情况;鬼笔环肽染色观察神经元细胞骨架变化;透射电镜下观察神经突触结构变化;免疫组化法观察Rho阳性表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Rho/ROCK通路蛋白、促神经生长因子[神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子3(NT3)]、神经生长抑制因子[轴突生长抑制因子(NogoA)、髓鞘相关蛋白(MAG)、切丝蛋白(cofilin)]、突触再生重塑相关蛋白[突触后致密物质(PSD-95)、突触素(SYP)等]蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积均增加,脑皮层神经元损伤和凋亡、突触小泡破裂融合等结构损伤及细胞骨架破坏严重,Rho/ROCK通路活化,及其介导的促神经生长因子表达降低,而神经抑制因子表达升高(P<0.05)。绿茶提取物及Rho抑制剂均可减轻脑皮层神经元损伤和凋亡、突触小泡破裂融合等结构损伤及细胞骨架破坏等病理损伤,降低神经功能缺损评分及脑梗死体积,抑制Rho/ROCK通路活化和神经抑制因子表达,促进促神经生长因子表达(P<0.05)。Rho激动剂可逆转绿茶提取物的上述作用(P<0.05)。结论:绿茶提取物可抑制Rho/ROCK活化,促进脑梗死后神经元及突触的再生及重塑,改善神经功能损伤,发挥脑保护作用。

芍药苷调控RhoA/ROCK2通路对阿尔茨海默病大鼠认知功能障碍的影响

目的探索芍药苷调控Ras同源基因家族成员(Rho)A/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)2通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能障碍的影响。方法取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芍药苷(20 mg/kg)组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、芍药苷(20 mg/kg)+Rhosin(40 mg/kg)组,除假手术组外,向其余各组大鼠海马CA1区注入β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1~42)多肽诱导建立AD模型,以药物分组干预后,通过Morris水迷宫实验测定各组大鼠逃避潜伏期,以评测其认知功能;通过苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠海马组织病理形态变化;通过试剂盒检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及血清致炎因子白细胞介素(IL)-6和干扰素(IFN)_(-γ)含量;通过Western印迹实验检测各组海马组织RhoA/ROCK2通路蛋白RhoA、ROCK2的表达水平。结果与假手术组相比,模型组神经元细胞结构萎缩,变性死亡,排列紊乱疏松,数目明显减少,海马组织呈现明显损伤,海马组织SOD含量显著降低(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物干预组海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与芍药苷组、Rhosin组分别相比,芍药苷+Rhosin组大鼠海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论芍药苷可能通过抑制RhoA/ROCK2通路激活,减弱AD大鼠氧化应激与炎症反应,缓解其海马组织病理损伤,提高大鼠学习记忆能力,改善其认知功能障碍。

鹿茸多肽对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响

目的探讨鹿茸多肽(VAP)对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响。方法APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和鹿茸多肽组,每组20只,另以同窝同性别阴性小鼠20只设立为对照组。鹿茸多肽组小鼠鹿茸多肽100 mg/kg灌胃给药,每天1次,连续28 d。治疗后水迷宫实验检测并记录小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;透射电子显微镜观察突触的超微结构;免疫荧光切片观察海马CA1区Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ)的表达;Western blotting法检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白相对表达量;ELISA法测定海马β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)含量。结果与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组逃避潜伏期均缩短,跨越平台次数增多。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组小鼠海马区突触计数增多,突触间隙宽度减小,突触后致密物厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,对照组和鹿茸多肽组CA1区RhoA和ROCKⅡ表达量减少,Western blotting检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白表达水平也减少(P<0.05)。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组海马Aβ;含量均下降(P<0.05)。结论鹿茸多肽对阿尔茨海默病模型小鼠神经损伤有保护作用,其机制可能通过抑制Rho/ROCK通路中RhoA和ROCKⅡ的表达,促进突触结构的改变和Aβ;含量减少,减轻神经损伤,改善认知功能。

黄芪甲苷通过RhoA/ROCK2通路对脑膜炎大鼠皮质神经元的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对脑膜炎(BM)大鼠皮质神经元的保护作用,以及对RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2(ROCK2)通路的影响。方法:取SD新生大鼠,经小脑延髓池注射B族溶血性链球菌(GBS)建立BM模型,并随机分为正常对照组、模型组、黄芪甲苷组、RhoA激动剂组、黄芪甲苷+RhoA激动剂组,每组20只。各组连续给药3 d。给药结束后处死大鼠,ELISA法检测脑脊液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、降钙素原(PCT)水平;取大脑皮质组织,透射电镜检测神经元超微结构变化;TUNEL法检测神经元细胞凋亡率;鬼笔环肽免疫荧光染色法特异性检测纤维型肌动蛋白(F-actin)在神经元中分布情况;免疫荧光共定位检测神经元特异性标记蛋白-微管相关蛋白2(MAP2)与RhoA共表达数目;免疫组化法检测ROCK2阳性表达水平;蛋白免疫印迹法检测勿动蛋白-A(Nogo-A)、溶血磷脂酸(LPA)蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠活动量减少,死亡、神经元结构损伤加重,并出现线粒体肿胀、内质网扩张等细胞器损伤等情况,F-actin在神经元中分布增多,骨架重排增多,脑脊液中TNF-α、NSE、PCT水平,神经元细胞凋亡率,RhoA;MAP2;及ROCK2阳性表达,Nogo-A及LPA表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,黄芪甲苷组大鼠无死亡,活动量稍有增加,神经元结构损伤及凋亡减少,F-actin在神经元中分布减少,骨架重排减少,脑脊液中TNF-α、NSE、PCT水平,神经元细胞凋亡率,RhoA;MAP2;及ROCK2阳性表达,Nogo-A及LPA表达均降低(P<0.05);RhoA激动剂组大鼠死亡增加,神经元结构损伤及凋亡进一步加重,F-actin在神经元中分布增多,骨架重排增高,脑脊液中TNF-α、NSE、PCT水平,神经元细胞凋亡率,RhoA;MAP2;及ROCK2阳性表达,Nogo-A及LPA表达均进一步升高(P<0.05)。黄芪甲苷+RhoA激动剂组大鼠上述指标变化与黄芪甲苷组相反(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可抑制BM大鼠RhoA/ROCK2通路激活,抑制神经元骨架重构,缓解神经元结构损伤及凋亡。

右美托咪定对结肠癌模型大鼠的治疗作用及对RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的:探讨右美托咪定对结肠癌模型大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法:通过1,2-二甲肼诱导建立结肠癌大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组,右美托咪定低(25μg/kg)、中(50μg/kg)和高(100μg/kg)剂量组,每组6只。另取6只未造模大鼠作为正常组。各组大鼠给予相应药物处理4周,观察大鼠的一般状况;检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;解剖观察肿瘤的生长和分布情况;采用苏木精-伊红染色观察病理学变化;检测正常结肠组织和结肠癌组织中RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果:正常组大鼠体重随时间增长,结肠组织结构正常,无炎症细胞浸润;模型组大鼠体重增长缓慢,肛门红肿溃破、大便稀溏,结肠上可见突出肿瘤组织,结肠组织结构异常,炎症细胞浸润程度严重;右美托咪定低、中和高剂量组大鼠体重均高于模型组,肠壁糜烂出血情况有不同程度的减轻,结肠组织结构相比于模型组较为完整,炎症细胞浸润程度有所降低。相较于正常组,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平以及结肠癌组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);相较于模型组,右美托咪定低、中和高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平以及结肠癌组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:右美托咪定对结肠癌大鼠具有一定的治疗作用,可能与其抑制RhoA/ROCK1通路有关。

丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响

目的:探讨丹参素对IUGR胎鼠脑神经细胞及脑组织Rho/ROCK信号通路的影响。方法:将40只孕鼠以随机数字表法分为正常组、IUGR组、IUGR+低剂量、中剂量、高剂量丹参素组,予以低蛋白饮食法建立IUGR模型,正常组、IUGR组于妊娠第12天尾静脉注射等体积生理盐水5.0 mg/(kg·d),丹参素低、中、高剂量组分别于妊娠第12天起尾静脉注射等体积不同浓度丹参素溶液,低剂量组10μg/(kg·d),中剂量组20μg/(kg·d),高剂量组30μg/(kg·d),于自然分娩后6 h内测定胎鼠体质量,麻醉处死后行脑组织HE染色,选择RT-PCR、Western blot法对RhoA、ROCKⅡmRNA及蛋白表达进行测定,流式细胞术检测脑神经细胞凋亡率。结果:IUGR组胎鼠体质量明显低于正常组,IUGR+丹参素高剂量组胎鼠体质量高于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。IUGR组RhoA、ROCKⅡmRNA、蛋白表达及脑神经细胞凋亡率均高于正常组,而IUGR+丹参素高剂量组低于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。结论:丹参素可调控Rho/ROCK信号通路并抑制其活性,以促进IUGR胎鼠脑神经细胞增殖,改善其生长发育。

天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质中RhoA和ROCK-2蛋白表达的影响

目的研究天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK-2)表达的影响。方法大脑中动脉阻塞法(MCAO)造模后,天麻素组腹腔注射天麻素制剂治疗,其他组不加干预。采用Nissl染色观察缺血侧额叶皮质神经细胞变化情况;免疫组化和Western blot检测缺血侧额叶皮质中RhoA、ROCK-2蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,模型组缺血侧额叶皮质区细胞胞体明显萎缩,胞质减少,部分胞核固缩;Nissl染色细胞数减少(P<0.001);RhoA和ROCK-2蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,天麻素组缺血侧额叶皮质细胞萎缩程度减轻;Nissl染色细胞数增加(P<0.05);RhoA和ROCK-2蛋白表达减少(P<0.05)。结论天麻素可对脑缺血后缺血侧额叶皮质发挥保护作用,其机制可能与抑制RhoA、ROCK-2蛋白表达有关。

银杏叶提取物对糖尿病肾病模型小鼠肾脏炎症的抑制作用及机制

目的探讨银杏叶提取物(GBE)抑制糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾脏炎症的作用及其可能机制。方法以高脂高糖喂养KK/Ay小鼠建立DN模型,并分为模型组、阳性对照组[二甲双胍200 mg/(kg·d)]和GBE低、高剂量组[100、200 mg/(kg·d)],每组6只;另取普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠6只,作为对照组。各药物组小鼠灌胃相应药液,对照组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续8周。检测小鼠的体重、空腹血糖、24 h摄食量、24 h尿量和血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素12(IL-12)、IL-10、晚期糖基化终末产物(AGEs)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,计算其双侧肾脏质量与体重的比值,观察其肾皮质的病理损伤和纤维化改变,并检测其肾皮质中巨噬细胞极化标志蛋白[M1型:诱导型一氧化氮合酶(iNOS);M2型:精氨酸酶1(Arg-1)]和AGEs-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/Ras同源基因家族成员A(RhoA/)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组比较,GBE低、高剂量组小鼠肾皮质增生、空泡、炎症细胞浸润、肾皮质纤维化等症状均有所好转;其体重、血清IL-10水平、肾皮质中Arg-1蛋白的表达水平均显著高于模型组(P<0.01);空腹血糖和24 h摄食量、尿量,血清MCP-1、IL-12、BUN、Scr、AGEs水平,双侧肾脏质量与体重的比值,肾损伤评分和肾间质纤维化比例,肾皮质中iNOS、RAGE、RhoA、ROCK1(GBE低剂量组除外)蛋白的表达水平均显著低于模型组(P<0.01)。结论GBE可改善DN模型小鼠的肾损伤,并减轻其炎症反应,其机制可能与抑制AGEs-RAGE/RhoA/ROCK信号通路、调节巨噬细胞极化有关。

川陈皮素对食管癌KYSE150细胞存活、侵袭和凋亡的影响及机制实验研究

目的:探究川陈皮素对食管癌KYSE150细胞存活、侵袭及凋亡的影响及可能的机制。方法:将培养至对数生长期的KYSE150细胞分为对照组(常规培养)、顺铂组(0.5μg/ml顺铂)、川陈皮素低(10μg/ml)、中(20μg/ml)、高(40μg/ml)浓度组。采用MTT法检测KYSE150细胞存活率。采用Transwell实验检测KYSE150细胞侵袭能力。采用流式细胞术检测KYSE150细胞凋亡率。采用荧光定量PCR法检测KYSE150细胞Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、ROCK2 mRNA表达。采用Western bolt法检测KYSE150细胞RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与对照组比较,顺铂组及川陈皮素低、中、高浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(均P<0.05)。与顺铂组比较,川陈皮素低、中浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。川陈皮素高浓度组和顺铂组上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。川陈皮素低、中、高浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平依次降低,凋亡率依次升高(均P<0.05)。结论:川陈皮素能够抑制KYSE150细胞的存活和侵袭,促进凋亡,其机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

汉黄芩素干预糖尿病脑梗死模型大鼠的神经损伤

背景:汉黄芩素是黄芩根中提取的一种黄酮类化合物,既往研究表明汉黄芩素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,还能降低糖尿病小鼠的血糖及其并发症,但其在糖尿病脑梗死中的作用及机制还不清楚。目的:探究汉黄芩素对糖尿病脑梗死大鼠神经损伤的影响,并探究其作用机制。方法:将SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、汉黄芩素低、中、高剂量组和汉黄芩素高剂量+RhoA激活剂组,每组10只。除对照组外,其余组通过腹腔注射链脲佐菌素和大脑中动脉闭塞法构建糖尿病脑梗死大鼠模型,汉黄芩素低、中、高剂量组分别灌胃10,20,40 mg/kg汉黄芩素,汉黄芩素高剂量+RhoA激活剂组灌胃40 mg/kg汉黄芩素并腹腔注射10 mg/kg溶血磷脂酸,对照组和模型组给予等量生理盐水,1次/d,连续7 d。末次给药结束后,各组大鼠进行神经功能缺损评分,检测血糖水平,TTC染色检测脑梗死体积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理变化,ELISA试剂盒检测脑组织中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和丙二醛、超氧化物歧化酶水平,Western blot检测脑组织中RhoA、ROCK2蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组大鼠神经元结构严重受损,细胞坏死、变性;神经功能缺损评分、血糖水平、脑梗死体积升高(P<0.05);脑组织中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、丙二醛水平升高(P<0.05),超氧化物歧化酶水平下降(P<0.05);脑组织中RhoA、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);(2)与模型组相比,汉黄芩素低、中、高剂量组神经元损伤改善,细胞变性和坏死减少;神经功能缺损评分、血糖水平、脑梗死体积下降(P<0.05);脑组织中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、丙二醛水平下降(P<0.05),超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05);脑组织中RhoA、ROCK2蛋白表达下降(P<0.05);(3)与汉黄芩素高剂量组相比,汉黄芩素高剂量+RhoA激活剂组明显抑制糖尿病脑梗死大鼠上述指标的改善(P<0.05)。结果表明:汉黄芩素能够改善糖尿病脑梗死大鼠血糖水平,减轻脑梗死和神经损伤,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

白芍总苷调节RhoA/ROCK1信号通路对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨白芍总苷通过调节Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(RhoA/ROCK1)信号通路对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法 通过阻断肝动脉和门静脉1 h建立肝缺血再灌注损伤大鼠模型,设假手术组、模型组、白芍总苷(100 mg/kg)组、白芍总苷+Rhosin(100 mg/kg+40 mg/kg)组和白芍总苷+LPA(100 mg/kg+1 mg/kg)组,每组8只。连续治疗6周后,检测各组大鼠血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)];HE、TUNEL染色法观察肝组织病理改变和细胞凋亡,并计算肝损伤评分和凋亡指数(AI);分光光度法检测肝组织中氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量],ELISA检测炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量;通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测肝组织中RhoA、ROCK1、核因子-κB p65(NF-κB p65)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型半胱氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)m RNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,白芍总苷组和白芍总苷+Rhosin组血清ALT、AST、TBiL水平显著降低(P<0.05);肝组织病理改变和细胞凋亡状况均明显改善,肝损伤评分和细胞AI均显著降低(P<0.05);SOD、CAT活性显著升高,MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05);RhoA、ROCK1、NF-κB p65、Bax、C-Caspase-3m RNA和蛋白表达均显著降低,Bcl-2m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与白芍总苷组相比,Rhosin可显著增强白芍总苷对模型大鼠肝功能、肝组织病变、细胞凋亡、氧化应激、炎症及RhoA/ROCK1信号通路相关m RNA和蛋白表达的作用;LPA则显著逆转了上述调控作用。结论 白芍总苷可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路,减轻氧化应激、炎症和细胞凋亡,从而对大鼠肝缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。

基于Rho/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞迁移的影响

目的:探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制。方法:分离并培养小鼠骨髓源性DCs,显微镜观察不同时期细胞形态变化,流式细胞术检测CD11c+比例,鉴定DCs纯度;麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50、100 g·L^(-1))处理细胞24 h,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测麻黄细辛附子汤对细胞增殖的影响,筛选给药浓度;脂多糖(LPS)造模后,将DCs分为空白组、模型组、麻黄细辛附子汤组(2、4、8 g·L^(-1)),流式细胞术检测各组细胞表面分子CD80、CD86、主要组织相容性复合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子表达;Transwell小室观察细胞迁移情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞表面趋化因子C-C-基元受体7(CCR7)、趋化因子C-X-C-基元受体4(CXCR4)含量;免疫荧光法(IF)检测细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA、ROCK1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著升高(P<0.01),细胞迁移至下室数量显著增加(P<0.01),CCR7、CXCR4含量明显增加(P<0.05,P<0.01),F-actin表达显著升高(P<0.01),RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,麻黄细辛附子汤组(2、4、8 g·L^(-1))处理24 h后,CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著降低(P<0.01),细胞迁移至下室数量明显减少(P<0.05),CCR7、CXCR4含量明显减少(P<0.05,P<0.01),F-actin表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:麻黄细辛附子汤可以抑制小鼠DCs迁移,其作用机制可能与降低Rho/ROCK信号通路活性影响细胞骨架改变有关。