六例肉碱棕榈酰基转移酶2缺乏症患儿临床特征及基因变异分析

目的:探讨肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)缺乏症患儿的临床表型及基因变异特点。方法:回顾性分析6例CPT2缺乏症患儿的临床和基因检测资料,采用串联质谱法检测血酰基肉碱水平,全外显子基因测序法检测基因变异。结果:6例CPT2缺乏症患儿中男性4例、女性2例,平均确诊年龄为32个月(15 d~9岁)。其中1例无临床症状及实验室检查异常、2例迟发型、3例婴儿型。3例由新生儿筛查确诊;3例因临床表现就诊,起病时有发热、肌肉乏力伴肌酶增高。5例患儿表现为游离肉碱降低,棕榈酰基肉碱、十八碳烯酰肉碱升高。6例患儿检测到CPT2基因变异8个位点(携带双位点突变4例,携带单位点突变2例),3种为已知变异(p.R631C、p.T589M和p.D255G),5种为新报道变异(p.F352L、p.R498L、p.F434S、p.A515P、c.153-2A>G)。经PolyPhen2和SIFT软件预测,5个新报道变异中c.153-2A>G和p.F352L为疑似致病变异,p.R498L、p.F434S和p.A515P为临床意义未明变异。结论:CPT2缺乏症临床表型多样,通过新生儿血串联质谱筛查及基因检测有助于早期诊断,确诊后及时治疗大多预后良好。

肉碱棕榈酰基转移酶2过表达载体构建及在奶牛乳腺上皮细胞中验证

为进一步研究CPT2基因在脂质代谢中的作用,试验构建了绿色荧光CPT2过表达载体,将其转入奶牛乳腺上皮细胞,通过荧光定量方法,检测CPT2基因mRNA的表达水平差异,在细胞水平验证了CPT2过表达载体的表达效率。结果表明:过表达组的CPT2基因mRNA表达量与对照组(空载组)相比有所提高。说明CPT2过表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞后,CPT2基因mRNA表达水平显著升高。

1例肉碱棕榈酰转移酶2缺乏症报道并文献复习

目的:总结肉碱棕榈酰转移酶2(CPT2)缺乏症的诊治经验。方法:回顾性分析1例CPT2缺乏症患儿的临床资料和基因检测结果,并复习相关文献。结果:患儿,男,1岁7个月,第二次发病,两次临床表现主要为横纹肌溶解综合征,基因检测CPT2基因提示突变c. 338C>T(p. S113L)和c. 1711C>A(p. P571T),c. 338C>T(p. S113L)来自母亲,c. 1711C>A(p. P571T)来自父亲,最终确诊为CPT2缺乏症。结论:反复发作的较小年龄横纹肌溶解综合征患儿需警惕遗传代谢病如CPT2缺乏症,通过基因检测做到早发现、早预防。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

棕榈酸通过上调ACC/FAS/DGAT2通路表达诱导BRL 3A细胞脂肪变性

为探究棕榈酸诱导BRL 3A细胞脂肪变性的机制,以不同浓度的PA(0、0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1)处理BRL 3A细胞24 h,用CCK-8法、RTCA技术检测细胞增殖情况;油红O染色,观察细胞脂滴生成情况;DAPI/F-actin双染,观察细胞核及骨架形态;采用比色法测定TG含量;采用RT-PCR检测脂肪合成相关基因Acaca、Fasn、Dgat 2转录水平;采用Western blot检测脂肪合成关键蛋白ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT 2表达量。结果显示:与对照组相比,0.2、0.4 mmol·L^-1 PA对细胞增殖无影响,0.6 mmol·L^-1 PA抑制细胞增殖;油红O染色结果显示0.4 mmol·L^-1 PA处理细胞24 h,脂滴大量蓄积,发生明显脂肪变性;随PA浓度升高,细胞核发生皱缩、变形、碎裂,细胞骨架被破坏,微丝断裂;TG含量极显著增加(P<0.01);不同浓度PA(0.2、0.4、0.6 mmol·L^-1)处理组脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat 2 mRNA转录水平均显著升高(P<0.05),ACC、FAS、SCD1、GPAM、DGAT2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);0.6 mmol·L^-1 PA组与0.4 mmol·L^-1 PA组相比,SCD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。高浓度棕榈酸抑制BRL 3A细胞增殖,对细胞核及骨架产生损伤;棕榈酸诱导细胞发生脂滴蓄积,TG增加,通过上调脂肪合成关键基因Acaca、Fasn、Dgat 2 mRNA转录水平及ACC/FAS/DGAT2通路蛋白表达水平诱导细胞发生脂肪变性。

罗格列酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌UCP3、CPT-Ⅰ mRNA的表达及糖脂代谢的影响

目的观察罗格列酮对2型糖尿病大鼠骨骼肌解偶联蛋白3(UCP3)、肉碱棕榈酰转移酶-I(CPT-I)mRNA表达及疗效的影响。方法58只SD大鼠随机分为普通饲养组(NC组,n=15)、高脂饲养组(HF组,n=15)和糖尿病组。糖尿病组大鼠在高脂饲料喂养至8周末时,腹腔注射链唑霉素(25 mg/kg)制作糖尿病模型;再随机分为糖尿病治疗组(DMT组,n=14)和糖尿病未治疗组(DMC组,n=14),分别给予罗格列酮(3mg.kg-1.d-1)和灭菌生理盐水灌胃,持续8周。UCP3、CPT-I mRNA表达采用RT-PCR测定。结果HF与DMC组骨骼肌UCP3、CPT-I mRNA表达明显低于NC组(P<0.05)。与DMC组比较,DMT组血糖和游离脂肪酸降低,而胰岛素敏感性和骨骼肌UCP3、CPT-I mRNA表达增加(P<0.05)。结论2型糖尿病大鼠骨骼肌UCP3、CPT-I mRNA表达降低;而罗格列酮可上调UCP3、CPT-I mRNA的表达,降低血糖、FFA水平。

CPT2在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肉碱棕榈酰转移酶-2(CPT2)在卵巢上皮癌组织中的表达及临床意义,为研究卵巢癌的治疗方法提供新的靶点。方法收集2015年3月至2016年12月在西京医院接受治疗的20例卵巢上皮癌患者的新鲜组织标本,运用qRT-PCR、Western blot方法检测卵巢癌细胞和20对新鲜卵巢上皮癌组织及癌旁组织中CPT2 mRNA与蛋白的表达水平;另收集2010年1月至2014年8月就诊于西京医院的121例初治卵巢上皮癌患者的组织病理石蜡切片,运用免疫组织化学方法检测121例初治卵巢上皮癌组织石蜡病理切片中CPT2的表达,并分析CPT2与患者临床病理参数及生存预后的关系。结果与正常卵巢上皮细胞和癌旁组织相比,卵巢癌细胞和卵巢上皮癌组织中CPT2 mRNA和蛋白水平表达均显著下调,差异均有统计学意义(mRNA:t值分别为4.381、5.380,P<0.05;蛋白:t值分别为10.258、23.915,P<0.05)。免疫组化结果显示,卵巢上皮癌组织中CPT2的表达水平显著下调,并且CPT2低表达与患者Ⅱ型、Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有网膜转移和淋巴结转移均有关联,差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为10.140、18.812、20.221、4.211、17.405,P<0.05)。生存预后分析显示,CPT2的低表达与患者的不良预后显著关联(HR=0.790,95%CI:0.650~0.950,P<0.05)。结论卵巢癌细胞和卵巢上皮癌组织中CPT2表达显著下调,并与患者的不良预后有关,提示CPT2低表达在卵巢癌的发生发展中可能发挥促癌作用。

肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ缺乏症家系CPT2基因突变分析及产前诊断

分析肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ(CPTⅡ)缺乏症患儿及其父母CPT2基因突变类型,为家系成员提供遗传咨询及产前诊断。先证者,女,于3个月时发烧8 h入院,血液酯酰肉碱谱分析显示棕榈酰肉碱显著增高,提示CPTⅡ缺乏症。收集患儿临床资料,采集患儿和父母外周血,提取基因组DNA,应用直接测序法进行CPT2基因5个外显子编码区及与外显子交界的部分内含子区域进行测序。患儿母亲于妊娠中期采取羊水,分取羊水细胞进行CPT2基因突变分析。Sanger测序发现先证者CPT2基因存在两个已知致病突变c.886C>T(p.R296X)和c.1148T>A(p.F383Y),突变来自父母双方。母亲第二胎羊水细胞CPT2基因存在c.886C>T(p.R296X),为致病基因携带者。胎儿出生后血液酯酰肉碱谱正常,发育正常。通过家系CPT2基因分析,证实了先证者死因为CPTⅡ缺乏症,在突变明确的前提下,成功地进行了下一胎同胞的产前诊断,为该家庭提供帮助。

基于PPAR-α/CPT-1信号通路的桑叶总黄酮调控T2DM大鼠肝脏脂质代谢作用及其机制

目的:观察桑叶总黄酮改善2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏脂代谢紊乱的药效学作用,并基于肝脏过氧化物酶增殖物激活受体-α(PPAR-α)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-l)蛋白探讨其作用机制。方法:采用醇提法+大孔树脂纯化法提取、纯化桑叶总黄酮,并进行鉴定。利用高脂肪饮食(HFD)+链脲佐菌素(STZ)法建立T2DM大鼠模型,选择血糖≥11.1 mmol·L^(-1)的大鼠,以桑叶总黄酮高、中、低剂量(300、150、75 mg·kg^(-1))分别灌胃给药8周,观察大鼠体质量及血糖情况。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏病理变化,生化法检测大鼠血清脂代谢指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织PPAR-α及CPT-1 mRNA和蛋白的表达。结果:桑叶总黄酮干预8周后,与正常组比较,模型组大鼠摄食量、肝脏指数、空腹血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠摄食量、空腹血糖、肝脏指数显著降低(P<0.01)。HE结果显示,正常组大鼠肝组织结构完整未见明显异常;模型组大鼠肝细胞空泡变性且有炎性浸润;桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠肝脏结构未见明显异常。血脂四项结果显示,与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组TC、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平显著增加(P<0.01)。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著升高(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:桑叶总黄酮可有效降低T2DM大鼠血糖,改善肝脏脂质代谢紊乱,其发挥降糖调脂的作用机制可能是通过激活调控PPAR-α和CPT-1蛋白、促进脂肪酸氧化分解,发挥调控脂质代谢,进而发挥降糖作用。

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(PI3K/Akt/PPARα/CPT-1)信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法:高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍(0.2 g·kg^(-1))组和桑叶水提物(含生药4.0 g·kg^(-1))组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨基酸氨基转移酶(AST)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果:给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低(P<0.01)。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高(P<0.01);桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。

CPT2在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨肉碱棕榈酰转移酶2(CPT2)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的差异化表达以及与临床预后的相关性,为ccRCC的诊治提供新的生物治疗靶点和理论依据。方法首先筛选肿瘤基因组图谱(TCGA)数据,从中获得目的基因CPT2。随后利用R软件分析该基因的差异化表达结果。通过R软件对TCGA下载的临床数据及预后情况进行分析,并绘制可视化图表。利用免疫组化研究该基因在ccRCC组织及癌旁组织中的差异化表达,以及与临床数据的相关性。结果利用R软件对TCGA数据库样本分析得出:CPT2在癌旁组织的表达高于癌组织(P<0.05)。不同年龄及N分期的患者CPT2表达的差异无统计学意义(均P>0.05),不同性别、T分期、M分期、临床分期、病理分级及总生存期的患者CPT2表达的差异有统计学意义(均P<0.05)。免疫组化结果表明:CPT2在癌旁组织中的表达率(100.0%,16/16)高于ccRCC组织(39.7%,23/58,P<0.001)。不同临床分期患者CPT2比较差异有统计学意义(P<0.05),不同性别、T分期、病理分级、M分期、年龄患者CPT2比较差异无统计学意义(均P>0.05)。CPT2的KEGG通路主要为脂肪细胞因子信号通路、胰高血糖素信号通路、脂肪酸降解、脂肪酸代谢、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路等。结论CPT2在肾透明细胞癌中可能是一个抑癌基因,这也许可以作为肾透明细胞癌早期筛查及治疗的潜在生物靶点,为肾透明细胞癌的预防与治疗带来新的方案和方向。

ACBP和5-羟色胺对蜜蜂上颚腺合成10-羟基-2-癸烯酸的影响

【目的】本研究旨在探究酰基辅酶A结合蛋白(ACBP)和胺类信号分子5-羟色胺(5-HT)对意大利蜜蜂上颚腺分泌10-羟基-2癸烯酸(10-HDA)的影响。【方法】以饲喂非特异性dsRNA和糖水为对照,通过饲喂acbp特异性的双链RNA(dsRNA)敲低工蜂acbp的表达;对以上处理组和对照组分别进行上颚腺腺体形态观察,转录组测序和筛选差异基因(P-adjust<0.05);对差异基因进行GO和KEGG富集分析;结合脂肪酸代谢和色氨酸代谢的关键基因表达检测结果以及上颚腺10-HDA含量的检测结果,系统研究ACBP和5-HT对工蜂上颚腺10-HDA合成的影响。【结果】acbp敲低导致上颚腺10-HDA含量显著下降约20%;转录组学比较分析结果发现488个差异基因,主要参与脂肪酸降解、PPAR信号通路和多种氨基酸代谢通路。有趣的是,色氨酸代谢通路的amd,aldh等差异基因的变化可能导致5-HT的积累。然后通过外源5-HT饲喂哺育蜂,发现上颚腺的10-HDA的产量显著下降约30%。外源5-HT引起上颚腺的5-HT1、5-HT2α、5-HT2β受体编码基因上调表达,并显著抑制编码脂肪酸跨膜运输蛋白的线粒体cpt2和过氧化物酶体abcd3的表达。【结论】ACBP主要通过脂肪酸降解和氨基酸代谢两方面影响上颚腺不饱和脂肪酸的合成,并与色胺类信号分子5-HT的正常代谢有关;5-HT抑制上颚腺合成10-HDA,并且显著影响细胞内肉碱棕榈酰转移酶(CPTs)。