SLC25A20基因c.199-10T>G纯合致肉碱酰基转移酶缺乏症1例及家系基因报告

目的 了解肉碱酰基转移酶缺乏症(CACTD)的临床特点。方法 分析SLC25A20基因c.199-10T>G纯合变异致CACTD患儿的临床资料,并结合国内外相关文献分析病例的临床特点。结果 CACTD患儿以出生后全身肤色紫绀伴意识丧失为首发症状,伴有反复低血糖,电解质紊乱;血串联质谱分析示Cit、GAA升高,C0、C2、C3、C4、C4-OH降低及相关比值异常,提示严重的肉碱缺乏,基因检测患儿SLC25A20基因为c.199-10T>G纯合突变,患儿父母在该位点均为c.199-10T>G杂合突变。结论 CACTD发病早,临床表现危重,死亡率高,应提倡开展新生儿遗传代谢病的质谱筛查,对临床可疑患儿及早行血、尿代谢标志物检测及基因分析明确诊断。

六例肉碱棕榈酰基转移酶2缺乏症患儿临床特征及基因变异分析

目的:探讨肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)缺乏症患儿的临床表型及基因变异特点。方法:回顾性分析6例CPT2缺乏症患儿的临床和基因检测资料,采用串联质谱法检测血酰基肉碱水平,全外显子基因测序法检测基因变异。结果:6例CPT2缺乏症患儿中男性4例、女性2例,平均确诊年龄为32个月(15 d~9岁)。其中1例无临床症状及实验室检查异常、2例迟发型、3例婴儿型。3例由新生儿筛查确诊;3例因临床表现就诊,起病时有发热、肌肉乏力伴肌酶增高。5例患儿表现为游离肉碱降低,棕榈酰基肉碱、十八碳烯酰肉碱升高。6例患儿检测到CPT2基因变异8个位点(携带双位点突变4例,携带单位点突变2例),3种为已知变异(p.R631C、p.T589M和p.D255G),5种为新报道变异(p.F352L、p.R498L、p.F434S、p.A515P、c.153-2A>G)。经PolyPhen2和SIFT软件预测,5个新报道变异中c.153-2A>G和p.F352L为疑似致病变异,p.R498L、p.F434S和p.A515P为临床意义未明变异。结论:CPT2缺乏症临床表型多样,通过新生儿血串联质谱筛查及基因检测有助于早期诊断,确诊后及时治疗大多预后良好。

肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ缺陷症的生化学研究

目的:分析肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ(CPTⅡ)缺陷症患者细胞生化学特性,为研究CPTⅡ缺陷导致能量代谢障碍分子机制提供基本数据。方法:通过基因组序列分析,确定CPTⅡ基因突变类型;通过检测CPTⅡ残基酶活性和酶促动力学特征,分析正常和缺陷CPTⅡ残基酶两者活性与CPTⅡ基因突变类型间关系;测定两者线粒体脂肪酸β-氧化和ATP生成水平;分析两者细胞膜电位。结果:生化学特性分析结果显示CPTⅡ缺陷症患者细胞的CPTⅡ残基酶活性明显降低,且呈热不稳定性;细胞线粒体脂肪酸β-氧化和ATP生成水平显著不足;细胞膜电位显著较低。结论:CPTⅡ是一个热不稳定蛋白酶,CPTⅡ缺陷导致CPTⅡ残基酶活性明显降低,脂肪酸β-氧化和ATP生成水平显著不足。

卵形鲳鲹肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ全长cDNA序列的克隆及生物信息学分析

采用RACE-PCR克隆卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ(carnitine palmitoyltransferaseⅠ,CPTⅠ)c DNA序列全长,并对其编码氨基酸进行生物信息学分析。结果表明,卵形鲳鲹CPTⅠ基因(Gen Bank登录号KP987456)c DNA序列全长2 841 bp,其开放阅读框(ORF)为2 363 bp,编码787个氨基酸,3'非编码区(URT)335 bp,5'非编码区142 bp;生物信息预测显示CPTⅠ基因编码的蛋白无信号肽序列,脂溶指数高达85.63,亲水性平均值(GRAVY)为-0.213,具有2个跨膜区螺旋,在第312和367氨基酸残基处存在N-糖基化位点,在19个丝氨酸(Ser)、9个苏氨酸(Thr)和14个酪氨酸(Tyr)残基上可能发生磷酸化;二级结构中α螺旋(Alpha helix)占比例最大,为40.66%;该蛋白亚细胞定位预测其主要分布于细胞质和线粒体中;分子系统进化分析显示,卵形鲳鲹CPTⅠ蛋白与花鲈(Lateolabrax japonicas)的同源性最高,达94%,与大黄鱼(Larimichthys crocea)、金鲷(Sparus aurata)的次之,均为93%,与人(Homo sapiens)、鼠(Mus musculus)等的同源性较低(65%)。

肉碱棕榈酰基转移酶2过表达载体构建及在奶牛乳腺上皮细胞中验证

为进一步研究CPT2基因在脂质代谢中的作用,试验构建了绿色荧光CPT2过表达载体,将其转入奶牛乳腺上皮细胞,通过荧光定量方法,检测CPT2基因mRNA的表达水平差异,在细胞水平验证了CPT2过表达载体的表达效率。结果表明:过表达组的CPT2基因mRNA表达量与对照组(空载组)相比有所提高。说明CPT2过表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞后,CPT2基因mRNA表达水平显著升高。

β-羟丁酸对体外培养牛肝细胞肉碱脂酰基转移酶-Ⅰ转录和翻译水平的影响

目的检测不同浓度β-羟丁酸(β-hydroxy butyrate,BHBA)对体外培养牛肝细胞肉碱脂酰基转移酶Ⅰ(Carnitine palmityl transferase-Ⅰ,CPT-Ⅰ)转录及翻译水平的影响。方法分别采用荧光定量PCR法和ELISA法,检测不同浓度BHBA(0、0.3、0.6、1.2、2.4、4.8mmol/L)对体外培养牛肝细胞CPT-I基因和蛋白表达的影响。结果随着BHBA浓度的增加,肝细胞CPT-Ⅰ的转录和翻译水平均下降。当BHBA浓度大于1.2mmol/L时,肝细胞CPT-I的转录和翻译水平下降更显著。结论高浓度的BHBA可显著抑制体外培养牛肝细胞CPT-I的表达,可能减少肝细胞脂肪酸氧化代谢。

SLC25A20基因c.199-10T〉G纯合变异致肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症四例分析

摘要目的探讨肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床、生化以及基因变异特点。方法对2014-2017年在广西壮族自治区妇幼保健院遗传代谢中心实验室确诊的4例肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床表现、生化检查、基因检测结果进行回顾性分析。4例患儿均通过干血滤纸片提取基因组DNA进行基因分析，其中1例患儿进行SLC25A20基因分析，3例患儿进行全外显子组测序分析。结果4例无亲缘关系的患儿发病年龄1-28 d，死亡年龄1.5-30 d，临床表现为新生儿低血糖（4例）、心律失常（2例）、猝死（2例），生化检查：血糖1.2-2.0 mmol/L、肌酸激酶955-8 361 U/L，肌酸激酶同工酶199-360 U/L，游离肉碱3.70-27.07 μmol/L，棕榈酰肉碱1.85-14.84 μmol/L。4例患儿均携带SLC25A20基因c.199-10T〉G纯合变异，父母为杂合变异携带者。通过构建单体型发现，c.199-10T〉G变异位点均处于同一单体型。结论肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床表现急重，预后不佳。表现有低血糖、心肌酶升高，长链酰基肉碱升高。c.199-10T〉G变异是肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症的重要分子病因，单体型分析提示该变异与奠基者效应有关。

肉碱-酰基肉碱转位酶缺乏症三例并文献复习

目的探讨肉碱-酰基肉碱转位酶缺乏症(carnitine-acylcarnitine translocase deficiency,CACTD)患儿的临床特征、生化结果及基因突变特点。方法选择2017年广州市妇女儿童医疗中心新生儿科诊治的3例CACTD患儿,对其临床特征、生化结果及基因突变特点进行回顾性分析。以"新生儿"、"婴儿"、"肉碱-酰基肉碱转位酶缺乏症"、"肉碱-酰基肉碱转位酶"和"carnitine-acylcarnitine translocase deficiency"、"SLC25A20"为检索词,分别对中国知网、万方数据库、生物医学文献数据库(PubMed)、美国国家生物技术中心及Embase生物医学全文数据库自建库至2018年4月收录的文献进行检索,总结CACTD患儿的临床资料、生化代谢指标、基因突变特点、治疗方法和预后。结果 3例患儿中男2例,女1例,均为足月儿,生后无窒息。母亲孕期无异常,父母非近亲婚配。生后15~20 h均以反应差、严重低血糖起病;血氨、肝酶、肌酸激酶及其同工酶明显升高,二羧基酸尿阳性,血游离肉碱水平降低,长链酰基肉碱水平增高;2例血酮体水平明显降低;3例患儿心电图均显示房室传导阻滞、室性心动过速,给予反复电复律、利多卡因、胺碘酮治疗;2例给予精氨酸降血氨、补充左卡尼汀、低脂+中链脂肪酸配方奶喂养。2例分别于生后3 d和8 d死于心肺衰竭;1例治疗后病情明显改善家长签字出院。基因测序回报:病例2为SLC25A20基因c.199-10T>G和IVS7-9_16ins复合杂合突变,其中IVS7-9_16ins杂合突变可能是一种新发致病突变;病例3为SLC25A20基因c.199-10T>G纯合突变,父母为该突变携带者。共纳入17篇文献,包括50例CACTD患儿,其中男31例,女19例。患儿均以低血糖,尤其是低酮性低血糖、高氨血症,肝酶及肌酸激酶升高,血游离肉碱水平明显降低,长链酰基肉碱水平明显升高,二羧基酸尿,伴心律失常、心肌病为临床特征。Sanger直接测序检测等位基因100条,突变种类为40种;纯合突变23例,复合杂合突变27例;c.199-10T>G位点突变频次最高,为22次;其他突变类型均不超过6次。生后1周内起病44例(88.0%,44/50);死亡30例,存货13例,未知7例,病死率69.8%(30/43),其中生后1周内死亡14例。结论 CACTD的早期识别、早期诊断、快速治疗是关键。基因分析是目前明确诊断最可靠的方法。c.199-10T>G突变是存在于亚洲人群中最常见的致病突变类型,低酮性低血糖是早期线索;有先证者的家庭再次妊娠时需做产前诊断。

具有c.199-10T>G纯合突变的肉碱-酰基肉碱转位酶缺乏症一例报告及文献复习

目的探讨具有c.199-10T>G纯合突变的肉碱-酰基肉碱转位酶缺乏症(carnitine-acylcarnitine translocase deficiency, CACTD)的临床特征及SLC25A20基因突变特点。方法(1)病例回顾:回顾性分析2017年9月广州市妇女儿童医疗中心收治的1例具有c.199-10T>G纯合突变的CACTD患儿的临床资料、基因突变特点、诊治经过和结局。(2)文献检索:以"CACT""SLC25A20"或"肉碱-酰基肉碱转位酶"为检索词,分别在中国知网、万方数据库、美国国家生物技术中心和PubMed数据库检索建库至2018年4月的相关文献。分析所获文献,以总结分析CACTD患儿的临床资料、生化代谢指标、基因突变特点、治疗方法和预后。结果(1)病例回顾:本例患儿为男性,外院足月阴道分娩出生,因生后15 h出现呻吟、青紫,微量血糖0.8 mmol/L,于生后2 d 5 h转入本院新生儿重症监护病房。该患儿有一兄,生后50 d因类似症状死亡,病因未明确。患儿血氨、肝酶、肌酸激酶均明显升高;血氨基酸分析提示肝损伤;尿气相层析-质谱技术分析结果提示大量二羧基酸尿;血游离肉碱含量极低;长链酰基肉碱含量明显增高、血酮体水平极低;心电图显示房室传导阻滞、室性心动过速。给予反复电复律、利多卡因、胺碘酮等治疗心律失常;精氨酸降血氨;以及补充左卡尼汀、中链脂肪酸配方奶喂养等措施后,患儿病情明显改善,生后29 d家长要求出院。出院后2周,又因"小儿腹泻病"再次住院,给予对症支持治疗后,腹泻好转,于生后45 d,家长再次要求出院。出院后失访。(2)SLC25A20基因分析:分析显示该患儿为c.199-10T>G纯合突变,父母为该突变的携带者。(3)文献检索:共获得32篇相关英文文献,共报道CACTD 50例,共测序检测等位基因100条;突变共40种,具有c.199-10T>G突变的患儿13例(包括纯合突变9例和复合杂合突变4例),突变频率为22/100。13例患儿均在生后72 h内(25 min^52 h)起病,均有低血糖,尤其是低酮性低血糖、高氨血症、肝酶及肌酸激酶升高、血游离肉碱含量明显降低、长链酰基肉碱含量明显升高、二羧基酸尿、心律失常、心肌病为常见的临床表现,12例中的11例死亡(另1例未交代结局)。结论c.199-10T>G是存在于亚洲人群中的常见致病突变类型,临床表现严重,结局不良。对于婴儿猝死及新生儿早期出现的无法解释的突发的临床状况恶化均需排查"遗传代谢病"(包括CACTD)的可能。

欧前胡素对高脂型蛋氨酸-胆碱缺乏饲粮诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠血清生化指标和肝脏的影响

本试验旨在研究欧前胡素(IMP)对高脂型蛋氨酸-胆碱缺乏饲粮(MCD-HFD)引起的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。将50只9周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只。MCS-LFD组(对照组)饲喂蛋氨酸-胆碱充分低脂饲粮(MCS-LFD),MCD-HFD组(模型组)、MCD-HFD+IMP25组、MCD-HFD+IMP50组和MCD-HFD+IMP100组小鼠饲喂MCD-HFD,连续喂养8周。各组均在喂养4周后对小鼠进行灌胃处理,连续4周。MCD-HFD+IMP25组、MCD-HFD+IMP50组和MCD-HFD+IMP100组小鼠分别灌胃25、50和100 mg/(kg·d)IMP,MCS-LFD组和MCD-HFD组小鼠灌胃等量生理盐水。饲喂8周后处死,取血清检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;通过苏木精-伊红(HE)染色以及Masson染色检测肝脏组织脂肪变性和纤维化;称量肝脏湿重,计算肝脏指数;通过Western blot法检测肝脏中肉碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的蛋白表达量。结果显示:1)与MCS-LFD组相比,MCD-HFD组小鼠体重和增重显著降低(P<0.05),肝脏湿重显著增加(P<0.05),肝脏指数极显著升高(P<0.01),血清中AST、ALT活性和TG、TC含量均极显著升高(P<0.01),肝脏中CPT1A的蛋白表达量极显著降低(P<0.01)。2)切片结果显示,与MCS-LFD组相比,MCD-HFD组小鼠肝细胞排列紊乱,发生气球样变性,出现大量脂肪性空泡,且肝细胞周围纤维化。3)与MCD-HFD组相比,MCD-HFD+IMP50组小鼠的体重和增重显著升高(P<0.05),肝脏湿重显著降低(P<0.05),肝脏指数极显著降低(P<0.01),血清AST和ALT活性极显著下降(P<0.01),TG和TC含量显著下降(P<0.05),肝脏中CPT1A的蛋白表达量显著升高(P<0.05)。4)与MCD-HFD组相比,MCD-HFD+IMP100组小鼠体重无显著变化(P>0.05),肝脏湿重和肝脏指数均极显著降低(P<0.01),血清AST、ALT活性和TG、TC含量均极显著下降(P<0.01)。5)与MCD-HFD组相比,IMP处理能够减少肝脏中空泡数量,改善肝细胞气球样变性和纤维化程度,且呈剂量依赖性。由此可见,IMP能够缓解MCD-HFD诱导的NAFLD小鼠的肝脏损伤,改善体内脂肪代谢,缓解脂质沉积,对肝脏具有保护作用。

中、高海拔雄性小鼠肝脏ACC1、CPT1A的变化及其对糖脂代谢的影响

目的探讨中、高海拔雄性小鼠肝脏ACC1、CPT1A的变化及其对糖脂代谢的影响。方法将雄性小鼠随机分为中海拔组(M组)和高海拔组(H组),再根据饲养天数分别分为第3d组、第7d组、第30d组,每组10只。分别在第3 d、第7 d、第30 d脱颈处死小鼠取血清测定胰岛素,并取适量肝脏组织用PCR、WB法测定CPT1A信使核糖核酸及蛋白水平、ACC1信使核糖核酸及蛋白水平。结果1)M组空腹血糖及空腹胰岛素水平在一定时间范围内随着时间延长逐渐升高,但H组空腹血糖及空腹胰岛素水平逐渐降低,且低于同时期的M组水平(P<0.05)。2)M组CPT1A信使核糖核酸水平随时间延长而逐渐降低,但H组随着时间延长无明显变化,且低于同时期的M组水平(P<0.05),第30d M组与第30d H组无差异;ACC1信使核糖核酸在M组随着时间延长逐渐升高、在H组随着时间延长逐渐降低,第3d M组明显低于H组。CPT1A蛋白水平在M组随着时间延长逐渐降低,在H组随着时间延长逐渐降低,且低于同时期的M组(P<0.05);ACC1蛋白水平在M组随着时间延长逐渐升高、在H组随时间延长逐渐降低(P<0.05)。3)CPT1A信使核糖核酸及蛋白水平与空腹胰岛素水平、胰岛素抵抗水平、胰岛素分泌指数水平正相关(P<0.05);ACC1信使核糖核酸水平与空腹胰岛素水平、胰岛素抵抗水平、胰岛素分泌指数水平负相关(P<0.05),ACC1蛋白水平与空腹血糖水平正相关、与胰岛素分泌指数水平负相关(P<0.05)。结论1)中海拔可降低雄性小鼠肝脏ACC1信使核糖核酸及蛋白水平,可升高CPT1A信使核糖核酸及蛋白水平;高海拔可增加雄性小鼠肝脏ACC1信使核糖核酸及蛋白水平、降低CPT1A信使核糖核酸及蛋白水平。2)雄性小鼠在高海拔急性低氧环境下的糖代谢和肝脏脂肪酸合成代谢增加;随低氧时间延长,糖代谢逐渐转换为脂肪酸合成代谢,表现为血糖降低、肝脏脂肪酸降低,分解代谢增强。

耐力训练对高脂膳食大鼠骨骼肌线粒体脂肪氧化及PGC-1α基因表达的影响

目的:研究耐力训练对高脂膳食大鼠骨骼肌线粒体脂肪氧化相关酶活性及基因表达的影响。方法:40只SD大鼠,随机分成普通膳食对照组(C)与耐力训练组(E);高脂膳食对照组(H)与耐力训练组(R),每组10只。两耐力训练组大鼠进行8周跑台训练。结果:耐力训练使高脂膳食大鼠体重(P=0.000)I、R指数(P=0.021)显著降低并维持在正常水平,使骨骼肌线粒体β-HAD(P=0.011)、CS活性(P=0.047)、CPT-1βmRNA(P=0.037)及PGC-1α蛋白表达水平(P=0.007)显著增高。结论:耐力训练通过适度调节参与线粒体脂肪氧化关键酶β-HAD、CS活性及CPT-1β、PGC-1α基因表达,优化高脂膳食机体在线粒体水平的脂肪氧化能力。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

孕早期高蛋白膳食对子代大鼠CPT1的影响

目的探讨孕早期高蛋白质膳食(HPD)对子代肥胖和肉碱酰基转移酶1(CPT1)表达的影响,寻找肥胖防治的靶标和合理的孕期膳食。方法孕早期大鼠分别给予HPD和标准膳食(SD),其后代分别为高蛋白质组(HP)和对照组(CON),SD喂养至成年,高脂膳食诱导肥胖,FQ-PCR法检测CPT1mRNA的水平。结果与对照组相比,HPD大鼠子代的体重持续降低(P<0.05),CPT1 mRNA水平持续升高。结论孕早期HPD可通过程序性升高子代CPT1 mRNA的水平,降低肥胖的发生。

不同海拔大鼠习服过程中肝脏脂肪酸代谢相关指标变化

目的观察中、高不同海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织中参与脂肪酸代谢酶表达水平及相关指标变化。方法SPF级雄性大鼠110只,分为对照组(10只)、中海拔组(50只)、高海拔组(50只);对照组、中海拔、高海拔组高度分别为400 m、2260 m、4300 m,对照组饲养30 d,中、高海拔饲养1、3、7、15、30 d。到达规定的暴露时间后,将动物称重麻醉,取血,离心后取血浆保存;取适量肝组织保存备用。结果与对照组比较,中海拔和高海拔暴露期间,各组大鼠血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(FFA)含量无显著差异。与对照组比较,中海拔各组肝脏酮体均无显著差异(P>0.05);高海拔暴露第3天酮体含量显著高于对照组、高海拔1 d组及中海拔3 d组(P<0.05)。与对照组比较,低氧诱导因子(HIF)-1αmRNA在中、高海拔暴露的第1、3、7、15天显著升高;AMP激活的蛋白激酶(AMPK)mRNA在中海拔暴露的1、3、7、30 d及高海拔暴露的1、3、7、15、30 d显著降低,高海拔暴露第15天显著低于中海拔暴露第15天(P<0.05);乙酰辅酶A羧化酶(ACC)1 mRNA在中、高海拔暴露的1、3 d显著升高,且高海拔暴露第1、3天显著高于中海拔暴露第1、3天(P<0.05);棕榈酰基转移酶(CPT)-1 mRNA在中海拔暴露3 d显著升高,15 d显著降低,在高海拔暴露3 d显著升高,第7天开始降低,第15天显著降低,高海拔暴露第3天显著高于中海拔3 d,高海拔暴露第7、15天显著低于中海拔7、15 d(P<0.05)。与对照组比较,HIF-1α蛋白在中海拔第3天显著升高,高海拔暴露的第1、3天显著升高,且显著高于中海拔组第1、3天(P<0.05);AMPK蛋白在中海拔暴露的3、7、15、30 d及高海拔暴露的1、3、7、15、30 d显著降低,高海拔暴露各组显著低于中海拔各组(P<0.05);ACC1蛋白在中海拔暴露的3 d显著升高,在高海拔暴露的第1、3天显著升高,且显著高于中海拔暴露的第1、3天(P<0.05);CPT-1蛋白在中海拔暴露的3 d显著升高;在高海拔暴露的第3天显著升高,第7、15天显著降低;高海拔暴露第7、15天显著低于中海拔第7、15天(P<0.05)。结论中高海拔与平原地区大鼠肝脏脂肪酸代谢存在差异;中海拔地区急性暴露期的脂肪酸合成与氧化代谢增强,慢性期随着缺氧迅速改善,与平原地区水平无差异。在高海拔地区脂肪酸合成代谢随着暴露时间的延长呈现一过性增强,随后降低至对照组水平,而脂肪酸氧化代谢可能呈现先增强后减弱的趋势,随后降至对照组水平。在同一暴露时间下,在急性期,高海拔脂肪酸合成代谢较中海拔显著增强;而在慢性期无显著差异。

罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达

目的观察高脂饮食对老年大鼠骨骼肌肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ(CPTⅠ)和过氧化体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响及罗格列酮的干预效果。方法大鼠随机分为对照组、高脂组(HF)、罗格列酮干预组(RSG),每组20只。应用清醒状态下正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率评价胰岛素抵抗,用RT-PCR法和Western blot印迹技术检测骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达。结果高脂组骨骼肌三酰甘油(TG)升高而葡萄糖输注率明显下降(P<0.01),骨骼肌CPTⅠ和PPARγ表达明显降低(CPTⅠbmRNA 3.16±0.59vs1.30±0.18,P<0.05;PPARγmRNA1.48±0.25vs1.04±0.33,P<0.01),罗格列酮干预组显著缓解高脂组上述变化(CPTⅠbmRNA1.30±0.18vs2.84±0.72;PPARγmRNA1.04±0.33vs2.13±0.42)(P<0.01)。结论罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达,可能是减少骨骼肌内脂质堆积、改善胰岛素抵抗的机制之一。

中海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织脂肪酸代谢相关指标变化

目的观察中海拔地区不同暴露时间下大鼠肝脏组织脂肪酸代谢相关指标的变化。方法SPF级SD雄性大鼠60只,根据饲养环境不同分为对照组、1 d组、3 d组、7 d组、15 d组、30 d组各10只,对照组在西安交通大学医学部动物实验中心动物房(海拔400 m)饲养30 d;1 d组、3 d组、7 d组、15 d组、30 d组分别在青海大学医学院高原医学中心动物房(海拔2260 m)饲养1、3、7、15、30 d。检测各组血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏组织中的酮体(KB);检测肝脏组织中的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC-1)、肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT-1)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白。结果各组血浆ALT、NEFA及肝脏组织中KB水平差异均无统计学意义。对照组肝脏组织中AMPK mRNA表达量高于1 d组、3 d组、7 d组、15 d组和30 d组(P均<0.05)。15 d组ACC-1、CPT-1 mRNA表达量最低,30 d组ACC-1、CPT-1 mRNA表达量升高至对照组水平;1 d组、3 d组、7 d组、15 d组HIF-1αmRNA表达量高于对照组,30 d组降低至对照组水平。对照组与1 d组AMPK蛋白表达高于3 d组、7 d组、15 d组、30 d组(P均<0.05);3 d组ACC-1、CPT-1、HIF-1α蛋白表达量高于对照组、1 d组、7 d组、15 d组、30 d组(P均<0.05)。结论中海拔地区与平原地区暴露的大鼠脂肪酸代谢存在差异。中海拔地区急性暴露期大鼠脂肪酸合成与氧化代谢呈现一过性增强,至暴露第7天,随着缺氧迅速改善,又恢复到平原地区水平。

GLP-1RAs通过调控LINC01180/miR-30b/CPT1A通路改善脂毒性氧化应激

目的探讨胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonists,GLP-1RAs)改善胰岛细胞脂毒性氧化应激,分析其机制是否与调控LINC01180/miR-30b/CPT1A通路表达有关。方法通过基因芯片和生物信息学分析方法预测LINC01180可能调控microRNA及相关蛋白。在体内和体外建模,分为对照组、高脂组、GLP-1RAs组。检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)活性。苏木精-伊红染色及免疫组化Reg3r分析。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测LINC01180、miR-30b和CPT1A表达量。Western blot法检测CPT1A的蛋白表达水平。通过瞬时转染技术分别抑制和过表达LINC01180,RT-qPCR检测转染后miR-30b和CPT1A表达水平。结果生物信息学分析结果表明,LINC01180/miR-30b/CPT1A形成ceRNA调控网络。GLP-1RAs模型中脂毒性氧化应激明显改善,LINC01180表达量下降,miR-30b和CPT1A表达量上升。转染LINC01180表达显著影响miR-30b和CPT1A的表达量。结论GLP-1RAs通过下调LINC01180的表达,上调miR-30b和CPT1A表达,改善脂毒性氧化应激。

基于多数据库分析CPT2在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ基因(CPT2)在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中的表达情况,探讨其表达差异与临床病理特征及预后生存的关系。方法:计算机检索Oncomine数据库、GEPIA平台、Human Protein Atlas和TCGA数据库中关于CPT2在肾ccRCC中表达的相关文献,检索时限为建库至2023年9月20日。分析CPT2在ccRCC中的表达,并研究表达量与患者临床病理参数及预后的关系。结果:CPT2在肝脏正常组织中的表达量最高,在肾脏中居第3位,在肾癌中的表达量位于各种肿瘤组织的第3位。Oncomine数据库中,CPT2表达差异结果有意义的研究共有232项。CPT2在ccRCC中的表达量低,其表达量与ccRCC患者的性别、肿瘤分期、肿瘤分化程度、T分期、远处转移相关(P<0.05)。CPT2表达量与肾透明细胞癌患者总生存率有关(Logrank P=1.9×10^(-13))。结论:CPT2在不同癌症中的表达情况不一,在ccRCC中呈低表达,其低表达与ccRCC部分恶性表型相关,且与患者总体生存率低有关。

基于LPL/CPT1/FABP4通路探讨健脾化痰方对非酒精性脂肪性肝病“炎癌转化”的抑制作用

目的 基于脂蛋白脂肪酶(LPL)/肉碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)/脂肪酸结合蛋白质4(FABP4)通路探讨健脾化痰方对非酒精性脂肪性肝病小鼠“炎癌转化”的抑制作用。方法 30只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、健脾化痰方低剂量组(19.2 g/kg)、健脾化痰方高剂量组(38.4 g/kg)和依折麦布组(10.0 mg/kg),每组6只。除对照组外,其他各组小鼠腹腔注射二乙基亚硝胺(25 mg/kg)。4周后,除对照组正常饲养外,其他各组小鼠予高脂、高胆固醇饲料喂养26周,建立非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌(NASH-HCC)模型。灌胃给药每日1次,持续26周。比较各组小鼠肝脏肿瘤数量、最大肿瘤表面积。HE染色、油红O染色观察肝脏组织炎症、脂肪变性和气球样变。酶联免疫吸附测定法检测肝脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量。实时荧光PCR法检测肝脏杆状病毒凋亡抑制蛋白5(Birc5)、淋巴细胞抗原6复合位点D(Ly6d)、CD44抗原(CD44)、增殖标志物Ki-67(Mki67)等肿瘤相关标志物的mRNA表达。蛋白质印迹法检测各组小鼠肝脏LPL、CPT1、FABP4的蛋白表达。结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏出现肿瘤,Ly6d、Birc5、CD44、Mki67 mRNA水平升高,肝脏损伤明显,脂肪变性及气球样变严重,肝脏有大量脂滴蓄积,血清ALT、AST及肝脏TNF-α均升高,血清TC、TG、LDL、HDL水平升高,肝脏LPL、CPT1B、FABP4蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组小鼠相比,健脾化痰方低剂量组和依折麦布组Birc5 mRNA表达降低(均P<0.05);健脾化痰方低、高剂量组和依折麦布组肝脏损伤不同程度地缓解,表现为脂肪变性和气球样变性的减少、脂滴蓄积的减少及肝脏炎症因子TNF-α的降低(均P<0.05)。与模型组比较,健脾化痰方低剂量组、依折麦布组血清TC、TG、LDL、HDL降低(均P<0.05);与健脾化痰方低剂量组比较,依折麦布组血清TC、LDL、HDL降低(均P<0.05)。与模型组比较,健脾化痰方低剂量组CPT1B、FABP4的蛋白表达降低,健脾化痰方高剂量组LPL、FABP4的蛋白表达降低(均P<0.05)。结论 健脾化痰方可能通过调控LPL/CPT1/FABP4脂质代谢信号通路,促进TC和TG的分解,改善模型小鼠肝组织脂肪变性及其炎症损伤程度,抑制模型小鼠肿瘤发生发展,从而发挥抗NASH-HCC的作用。