PCR法快速检测熟肉制品中肉类来源

应用分子生物学技术进行熟肉制品种类来源的快速检测是目前市场监控方面的空白。通过查阅国内外的相关文献,同时进行基因序列的比对,确定针对市场上常见肉类猪、牛、羊、鸡的特异性线粒体序列的引物。经过多次重复试验证明,所选定的引物只有在同一种属模板DNA存在的情况下才会发生PCR扩增,特异性强,灵敏度高。建立的方法仅需20 mg的样品,而样品中含有1 mg的待检肉类就可以被检出。

PCR法检测肉制品中肉类来源的灵敏度研究

建立了判别肉制品中肉类来源的PCR法,可以鉴别熟肉制品含有猪肉、牛肉还是鸡肉。另外,对于PCR法检测肉类来源的灵敏度进行了研究,结果表明,建立的方法仅需20mg的样品,最低检测限可以达到2×10-6g。

鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性

提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明:鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2条颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在1∶1.0×10^5以上,为IgG1亚型,亲和常数(Ka)为5.9×10^5 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。

羊骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及其特性

制备抗羊骨骼肌肌钙蛋白T(skeletal muscle troponin T,sTnT)的单克隆抗体,评价单抗的特性。通过煮沸提取、切胶纯化制备sTnT,融合后获得分泌抗羊sTnT的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法检测单抗效价、亚型、特异性等。结果表明:筛选后获得3株单克隆抗体(2E11、3D3、4C2),其中4C2特异性好,效价达到15.12×10^5以上,为IgG1亚型,亲和常数(K_a)为1.1×10^9 L/mol;免疫印迹结果显示,该单抗能与牛、羊的骨骼肌提取物反应,与鸡、鸭的骨骼肌提取物无明显反应,表明4C2可以用于区分反刍动物和禽类的骨骼肌组织。