不同冻存时间对猪肌内脂肪含量及其与生产性状相关性的影响

[目的]本文旨在探究不同冷冻时间对猪肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量的影响并分析IMF含量和其他生产性状的相关性。[方法]从299头杜洛克×(长白×大白)三元商品猪群中随机挑选52头作为试验对象,测定屠宰前活体重、屠宰后胴体重以及相关肉质性状;采集倒数第3~4肋骨间的背最长肌,采用索氏抽提法分别测定0 d鲜肉样、-80℃超低温冻存90和180 d肉样的IMF含量。对3个不同时间点测定的IMF含量进行相关性与差异显著性分析,并对3个不同时间点的IMF含量与测定的生产性状的相关性进行比较分析。[结果]0 d与冻存90 d的IMF含量呈极极显著相关(r=0.75),2个时间点测定的平均IMF含量不存在显著差异(P>0.05),但与0 d相比,冻存90 d的平均IMF含量呈上升趋势;0 d与冻存180 d的IMF含量呈显著相关(r=0.29),但与0 d相比,冻存180 d测定的平均IMF含量极显著升高(P<0.01)。性状相关分析结果显示,0 d和90 d的IMF含量与屠宰前活体重和胴体重呈极极显著相关(P<0.001),而180 d的IMF含量仅与胴体重呈极极显著相关(P<0.001),而且不同冻存时间对IMF含量与肉质性状的相关性产生不同程度的影响。[结论]肉样在-80℃冻存会增加IMF含量,但冻存90 d对IMF含量不会产生显著影响,而冻存180 d会极显著影响IMF含量。另外,低温冷冻对测定的IMF含量与生产性状的相关性产生不同程度的影响。本研究结果可为屠宰后肌肉块IMF含量测定的标准化以及行业标准的制定提供有价值的参考。

莱芜猪肌内脂肪和皮下脂肪转录组分析

为探究莱芜猪中不同部位脂肪沉积产生差异的关键基因,以180日龄体重相近的莱芜猪为实验对象,鉴定肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)和皮下脂肪(subcutaneous fat,SCF)的mRNA表达谱,对差异表达mRNA进行基因本体论(Gene Ontology,GO)与京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能富集分析,构建平均表达量前300 mRNA的蛋白质互作网络,筛选关键调控mRNA,并分析关键mRNA对应基因的序列和蛋白质结构,探究基因表达水平、结构和功能的联系,最后随机挑选6个mRNA进行实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)验证。筛选结果显示,在IMF和SCF中共鉴定出1665个差异表达的mRNA,其中888个上调,777个下调。GO结果显示,差异表达mRNA显著富集于信号通路调节的生物过程条目、生物膜组成的细胞组成条目和细胞代谢过程中酶活性调节的分子功能条目。KEGG富集结果显示,差异表达mRNA主要参与脂肪细胞生成、脂代谢、炎症反应和癌症相关的信号通路。蛋白质互作网络和基因结构特征的分析结果显示,CXCR4(C-X-C motif chemokine receptor 4)、PECAM1(platelet and endothelial cell adhesion molecule 1)、PLAU(urokinase-type plasminogen activator)、AGT(angiotensinogen)、AKT2(AKT serine/threonine kinase 2)、HSP70.2(heat shock cognate 70-kD protein,tandem duplicate 2)、LGALS3(galectin 3)、POSTN(periostin)在调控网络中处于中心位置。此外,qRT-PCR验证结果和测序结果的趋势一致,证明测序结果真实可靠。文中IMF和SCF转录组的差异分析结果提示,AGT、CXCR4、HSP70.2和PLAU基因在莱芜猪IMF沉积和脂代谢过程中发挥关键作用,可作为调控IMF的候选基因。

鸡EX-FABP基因遗传变异及与肌内脂肪含量的相关分析

利用PCR-SSCP结合DNA测序方法,对贵妃鸡、怀乡鸡及二者的杂交F1代共计360个个体EX-FABP基因遗传特征及品种差异进行研究,发现2773T>C,2867 C>T和2913 G>A三个位点在贵妃鸡中表现为单态,在怀乡鸡和杂交F1群体中表现为多态,这3个位点有望作为贵妃鸡、怀乡鸡乃致其他品种鸡种质资源鉴定的参考依据。对比分析3个群体胸肌肌内脂肪含量(IMF)表明,怀乡鸡和杂交鸡母鸡的IMF显著高于贵妃鸡;而3个群体公鸡间的IMF差异不显著;除贵妃鸡外,同一品种内公鸡的IMF均小于母鸡(P<0.05)。多态位点与鸡胸肌肌内脂肪含量的相关性分析结果表明,在2773位点,TC基因型个体的IMF值大于TT基因型;在2913位点,AA基因型个体的IMF值大于GG基因型,但没有达到显著水平(P>0.05)。

黑素皮质素受体4基因多态性及与肌内脂肪含量相关性研究

利用PCR-RFLP技术检测75头乌金猪和41头长白猪黑素皮质素受体4(MC4R)基因的第7跨膜结构功能域D298N主效位点的遗传变异,并用最小二乘法模型分析MC4R基因对猪肌内脂肪含量的遗传效应。结果:乌金猪和长白猪MC4R基因第7跨膜结构功能域TaqⅠ-RFLP位点均存在多态性,基因型为AA、Aa和aa。长白猪AA基因型肌内脂肪含量高于Aa和aa基因型,但差异不显著(P>0.05);AA基因型对PCR-RFLP的最小二乘值最大,证明该基因在该位点对肌内脂肪(IMF)含量的效应值最大。乌金猪肌内脂肪含量aa基因型显著高于AA和Aa基因型(P<0.05),aa基因型对PCR-RFLP的最小二乘值最大,证明该基因在该位点对IMF含量的效应值最大。提示,乌金猪和长白猪的MC4R基因对肌内脂肪的调控是由不同的基因型所控制的。乌金猪可通过提高MC4R基因aa基因型的频率来增加肌内脂肪含量,达到改善乌金猪猪肉品质的目的。

山羊CMKLR1基因的克隆、表达及其与肌内脂肪的相关性研究

试验旨在克隆山羊CMKLR1基因序列并进行生物信息学分析,研究其表达与肌内脂肪(IMF)沉积的相关性。采集山羊皮下脂肪组织,应用RT-PCR克隆山羊CMKLR1基因序列;以GAPDH(GenBank登录号:AJ431207.1)为内参基因,实时荧光定量PCR检测其在山羊不同组织中的表达量及在肌肉组织中的时序表达谱(以肝脏表达量为基准);测定肌肉组织中的IMF含量,分析其与CMKLR1mRNA表达量的相关性。结果显示,克隆获得了山羊CMKLR1基因,1 089bp的CDS区,GenBank登录号:KT165374。实时荧光定量PCR分析显示,CMKLR1基因在24月龄山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪、背最长肌、股二头肌和臂三头肌中均存在不同程度的表达,其中在肺脏中表达量显著高于其他组织(P<0.05);CMKLR1基因在1~3和24月龄的山羊背最长肌、臂三头肌和股二头肌中表达趋势相同,均是在股二头肌中表达量最高,而8~10月龄则是在臂三头肌中表达量最高。山羊IMF含量以24月龄背最长肌含量最高。山羊背最长肌、股二头肌和臂三头肌中CMKLR1mRNA表达与IMF含量相关性不显著(P>0.05)。CMKLR1基因不参与山羊IMF沉积作用,试验结果为进一步研究CMKLR1基因奠定理论基础。

羊肌内脂肪含量分子标记及其在肉羊品种培育中的应用

为了加速提高我国肉羊品种优质化进程,解决肉羊品种质量低下、产肉率低、肉质品质欠佳等制约我国肉羊品种发展的问题,试验通过对羊肌内脂肪含量分子标记研究,在CAPN基因上寻找与羊肌内脂肪含量相关的多态性位点,开展CAPN1和CAPN2上的两个多态性位点C724A和A601G与羊肉肌内脂肪相关性研究。结果表明:CAPN1和CAPN2上的两个多态性位点C724A和A601G与羊肉肌内脂肪明显相关。说明这两个分子标记可以作为培育优质肉用或肉毛兼用德国美利奴羊品种时的分子标记参考。

microRNA调控猪肌内脂肪沉积的研究进展

肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量是评判猪肉品质的关键指标,其可影响猪肉的嫩度、剪切力、多汁性和风味等。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度约为22 nt的短链非编码RNA,在胚胎发育、成脂分化、肌纤维形成、神经调节、免疫应答等多种生理过程中发挥重要作用。越来越多的研究表明,miRNA在猪肌内脂肪沉积过程中发挥重要调控作用,是脂质代谢的重要调控因子。作者通过归纳国内外关于miRNA调控猪肌内脂肪沉积的相关研究发现,miR-34a、miR-125a-5p、miR-32-5p等通过靶向作用转录因子Krüppel样因子(Krüppel-like factors,KLF)家族成员调控猪肌内脂肪沉积,miR-130a通过靶向作用过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)家族成员调控猪肌内脂肪沉积,miR-34a、miR-17-5p和miR-125a-5p等通过靶向作用其他家族成员,如长链酯酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、核受体共激活因子3(nuclear receptor coactivator 3,NCOA3)等来调控猪肌内脂肪沉积。然而miRNA调控猪肌内脂肪的具体作用机制尚不完全清楚,还需要进一步探究。作者通过梳理目前已经证实的与猪肌内脂肪沉积相关的miRNA,整理相关miRNA的靶基因以及主要作用通路,以期为筛选肌内脂肪相关miRNA提供参考,为改善肉质提供新的思路和策略,为阐明miRNA在猪脂质代谢中的作用机制提供参考。

黄羽肉鸡IMF选择与遗传参数估计

利用家系选择的方法，对黄羽肉鸡90日龄胸肌肌内脂肪含量（IMF）进行了4个世代的选择；采用动物模型（样本数N=632～1084）和MTDFREML软件对部分肉质性状进行了遗传力（h^2）和遗传相关（r）估计。试验结果表明：经过4个世代的选择，G4代比G0代IMF含量提高了17．8％（P〈0．01），变异系数由29．59％降低到21．72％。胸肌IMF含量的估计遗传力h^2=0．220，4个世代的平均实现遗传力h^2=0．322，初步说明IMF含量为中等遗传力性状，可以通过选择提高。腹脂重、腹脂率、脂带宽、皮脂厚、冠高、冠厚、90日龄体重等性状的遗传力在0．08～0．54范围内，胸肌IMF、腿肌IMF与腹脂重等性状间呈遗传正相关。

A-FABP基因多态性与猪肌内脂肪含量的相关性分析

为了研究猪肌内脂肪(IMF)含量与相关基因多态性的关系,试验采用PCR-SSCP技术检测了75头大河乌猪和41头长白猪脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因的第1内含子区的遗传变异,并用最小二乘法模型分析了A-FABP基因对猪肌内脂肪含量的遗传效应。结果表明:在大河乌猪和长白猪A-FABP基因第1内含子中均存在多态性,共发现5个等位基因(A、B、C、D、E),6种基因型(AB基因型、BB基因型、BC基因型、BD基因型、CC基因型、CE基因型)。大河乌猪肌内脂肪含量BD基因型显著高于其他5种基因型(P<0.05),BC基因型显著低于其他5种基因型(P<0.05),BD基因型与其他5种基因型之间最小二乘均值差异显著(P<0.05),BD基因型对PCR-SSCP的最小二乘均值最大,证明BD基因型在该位点对肌内脂肪含量的效应值最大。长白猪肌内脂肪含量CC基因型高于其他5种基因型,BC基因型显著低于其他5种基因型(P<0.05),最小二乘均值6种基因型之间差异均不显著(P>0.05),CC基因型对PCR-SSCP的最小二乘均值最大,证明CC基因型在该位点对肌内脂肪含量的效应值最大。因此,可以通过提高BD基因型的频率来增加大河乌猪肌内脂肪含量,达到改善大河乌猪猪肉品质的目的。

山羊CD36基因表达差异及其与肌内脂肪沉积的关系研究

为了构建山羊CD36基因的组织表达谱及揭示基因表达与肌内脂肪(IMF)沉积的关系,试验采用荧光定量PCR(q PCR)技术检测CD36基因在山羊不同器官组织和三个发育阶段的不同肌肉组织表达情况,并将基因mRNA表达量与IMF含量进行相关分析。结果表明:CD36基因在山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌等器官组织中均有表达,其中在脂肪组织中表达量最高,在脾脏中次之,而在心脏中表达量最低。CD36基因在1~3月龄、8~10月龄时表达变化趋势相同,在背最长肌、股二头肌和臂三头肌中呈逐渐上升趋势,而24月龄时则呈相反变化趋势。相关性分析表明,肌肉组织中CD36基因mRNA表达量与IMF含量呈正相关,且在臂三头肌中相关性达到显著水平(P<0.05)。说明CD36基因可以作为山羊IMF沉积的候选基因。

家兔PPARγ基因的克隆表达及肌内脂肪含量的相关性分析

为了克隆家兔过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARγ)基因蛋白质编码区(CDS)序列,并研究其生物学功能、组织表达规律及与肌内脂肪(IMF)含量的关系,试验克隆了家兔PPARγ基因CDS序列,并对其进行生物信息学分析;采集70日龄新西兰白兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、子宫、胃、腿肌、腹肌、背最长肌,0,35日龄新西兰白兔背最长肌,70日龄豫丰黄兔腿肌、腹肌、背最长肌,通过qRT-PCR扩增检测了PPARγ基因在不同组织/器官中的相对表达量;测定了70日龄新西兰白兔和豫丰黄兔腿肌及背最长肌的IMF含量,并对PPARγ基因相对表达量与IMF含量进行相关性分析。结果表明:家兔PPARγ基因CDS序列长1428 bp,共编码475个氨基酸,其核苷酸序列与GenBank上公布的人、鼠、猪、绵羊、牛、马、犬及鸡等物种的氨基酸序列相似性分别为91.0%、90.5%、90.5%、90.2%、90.1%、90.0%、89.9%和80.5%,与小鼠的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。PPARγ基因在70日龄新西兰白兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腿肌、子宫和胃中均有表达,在腿肌和胃中的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),在腿肌中的相对表达量显著高于胃(P<0.05);在0,35,70日龄新西兰白兔背最长肌组织中的相对表达量差异不显著(P>0.05)。PPARγ基因在70日龄新西兰白兔和豫丰黄兔腹肌中的相对表达量极显著高于腿肌和背最长肌(P<0.01),豫丰黄兔腹肌、腿肌中的相对表达量显著高于新西兰白兔(P<0.05),在背最长肌中差异不显著(P>0.05)。PPARγ基因在腿肌和背最长肌中的相对表达量与IMF含量均呈正相关。说明PPARγ基因可能调控家兔IMF沉积过程,豫丰黄兔的肉品质可能优于新西兰白兔。

绵羊FAM134B基因组织表达规律及其与肌内脂肪含量的关系

为了解FAM134B基因的表达规律以及对绵羊肉质的影响,试验以敖汉细毛羊组织样本为材料,运用实时荧光定量PCR技术对不同组织FAM134B mRNA的表达情况进行研究,并对肌肉组织中FAM134B mRNA表达量与肌内脂肪含量进行关联分析。结果表明:FAM134B基因在所选的绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌、皮下脂肪、腹部脂肪器官组织中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,而在肺脏中的表达量最低。关联分析显示,在绵羊背最长肌、股二头肌中FAM134B基因的mRNA表达水平与肌内脂肪含量呈极显著正相关(P<0.01)。初步推测,FAM134B基因可能对绵羊肌内脂肪沉积具有重要的调控作用。

荧光定量RT-PCR检测滩羊H-FABP基因表达规律及与肌内脂肪相关性研究

为了研究心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因在滩羊不同时期不同部位表达量,分析其与肌内脂肪(IMF)含量的关系,试验建立了检测滩羊H-FABP mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR方法,并采用该方法对2,4,6,9,12月龄滩羊(各20只,雌雄各半)的背最长肌、腰大肌和股二头肌的肌肉组织H-FABP mRNA表达水平进行了检测,还测定了三个部位肌肉组织IMF的含量。结果表明:性别与活重、胴体重、IMF、H-FABP mRNA背部肌肉表达量和股部肌肉表达量差异均不显著(P≥0.05)。不同月龄、不同部位H-FABP基因的表达水平总体上呈上升-下降-上升的趋势,且2月龄表达量最高(P<0.01)。三个部位IMF沉积规律基本相同,在生长前期随着月龄的增长其IMF含量呈上升趋势,6月龄左右上升明显,表达量为腰大肌﹥股二头肌﹥背最长肌。月龄与活重、胴体重和股部表达量差异极显著(P≤0.01),但与IMF、背部和腰部表达量差异不显著(P≥0.05)。2月龄滩羊背最长肌中H-FABP基因表达量与IMF含量相关系数为0.104(P=0.327),呈正相关;股二头肌H-FABP基因表达量与IMF相关系数为0.773(P<0.01),呈强度正相关;腰大肌2~12月龄期间HFABP基因表达量与IMF含量呈正相关,相关系数为0.125。说明H-FABP基因在不同组织中表达量不同,股二头肌中的表达量最高,腰大肌次之,再次为背最长肌,且腰大肌的表达量仅次于股二头肌。

藏猪和杜洛克猪SCD、CPT1B基因表达差异及其与IMF含量相关性分析

为了揭示脂肪型的藏猪和瘦肉型的杜洛克猪肌内脂肪(IMF)沉积相关基因的表达差异,试验采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测了两猪种背最长肌中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因、肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT1B)基因在180日龄的表达差异,分析其表达与IMF含量的相关性。结果表明:180日龄藏猪SCD mRNA表达量极显著高于杜洛克猪(P<0.01),而藏猪CPT1B mRNA表达量显著高于杜洛克猪(P<0.05)。相关性分析结果显示,SCD、CPT1B mRNA表达量均与IMF含量呈正相关。

成都麻羊FTO基因组织表达及其与IMF含量的相关性研究

为了研究脂肪肥胖相关基因(FTO)在成都麻羊不同组织中的表达水平以及肌肉组织中FTO相对表达量与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量的相关性,试验采用实时荧光定量PCR方法检测FTO在成都麻羊各组织中的表达水平,采用索氏化学抽提法测定肌肉组织中IMF含量。结果表明:FTO在各组织中广泛表达,在脾脏中表达量最高,显著高于脂肪组织(P<0.05),极显著高于背最长肌、股二头肌、臂三头肌、心脏(P<0.01)。成都麻羊背最长肌IMF含量显著高于股二头肌、臂三头肌(P<0.05);背最长肌、股二头肌中FTO相对表达量与IMF含量呈不显著正相关(P>0.05),臂三头肌中FTO相对表达量与IMF含量呈显著负相关(P<0.05)。说明FTO可能对山羊肌内脂肪沉积有重要调控作用。

SCD和PPAR_γ基因在延边黄牛血液中的表达及其与IMF及TG含量的关系

为了研究脂肪代谢相关基因表达在不同肉质性状延边黄牛血液中的差异,试验选择20头延边黄牛按照高档牛肉生产模式统一饲养管理,根据它们的大理石花纹等级高低分为H组和L组。应用RT-PCR方法测定延边黄牛血液中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)和过氧化氢酶体激活增殖受体γ(PPARγ)基因的表达丰度,另外分析了背最长肌肌内脂肪(IMF)和三酰甘油(TG)含量。结果表明:H组IMF和TG含量极显著和显著高于L组(P<0.01和P<0.05),H组个体血液中SCD和PPARγ表达丰度呈现出高于L组的趋势。IMF和TG含量随着大理石花纹等级的增加呈现上升趋势,SCD和PPARγ基因均可在血液中表达,并且延边黄牛血液中SCD和PPARγ基因表达水平随背最长肌IMF和TG含量的升高呈现增加的趋势。