人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。

抗心肌肌凝蛋白抗体亲梗死心肌显像的研究进展

本文介绍了抗心肌肌凝蛋白单克隆抗体及抗肌凝蛋白重链单克隆抗体亲梗死心肌显像的研究进展、存在的缺点和对其所做的技术改进以及通过基因工程制备之单链抗体的优点。对利用噬菌体抗体库技术所生产的单链抗体及其抗肌凝蛋白显像在心脏病学中的应用前景进行了展望。

慢性阻塞性肺病患者膈肌肌凝蛋白重链表型的变化

目的 :研究以呼吸负荷和肺容量慢性增加为特点的慢性阻塞性肺病 (COPD)患者膈肌中肌凝蛋白表型的变化。 方法 :2 4例患者经开胸手术取膈肌标本。通过非变性电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合 Western印迹分析检测膈肌肌凝蛋白重链 (m yosin heavy chain,MHC)各种异构体组分改变。分析患者第 1秒用力肺活量 (FEV1 )、肺总量 (TL C)和功能残气量(FRC)等检测结果与慢 MHC(β- MHC)占总 MHC比例的相关性。 结果 :慢性过度负荷与 β- MHC比例增加 ,快 MHC比例减少有关 ;COPD患者 β- MHC比例为 (75 .36± 9.0 0 ) % ,明显高于对照组的 (5 0 .0 0± 4 .81 ) % (P<0 .0 1 ) ;β- MHC比例与 FEV1呈线性负相关 (r=- 0 .89,P<0 .0 1 ) ,与 TL C呈线性正相关 (r=0 .6 0 ,P<0 .0 1 ) ,与 FRC呈线性正相关 (r=0 .74 ,P<0 .0 1 )。结论 :COPD患者快肌凝蛋白比例减少而慢肌凝蛋白比例增加 ,这种改变与肺过度充气有关 。

抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类与慢性心力衰竭的关系

目的研究抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类的产生与心力衰竭之间的关系。方法应用腹主动脉缩窄术与左冠状动脉结扎术建立两种慢性心力衰竭大鼠模型,测定血流动力学变化;以合成的大鼠心肌肌凝蛋白重链部分肽段(第1 135～1 150位氨基酸残基)为包被抗原,采用间接ELISA方法检测大鼠血清中心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类的水平及动态变化。结果(1)自身抗体IgG1、IgG2a和IgG2b亚类均呈阳性之大鼠(PPP组)收缩和舒张功能(LVSP,LDP,+dp/dt+max,-dp/dt max)显著低于自身抗体IgG1、IgG2a和IgG2b亚类均呈阴性之大鼠(NNN组),P<0.01或P<0.05;(2)PPP组,其±dp/dtmax显著低于自身抗体IgG1阴性、IgG2a和IgG2b阳性之大鼠(NPP组),P<0.01;(3)自身抗体IgG1和IgG2a阳性、IgG2b阴性之大鼠(PPN组),其±dp/dtmax显著低于NNN组,P<0.01;(4)PPN组,其±dp/dtmax显著低于NPP组,P<0.01。结论腹主动脉缩窄术所致的压力超负荷型大鼠CHF模型和左冠脉结扎术所致的低心输出量型大鼠CHF模型,在CHF的发生、发展过程中均有AMHCA IgG亚类的产生;AMHCA的产生不单纯是CHF的伴随现象,可能参与了CHF的病理生理过程。

^(99m)Tc标记抗心肌肌凝蛋白单克隆抗体在实验性心肌梗塞中的研究

为比较99mTc－AMLA的特异性，将两组心肌梗塞24h大鼠分别注射99mTc－AMLA（n=24）和99mTc－N－IgG（n=18）；为研究不同心肌梗塞时间对摄取抗体的影响，将另一组不同心肌梗塞时间（2h到14d共8个亚组）的大鼠注射99mTc－AMLA，计算三组的ID％／g和梗塞心肌摄取／正常心肌摄取比（IM／NM）。用一只心肌梗塞的狗注射99mTc－AMLA后离体心肌显像。结果表明，梗塞心肌摄取99mTC－AMLA为特异性摄取。其摄取量远高于正常心肌的摄取。大鼠注射99mTc－AMLA8h后IM／NM最高为6．68；而注射非特异性IgG在相同时刻仅为1．42（P＜0.01）。大鼠梗塞心肌摄取99mTc－AMLA与梗塞时间无明显区别（P＞0.05）。离体狗心肌显像表明，心肌中放射性浓集区与TTC染色中空白区一致。说明99mTc－AMLA是一个对心肌梗塞特异的显像剂，它可用于亲心肌梗塞的显像。

抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体IgG亚类对腹主动脉缩窄术后大鼠左室功能的影响

[目的]探讨抗心肌肌凝蛋白重链自身抗体(AMCHA)IgG亚类的产生与腹主动脉缩窄术后大鼠左室功能的关系。[方法]应用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,测定血流动力学变化,计算左心室重量/体重(LVW/BW)比值;以合成的大鼠心肌肌凝蛋白重链部分肽段(1135-1150氨基酸残基)为包被抗原,采用间接ELISA方法检测大鼠血清中心肌肌凝蛋白重链自身抗体(MCHA)IgG亚类的水平及动态变化。[结果]CHF大鼠手术组与假手术组相比左室压力上升和下降最大速率降低(+dp/dtm ax:2103.91±606.89 vs 3196.64±383.29;-dp/dtm ax:-1709.60±460.96 vs-2762.64±514.42,P<0.01),左室舒张末压升高(LVEDP:17.49±8.33 vs-5.69±1.19,P<0.01)、左室收缩压升高(LVSP:131.67±25.14 vs 111.98±4.63,P<0.05)、左心室重量/体重比值升高(LVW/BW:3.04±0.44 vs 2.57±0.20,P<0.01),术后1~2周,IgG1、IgG2 a和IgG2b自身抗体...

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。

猪心肌肌凝蛋白的提取纯化及鉴定

采用超速离心、分级饱和硫酸铵沉淀法等从猪心肌中成功的分离出了肌凝蛋白,并应用DEAE-Sephadex A-50离子交换层析对心肌肌凝蛋白进行了进一步的纯化,Fiske-SubbaRow法测定蛋白质的活性,Bradford法测定蛋白质的浓度。用变性、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳及质谱分析对蛋白质进行了精确的鉴定。研究表明,蛋白质粗提产量约为15m g/g,经过纯化后的蛋白质中基本不含杂质蛋白,活性为0.22 Piμmol/(mg.min),变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白质为3条带,分子质量约是200 ku,27 ku和20 ku。与标准肌凝蛋白同时进行电泳显示条带相同。非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白质为一条带,此条带经过质谱分析准确的证明为心肌肌凝蛋白。结果表明以上方法成功的从猪心中提取了高纯度高产量心肌肌凝蛋白,为肌凝蛋白在临床和科研中的应用打下了基础。

获得性漏斗胸膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ的表达变化和意义

目的通过检测获得性漏斗胸大鼠膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ的表达变化,探讨肌凝蛋白重链在获得性漏斗胸发生发展中的作用。方法选用4周龄SD大鼠48只,随机分为3组,每组16只。其中肋软骨组和膈肌组分别为从胸骨旁切断下位3对肋软骨并造成膈肌局部物理损伤而获得漏斗胸模型,对照组不做任何干预。于术后第2周和第4周每组各处死大鼠8只,收集膈肌组织,分别进行RT-PCR定量和Western blot检测。结果肋软骨组和膈肌组动物均呈现前胸壁凹陷畸形。与对照组比较,肋软骨组和膈肌组各时间点MyHC-Ⅰ表达均升高(P<0.05);但肋软骨组和膈肌组组间比较,仅术后第2周时MyHC-Ⅰ表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论获得性漏斗胸动物膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅰ表达增高,说明在动物漏斗胸畸形形成过程中膈肌功能发生了改变。

心肌肌凝蛋白轻链-1的免疫组化研究

为了研究心肌肌凝蛋白轻链－１（ＣＭＬＣ－１）组织特异性的特点，并对其构型在心肌发育过程中的表达规律以及不同哺乳动物ＣＭＬＣ－１构型的进化规律进行探讨，应用抗人心室肌ＣＭＬＣ－１单克隆抗体（ＭｃＡＢ）对成人和不同胎龄胎儿的心肌和其它组织、不同种属哺乳动物的心肌进行了免疫组织化学研究。结果发现：成人心室肌，慢性骨骼肌均发生强烈反应，成人心房，胎儿心室肌发生交叉反应，而其它组织如快型骨骼肌、平滑肌以及肝脾等非肌组织不发生反应。胎儿心肌的交叉反应程度随胎龄增加而增强，哺乳动物心肌均发生交叉反应，且随动物进化等级的提高呈增强趋势。结果说明：人ＣＭＬＣ－１具有一定的组织特异性，ＣＭＬＣ－１的表达与心脏发育和动物进化程度相关。

正常及突变MyBPC与肌凝蛋白结合功能的对比研究

目的 比较正常及突变 My BPC与肌凝蛋白的结合功能 .方法 重叠 PCR法制备正常及突变 My BPC的表达载体 ,大肠杆菌 BL- 2 1中表达并提纯蛋白 . 10 0 μL 含 2 .2 μmol· L- 1肌凝蛋白溶液中 ,分别加入不同浓度 My BPC蛋白 ,经离心、 SDS- PAGE,密度法测定两者的结合率 .结果 3774D1 8,32 2 3S1 4 0 结合率分别为 (6 8.2 0± 1.72 ) % ,(2 4.41±2 .10 ) % ,较正常 My BPC (82 .70± 2 .44 ) %显著降低 (n=5 ,P<0 .0 1) .结论 为家族性肥厚型心肌病突变基因的“肽类毒剂”

抗心肌肌凝蛋白单抗心肌放免显像的临床应用

抗心肌肌凝蛋白单抗心肌放免显像的临床应用武强李小鹰Ｋｈａｗ等于１９７６年首次阐述了放射性碘标记抗心肌肌凝蛋白抗体用于亲心肌梗塞显像的可行性，并于１９８２年制备了抗心肌肌凝蛋白单克隆抗体（ＡＭＡ）。ＡＭＡ的Ｆ（ａｂ）２或Ｆａｂ片段与ＤＴＰＡ连合后，经９...

梗塞心肌摄取锝标抗心肌肌凝蛋白轻链mAb^(99)Tc^m-AMLCA的影响因素

目的 :探讨注射锝标抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体 (99Tcm AMLCA)后不同时间 ,梗死时间和梗死区域对大鼠梗死心肌摄取99Tcm AMLCA的影响 .方法 :大鼠静脉注射99Tcm AMLCA 7.4MBq ,观察不同注射时间 (2 ,4 ,8,2 4h) ,不同梗死时间 (心梗后 6 ,12h ,1～ 14d)和不同梗死区域 (梗死中央、周边的内层心肌和外层心肌 )对梗死心肌 /正常心肌发射性比的影响 .结果 :注射后 2h梗死心肌开始摄取99Tcm AMLCA ,梗死心肌 /正常心肌发射性比是 1.6 7± 0 .96 ,4～ 8h摄取逐渐增加 ,2 4h达到高峰 ,梗死心肌 /正常心肌发射性比是 4 .38± 0 .80 .心肌梗死后 6h～ 14d ,梗死心肌均有很强的99Tcm AMLCA摄取 ,心梗后 5d摄取最强 ,梗死心肌 /正常心肌发射性比是3.82± 0 .6 7;梗死中央区内层心肌的放射性摄取比值是 4 .5 2± 0 .6 0 ,外层心肌是 3.32± 0 .5 8两者具有统计学显著意义 (P<0 .0 1) .结论 :急性心肌梗死大鼠梗死心肌特异性地摄取99Tcm AMLCA迅速持久 ,不受心梗时间影响 ,梗死中央区内层心肌摄取最强 ,为99Tcm AMLCA亲梗死心肌显像临床应用提供了实验依据 .

家族性肥厚型心肌病β型肌凝蛋白重链基因突变研究

1990年Tanigawa等连续报道了β-MHC的错义突变与FHC有关,这些突变集中在β-MHC的10个外显子,即外显子5,9,13,14,15,16,19,20,21,23.本文设计了9对PCR引物,限制性扩增β-MHC基因突变集中发生的9个外显子,用两轮扩增提高扩增产量,两步扩增法提高扩增产物的特异性.产物在中性聚丙烯酰胺上电泳进行SSCP分析.对6个肥厚型心肌病家系进行了β-MHC突变分析,结果显示,6个肥厚型心肌病家系中无一个家系找到β-MHC突变,表明突变的机率比国外报道的明显的低.

核转录因子反义核酸对慢性心力衰竭大鼠模型心肌肌凝蛋白同功酶和细胞因子的影响

目的:探讨核转录因子(nuclear factor kappa B, NF-κB)反义核酸(antisense oligonucleotide,AS-ON)对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)病程心肌肌凝蛋白同功酶(myosin isoenzyme,MI)和细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和Fas的影响。方法:采用纯种Wister大鼠作为实验动物,分为正常对照组、模型组和NF -κB AS -ON治疗组,每个亚组均10只。采用腹主动脉结扎方法制作慢性心力衰竭模型,治疗组在手术结扎后给予心包注射NF-κB反义核酸治疗。术后每两周行超声心动图、血液动力学检测,并取静脉血放射免疫分析检测TNF-α和IL-1β,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbant assay,ELISA)检测Fas水平,提取心肌肌凝蛋白重链(cardiac myosin heavy chain, CMHC),非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)检查心肌肌凝蛋白同功酶谱(myosin isoenzyme, MI)。结果:腹主动脉结扎后3月内是心功能代偿期,6月时是心功能失代偿期。NF-κB AS-ON治疗心力衰竭改善心功能,降低TNF-α、IL-1β和Fas水平,减轻MI V1水平向V3迁移。结论:NF -κB AS -ON治疗慢性心力衰竭疗效显著,其生化机理可能是维护细胞网络正常构成以及抑制心MI由V1优势向V3迁移。

抗人心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体的制备和鉴定

从人心脏中提取心肌肌凝蛋白轻链（ＣＭＬＣ１），免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞做常规融合，获得了２２株分泌抗ＣＭＬＣ１单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经对其中某些株作ＩｇＧ分型、核型、腹水效价、表位和亲和常数测定，表明所获单克隆抗体的质量良好，为建立分析轻链的方法奠定了基础。

人心肌肌凝蛋白轻链测定在急性心肌梗塞诊断中的应用

应用特异性抗体建达了人心肌肌凝蛋白轻链的双相非竞争性酶联免疫吸附分析,并检测了20例健康人和11例急性心肌梗塞患者的血清心肌肌凝蛋白轻链。结果在健康人血清中未见有可测定的心肌肌凝蛋白轻链存在。而所有急性心肌梗塞患者发病后6～12小时血清心肌肌凝蛋白轻链水平开始升高,其释放形式均呈双峰图形,高水平的心肌肌凝蛋白轻链在病人血中保持11±3天。心肌肌凝蛋白轻链具有高度的敏感性、特异性,而且急性心肌梗塞发病后它在血中出现早、持续时间长,因而是诊断急性心肌梗塞理想的生化指标。

聚丙烯酰胺凝胶电泳在心肌肌凝蛋白重链研究中的应用

本文分析了变性SDS PAGE、非变性焦磷酸盐PAGE、梯度SDS PAGE以及双向PAGE等分析心肌MHC的特点及其应用研究 ,介绍了分析骨骼肌MHC的SDS PAGE方法以及从SDS PAGE凝胶中回收蛋白质对纯化MHC及制备其特异性抗体用于心脏病的研究、诊断及治疗的意义。