吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白的表达变化

目的研究吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白p-cofilin的表达变化。方法 42只♂SD大鼠,随机分为吗啡依赖1周组(M1组)、2周组(M2组)和4周组(M4组),各依赖组均设对照,每组7只。吗啡依赖组采用剂量递增法腹腔注射吗啡,每日3次,连续7 d,日剂量按5,10,15,20,30,40,50 mg.kg-1逐日递增,对照组给与等体积的生理盐水。M2和M4组大鼠继续分别给予50 mg.kg-1盐酸吗啡,每天1次,连续注射1或3周。在最后一次给药后5 h断头处死大鼠,迅速分离前额叶皮质、海马、纹状体和丘脑。Western blot检测吗啡依赖大鼠不同脑区肌动蛋白及其结合蛋白的表达变化。结果与对照组相比,M2和M4组大鼠前额叶皮质内F-actin/G-actin比值分别上调53%(P<0.05)和102%(P<0.01);M2和M4组大鼠前额叶皮质内p-cofilin表达量分别上调93%(P<0.01)和88%(P<0.01)。M4组大鼠海马中F-actin/G-actin比值上调94%;M2和M4组大鼠海马中p-cofilin蛋白表达量分别上调45%(P<0.05)和30%(P<0.05)。M2和M4组大鼠纹状体内p-cofilin的蛋白表达量分别下调25%(P<0.05)和30%(P<0.05)。结论长期吗啡处理可诱导大鼠形成依赖,伴随着依赖相关脑区肌动蛋白重构,并呈现脑区特异性和时间依赖性。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的研究进展

细胞骨架在维持细胞形态、承受外力及保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用,同时参与许多重要的生命活动,其主要由微管、微丝及中间丝组成。微丝作为细胞骨架的主要成分之一,在细胞的多种功能中扮演着重要角色。肌动蛋白单体一个接一个连成一串肌动蛋白链,两串这样的肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝,微丝能被组装和去组装。微丝的组装先需要“核化”,即几个单体首先聚合,其他单体再与之结合成更大的多聚体。

靶向干预N-W ASP功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨干扰N-WASP功能区对大肠癌细胞侵袭转移能力的影响.方法:采用基因克隆方法构建包含N-WASP功能区V片段的重组质粒,转染大肠癌株LoVo.采用Transwell穿膜实验观察大肠癌细胞侵袭能力的变化;应用Capture-ELISA方法检测大肠癌细胞内吞生物素标记的转铁蛋白(Tfn)的能力改变.脾内注射制备大肠癌肝转移裸鼠模型,在体内进一步观察大肠癌细胞转移能力改变.结果:成功构建了含有N-WASP的V结构区域的重组质粒,并转染大肠癌株LoVo获得稳定表达.实验组表达V片段的大肠癌细胞穿膜的细胞数为42.15±7.35,而对照表达空载体的大肠癌细胞穿膜细胞数为85.25±6.16,未转染的大肠癌细胞穿膜细胞数为84.35±7.99,与实验组相比具有显著差异(P<0.05).表达V片段的大肠癌细胞内吞转铁蛋白的数量较对照组明显减少,内吞作用能力减弱.动物实验显示表达V片段的大肠癌细胞肝转移发生数为2/12,较对照组(10/12)和未转染组(10/12)明显减少.结论:靶向干预N-WASP与微丝蛋白结合的功能区域的新方法能够抑制人大肠癌细胞的侵袭和转移能力.

二价离子对微丝凝聚网络的形态影响分析研究

肌动蛋白纤维网络构成细胞骨架,其性质与细胞的力学行为关系密切,研究细胞力学必须了解不同离子在各浓度下对微丝网络形态的影响。在此项目中我们探究二价铜离子对肌动蛋白纤维形态变化的影响。我们利用肌动蛋白单体自组装成微丝,并用鬼笔环肽对其进行标记,之后在多个微丝溶液样品中分别加入不同浓度的二价铜离子,通过共聚焦显微镜观察由交联蛋白与微丝构成网络的形态变化,确定二价离子浓度等条件,研究微丝浓度、长度变化如何影响凝聚微丝网络生物形态和生物力学行为。结果表明,2mM浓度的硫酸铜溶液加入肌动蛋白纤维溶液后。

人参三七川芎提取物对复制性衰老内皮细胞微丝形态学的影响

目的探讨人参三七川芎提取物延缓内皮衰老的可能作用机制。方法通过细胞体外传代,将人心脏微血管内皮细胞（HCMEC）培养至第8代方法建立内皮细胞复制性衰老模型,结合β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色、CCK-8检测细胞增殖能力、流式细胞仪分析细胞周期方法进行衰老细胞鉴定。96孔板按照6×103~8×103/孔接种细胞,分为青年组、衰老组、白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组,每组3个复孔。青年组为5代青年细胞,其余各组为8代复制性衰老细胞,白藜芦醇组加浓度为10μmol/L白藜芦醇溶液100μl,中药低、中、高剂量组分别加浓度为50、100、200 mg/L的人参三七川芎提取物100μl。观察各组24 h、48 h、72 h后纤维状肌动蛋白（F-actin）、单体肌动蛋白（G-actin）的形态学改变。结果衰老组细胞SA-β-gal染色阳性明显高于青年组（P〈0.01）;衰老组较青年组细胞表现为G0/G1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例下降,细胞增殖能力降低（P〈0.01）。衰老组F-actin出现断裂、应力纤维,G-actin表现为向细胞周边区域伸展移位,而细胞中央区域染色变弱;白藜芦醇组和中药低、中、高剂量组可以维持复制性衰老HCMEC微丝的结构,减少G-actin向F-actin的转变,减少应力纤维的形成,并且干预效果随着干预时间延长表现更加明显。结论人参三七川芎提取物能够保持复制性衰老HCMEC微丝的正常形态,这可能是其延缓内皮衰老的重要机制。