肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4、环氧合酶2在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)、环氧合酶2(COX2)在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 收集96例结直肠癌患者的病历资料,所有患者均采用免疫组织化学染色法检测ARPC4、COX2表达情况,比较不同临床特征结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率,采用回归分析法分析结直肠癌组织中ARPC4与COX2表达的相关性,比较不同ARPC4、COX2表达情况结直肠癌患者的3年生存率。结果 结直肠癌患者中ARPC4阳性表达率为61.46%(59/96),COX2阳性表达率为59.38%(57/96)。有淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率均高于无淋巴结转移、中高分化、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关(r=0.618,P﹤0.05)。ARPC4阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于ARPC4阴性表达患者,COX2阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于COX2阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关,其表达与结直肠癌患者的临床特征及预后有关。

下调肌动蛋白相关蛋白2/3复合体5对肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖、侵袭和转移能力的影响

背景与目的:肌动蛋白相关蛋白2/3复合体5(actin related protein 2/3 complex subunit5,ARPC5)参与肌动蛋白的组装,影响细胞的运动能力,在形成癌细胞侵袭性伪足的过程中起到重要作用。本研究通过基因沉默手段,探讨下调ARPC5基因表达对肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:应用阳离子脂质体转染法构建ARPC5基因沉默(si-ARPC5)的SK-MES-1肺鳞癌细胞株,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定转染效率和表达情况。实验设置si-ARPC5实验组、空白对照组(mock组)及阴性对照组(NC组)。采用细胞技术试剂盒(cell couiting kit-8,CCK-8)法测定si-ARPC5对SK-MES-1细胞的增殖的影响;划痕修复实验测定si-ARPC5对SK-MES-1细胞迁移能力的影响;Transwell小室体外侵袭实验测定siARPC5对SK-MES-1细胞的侵袭能力的影响。结果:转染si-ARPC5后的SK-MES-1细胞在mRNA和蛋白水平上均下调ARPC5的表达。与mock组及NC组比较,si-ARPC5实验组SK-MES-1细胞增殖能力明显下降(t=7.993,t=8.681,P<0.05)。si-ARPC5实验组划痕修复率(43.32±0.23)%,而mock组和NC组划痕修复率分别为(73.11±0.43)%和(76.58±0.88)%,差异有统计学意义(t=7.348,t=10.614,P<0.05)。si-ARPC5组的SK-MES-1细胞穿膜数为(27±6)个,mock组为(101±11)个,NC组为(92±9)个。si-ARPC5组穿膜细胞数明显少于其他2组,差异有统计学意义(t=10.229,t=8.391,P<0.05)。结论:下调ARPC5基因的表达能够显著抑制肺鳞癌细胞株SK-MES-1的增殖、侵袭和转移能力。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的结构、功能与调节

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程。微丝由肌动蛋白单体组装而成 ,肌动蛋白相关蛋白 2 / 3(Arp2 /Arp3,Arp2 / 3)复合体在微丝形成过程中起重要作用。Arp2 / 3复合体由 7个亚单位组成 ,在细胞内受到多种核化促进因子的调节 ,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化。Arp2 / 3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在肿瘤中的研究进展

肌动蛋白相关蛋白2/3(actin related protein 2/3,ARP2/3)复合体参与肌动蛋白的核聚与解聚,影响细胞运动能力,在形成细胞骨架和癌细胞侵袭性伪足等过程中起着重要作用。最近的研究发现ARP2/3复合体在多种肿瘤中表达异常,并与肿瘤的发展、侵袭、转移、预后密切相关。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

肌动蛋白相关蛋白(ARP2/3)在神经树突棘可塑性中的研究进展

研究突触后结构——树突棘改变,是对学习记忆的重要的热点。F-actin经调节可以结合和/或解聚的动态特点是树突棘运动、生长和塑性的基础。在分枝状微丝形成过程中,肌动蛋白相关蛋白2/3(Actin-related protein2/3,ARP2/3)复合体起着重要的作用。细胞内的多种核化促进因子可以调节ARP2/3的活性。Arp2/3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝骨架形成机制,特别是树突棘的可塑性有重要意义。

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A-自然杀伤细胞2族成员D通路及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,与其特异性结合,活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,发挥免疫监视作用。本文就近5年来有关MICA-NKG2D通路的表达、调控及其在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。

高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对小鼠视网膜感光细胞661W的影响

目的探讨高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对视网膜感光细胞661W功能的影响及其相关机制。方法体内实验选取C57BL/6J小鼠12只,采用随机数字表法分为糖尿病组和正常组,每组各6只,糖尿病组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模,正常组小鼠腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液。采用免疫组织化学法检测Ndufa4l2蛋白在正常组和糖尿病组小鼠视网膜中的表达情况。体外实验将661W细胞随机分组为对照组(细胞采用正常培养基培养24 h)、高糖组(细胞采用含葡萄糖浓度为50 mmol·L^(-1)高糖培养基培养24 h)、si-NC组(细胞转染si-NC无序序列后,采用正常培养基培养24 h)、si-NC+HG组(细胞转染si-NC无序序列后,采用含50 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养24 h)和si-Ndufa4l2+HG组(细胞转染si-Ndufa4l2特异敲低序列后,采用含50 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养24 h);采用qRT-PCR和Western blot检测对照组和高糖组细胞中Ndufa4l2的表达情况。CCK-8法检测si-Ndufa4l2对661W细胞活性的影响,采用活性氧(ROS)试剂盒检测si-Ndufa4l2对661W细胞中ROS水平的影响,采用乳酸检测试剂盒检测si-Ndufa4l2对661W细胞中乳酸水平的影响。结果体内实验结果表明,与正常组小鼠相比,糖尿病组小鼠视网膜中Ndufa4l2蛋白表达降低。体外实验结果显示,对照组和高糖组661W细胞中Ndufa4l2 mRNA相对表达量分别为1.001±0.069和0.356±0.071,Ndufa4l2蛋白相对表达量分别为1.000±0.078和0.795±0.070,与对照组相比,高糖组661W细胞中的Ndufa4l2 mRNA和蛋白达表水平均下降(均为P<0.05)。CCK-8法检测发现,si-Ndufa4l2+HG组661W的细胞活力低于si-NC+HG组(P<0.001)。ROS检测结果表明,si-Ndufa4l2+HG组661W细胞的荧光亮度高于si-NC+HG组。细胞上清乳酸检测结果显示,si-NC组、si-NC+HG组和si-Ndufa4l2+HG组细胞上清中乳酸含量分别为(10.470±0.140)mmol·L^(-1)、(7.480±0.270)mmol·L^(-1)和(6.080±0.240)mmol·L^(-1),si-Ndufa4l2+HG组与si-NC+HG组相比,细胞上清中乳酸含量进一步降低(P<0.001)。结论线粒体Ndufa4l2蛋白在高糖条件下低表达,Ndufa4l2水平下降会通过氧化磷酸化途径损伤细胞的代谢功能从而进一步抑制661W的细胞活力。

急性脑梗死患者血清CTRP-3、D-二聚体、sTREM2水平及相关临床特征与溶栓后出血性转化的关系

目的 探讨急性脑梗死患者血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP-3)、D-二聚体、可溶性髓样细胞触发受体2(sTREM2)水平及相关临床特征与溶栓后出血性转化(HT)的关系。方法 回顾性分析2018年9月—2022年9月在青海省人民医院接受溶栓治疗的120例急性脑梗死患者的临床资料,根据患者溶栓后是否发生HT分为HT组(30例)、非HT组(90例)。比较两组患者的临床资料及血清CTRP-3、D-二聚体、sTREM2水平。采用多因素逐步Logistic回归分析急性脑梗死患者溶栓后发生HT的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析急性脑梗死患者溶栓后HT预测模型预测HT发生的价值。结果 HT组心房颤动(以下简称房颤)、大面积脑梗死、入院NIHSS评分≥15分占比高于非HT组(P <0.05),血清CTRP-3水平低于非HT组(P <0.05),D-二聚体、sTREM2水平高于非HT组(P <0.05)。血清CTRP-3、D-二聚体、sTREM2水平预测急性脑梗死患者溶栓后发生HT的敏感性分别为66.7%(95%CI:0.598,0.756)、70.0%(95%CI:0.607,0.812)、80.0%(95%CI:0.714,0.889),特异性分别为73.3%(95%CI:0.636,0.821)、86.7%(95%CI:0.778,0.923)、86.7%(95%CI:0.747,0.942)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,房颤[OR=1.237(95%CI:1.103,1.387)]、大面积脑梗死[OR=2.338(95%CI:1.292,4.231)]、入院NIHSS评分≥15分[OR=2.087(95%CI:1.231,3.538)]、CTRP-3≤269.265μg/L [OR=3.006(95%CI:1.508,5.992)]、D-二聚体≥2.625 mg/L [OR=2.649(95%CI:1.374,5.107)]、sTREM2≥314.675 ng/L [OR=2.328(95%CI:1.411,3.841)]是急性脑梗死患者溶栓后发生HT的危险因素(P <0.05)。根据多因素Logistic逐步回归分析结果建立急性脑梗死患者溶栓后HT预测模型,Logit(P)=-33.887+0.213×房颤+0.849×大面积脑梗死+0.736×入院NIHSS评分+1.101×CTRP-3+0.974×D-二聚体+0.845×sTREM2;ROC曲线分析结果表明,预测模型预测HT发生的敏感性为93.3%(95%CI:0.841,0.991),特异性为87.8%(95%CI:0.808,0.976)。结论 血清CTRP-3、D-二聚体、sTREM2水平与急性脑梗死患者溶栓后HT有关,预测价值较高,且急性脑梗死患者溶栓后HT预测模型预测HT优于各项指标单独预测。

子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中ARPC2/3蛋白的表达及意义

目的:研究肌动蛋白相关蛋白复合体2/3(Actin-related protein complex2/3,ARPC2/3)在子宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及子宫颈鳞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP法检测ARPC2/3蛋白在CIN和SCC中的表达,同时与正常宫颈组织中的ARPC2/3蛋白做对照。结果:正常宫颈组ARPC2/3蛋白阳性率13.8%,SCC组ARPC2/3蛋白阳性率59%,CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组ARPC2/3蛋白阳性率分别为39.5%、40.6%、44.7%,正常宫颈组与CIN组及SCC组间ARPC2/3蛋白阳性率表达差异有统计学意义(P<0.005),而CIN各组间ARPC2/3蛋白阳性率表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ARPC2/3蛋白随着CIN由轻至重表达逐渐增强直至在SCC中的高表达,其增强与宫颈病变的恶性程度呈正比,对诊断子宫颈鳞癌具有重要的参考价值。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

细胞肌动蛋白聚合信号调控研究进展

细胞肌动蛋白聚合和解聚过程与细胞功能密切相关,在聚合和解聚过程中受多种信号调控和影响。介绍肌动蛋白聚合的一般概念、聚合的过程以及信号调控因子、调控机制及过程,以便深入理解肌动蛋白聚合的机制,为干预肌动蛋白聚合发现潜在的靶点,以抑制肌动蛋白的装配、削弱肿瘤细胞的迁移等运动,最终达到抑制癌细胞转移的目的。

精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨

目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。

维吾尔族妇女子宫颈癌ARPC2/3的表达及其相关性

目的 探讨颅内血管周细胞瘤（haemangiopericytomas,HPC）的发病率、临床病理特点、遗传学改变.方法 对2例颅内HPC进行光镜、电镜、免疫组化分析并复习颅外HPC1例、血管瘤型脑膜瘤2例与孤立性纤维性肿瘤2例的临床病理资料.结果 2例均由密集的梭形细胞组成,其内含丰富的鹿角状血管,网状纤维包绕单个瘤细胞,免疫组化CD34＋、CD99＋、Bcl-2＋.结论 颅内HPC是一种不同于脑膜瘤与孤立性纤维性肿瘤的少见肿瘤.

皮层肌动蛋白结合蛋白Cortactin研究进展

皮层肌动蛋白结合蛋白Cortactin参与细胞的多种细胞活动,其中包括细胞的板状伪足突起形成、突触形成、囊泡运输、胞吐、胞吞、细胞间黏附、侵袭性、细胞迁移、运动以及细胞分裂等作用,上诉细胞过程都是通过调控各微丝的聚合而发挥相应作用,Cortactin在皮层微丝肌动蛋白的组装上发挥着不可替代的作用。Cortactin是酪氨酸激酶Scr主要底物,酪氨酸磷酸化对Cortactin功能起调节作用。Cortactin在细胞活动中的作用,表明Cortactin不仅在癌细胞运动及侵袭上发挥重要作用,在炎性反应及人体气道分泌和收缩机制上也有着重要作用。所以对Cortactin在微丝肌动蛋白的组装及磷酸化等的研究,将阐明Cortactin具体作用的机制。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能中的作用

目的探讨肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能中的作用.方法40只小鼠按随机数字表法分为健康对照组、健康Arp2/3复合体抑制剂(CK666)组、慢阻肺组及慢阻肺CK666组各10只,慢阻肺组和慢阻肺CK666组采用香烟烟雾暴露法建立慢阻肺模型,其对照组无烟雾暴露.造模90d后,取各组小鼠肺组织分离AM.流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,以平均荧光强度(MFI)和吞噬FITC-E.coli阳性细胞百分比(吞噬%)表示;蛋白印迹法测AM的Arp2和F-肌动蛋白表达;激光共聚焦显微镜测AM的Arp2、F-肌动蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均吸光度及Arp2和F-肌动蛋白的共定位;扫描电镜观察AM吞噬时的形态.结果慢阻肺组AM的MFI和吞噬%均显著低于健康对照组[(4702±243)比(8684±234)和(32.21±1.66)%比(65.88±1.77)%,均P<0.01];慢阻肺CK666组[(3597±307)、(22.09±1.89)%]、健康CK666组[(7446±236)、(50.09±1.64)%]均显著低于各自的对照组(均P<0.01).慢阻肺组AM的Arp2和F-肌动蛋白相对表达量均显著低于健康对照组(0.508±0.025比0.813±0.040和0.462±0.029比0.720±0.039,均P<0.01);慢阻肺CK666组(0.265±0.014)、健康CK666组(0.637±0.032)F-肌动蛋白均显著低于各自对照组(均P<0.01).慢阻肺组AM的Arp2蛋白、F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于健康对照组(34.43±0.56比142.83±1.90、61.59±0.70比145.93±3.05、41.49±0.33比189.17±2.60,均P<0.01);慢阻肺CK666组(37.73±1.04、28.84±2.95)和健康CK666组(137.07±1.35、157.46±1.00)F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于各自对照组(均P<0.01).慢阻肺组孟德斯共定位系数(MOC)显著低于健康对照组(0.395±0.014比0.880±0.002,P<0.01),慢阻肺CK666组(0.297±0.006)、健康CK666组(0.737±0.031)均显著低于各自对照组(均P<0.01).健康对照组AM伸出密集且长的丝状伪足,细胞表面突起、皱褶多;健康CK666组AM丝状伪足伸出减少且较短,表面突起、皱褶减少;慢阻肺组和慢阻CK666组AM丝状伪足伸出短小或缺失,表面突起、皱褶明显减少.基础状态和CK666干预后,AM的Arp2、F-肌动蛋白相对表达量及其MOC与MFI之间呈正相关.结论Arp2/3复合体活性下降致慢阻肺小鼠AM吞噬功能低下,且慢阻肺小鼠AM对Arp2/3复合体抑制剂更敏感.

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响

目的观察肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织、癌旁组织中的表达情况,分析ARPC4蛋白的表达变化与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法应用实时荧光定量PCR和Western blot检测肿瘤组织和癌旁组织中ARPC4的mRNA及蛋白表达情况,应用免疫组织化学检测ARPC4在110例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织中的表达情况;分析ARPC4蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。采用Transwell法检测结直肠癌细胞系HCT-8中ARPC4敲降后细胞侵袭能力的变化;应用Western blot研究ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭相关蛋白,分析ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭能力的分子机制。结果实时荧光定量PCR和Western blot的结果显示,ARPC4在结肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。免疫组织化学的结果显示,ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(59%vs.12%,P<0.01)。ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移及病理分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,ARPC4蛋白阳性表达可明显缩短结直肠癌患者术后无瘤生存期(P=0.010)。多因素Cox回归分析结果表明,ARPC4蛋白阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.035)。下调ARPC4表达能够抑制HCT-8的侵袭,Western blot结果显示在HCT-8中ARPC4敲降后,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达受到抑制。结论 ARPC4蛋白在结直肠癌中高表达,并与结直肠癌的转移及预后相关,ARPC4可能通过MMP-2和MMP-9影响结直肠癌细胞侵袭。

miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组和空白组miR-10b表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05),各组NK细胞杀伤活性均随效靶比增加而增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组相比,相同效靶比NK细胞杀伤活性、NKG2D表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组与空白组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

HAX-1通过调控MDM2/SMAD3通路对TGF-β1诱导的特发性肺间质纤维化的作用机制

目的探讨造血细胞特异性蛋白1相关蛋白X-1(HAX-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的特发性肺间质纤维化的作用及机制。方法将A549细胞分为对照组(无处理)、TGF-β1组(用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、NC si组(用阴性对照siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+pcDNA3.1组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用pcDNA3.1空质粒转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+DMSO组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,向细胞培养液中加入溶剂DMSO处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+SIS3组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,用终浓度为1μmol·L^(-1)溶于DMSO的SIS3处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)。相应处理结束后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Western blot检测HAX-1、鼠双微体基因2(MDM2)、SMAD3、p-SMAD3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)蛋白表达水平。结果TGF-β1诱导细胞后,细胞由鹅卵石形或多角形转变为梭形、纺锤形,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HAX-1、α-SMA和COL1A1蛋白表达升高(P<0.05)。干扰HAX-1可提高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MDM2、p-SMAD3、α-SMA和COL1A1蛋白表达(P<0.05),并且细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形。MDM2过表达抵消HAX-1干扰对p-SMAD3、E-cadherin、α-SMA和COL1A1蛋白表达的影响(P<0.05)。SMAD3抑制剂SIS3处理后细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA和COL1A1蛋白表达下降(P<0.05)。结论HAX-1在TGF-β1诱导的A549细胞中高表达,HAX-1敲低可通过MDM2/SMAD3通路抑制TGF-β1诱导的肺泡细胞纤维化过程。