MiR-579-3p靶向肌动蛋白相关蛋白3B调控口腔鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨miR-579-3p对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:培养正常人口腔角质形成细胞(normal human oral keratinocyte,NHOK)和OSCC细胞系CAL27、CAL33、SCC15,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞中miR-579-3p和肌动蛋白相关蛋白3B(actin-related protein 3B,ACTR3B)信使RNA(mRNA)的表达水平,蛋白质印迹法(western blot)检测ACTR3B蛋白表达水平。以CAL33细胞为研究对象,构建过表达miR-579-3p或沉默ACTR3B表达的CAL33细胞,四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium,MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱天冬酶-3(C-caspase-3)蛋白水平。Starbase生物信息学软件预测ACTR3B可能是miR-579-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-579-3p和ACTR3B调控关系。结果:与NHOK细胞比较,OSCC细胞系CAL27、CAL33和SCC15中miR-579-3p表达水平降低(P<0.05),ACTR3B mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。过表达miR-579-3p或沉默ACTR3B表达均可降低CAL33细胞存活率和CyclinD1蛋白表达水平(P<0.05),提高CAL33细胞凋亡率和C-caspase-3蛋白表达水平(P<0.05)。miR-579-3p靶向负调控ACTR3B表达。过表达ACTR3B降低了过表达miR-579-3p对CAL33细胞存活率、凋亡率及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响。结论:过表达miR-579-3p可能通过下调ACTR3B表达抑制OSCC细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4、环氧合酶2在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)、环氧合酶2(COX2)在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 收集96例结直肠癌患者的病历资料,所有患者均采用免疫组织化学染色法检测ARPC4、COX2表达情况,比较不同临床特征结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率,采用回归分析法分析结直肠癌组织中ARPC4与COX2表达的相关性,比较不同ARPC4、COX2表达情况结直肠癌患者的3年生存率。结果 结直肠癌患者中ARPC4阳性表达率为61.46%(59/96),COX2阳性表达率为59.38%(57/96)。有淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率均高于无淋巴结转移、中高分化、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关(r=0.618,P﹤0.05)。ARPC4阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于ARPC4阴性表达患者,COX2阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于COX2阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关,其表达与结直肠癌患者的临床特征及预后有关。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的结构、功能与调节

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程。微丝由肌动蛋白单体组装而成 ,肌动蛋白相关蛋白 2 / 3(Arp2 /Arp3,Arp2 / 3)复合体在微丝形成过程中起重要作用。Arp2 / 3复合体由 7个亚单位组成 ,在细胞内受到多种核化促进因子的调节 ,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化。Arp2 / 3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义。

肌动蛋白相关蛋白(ARP2/3)在神经树突棘可塑性中的研究进展

研究突触后结构——树突棘改变,是对学习记忆的重要的热点。F-actin经调节可以结合和/或解聚的动态特点是树突棘运动、生长和塑性的基础。在分枝状微丝形成过程中,肌动蛋白相关蛋白2/3(Actin-related protein2/3,ARP2/3)复合体起着重要的作用。细胞内的多种核化促进因子可以调节ARP2/3的活性。Arp2/3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝骨架形成机制,特别是树突棘的可塑性有重要意义。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在肿瘤中的研究进展

肌动蛋白相关蛋白2/3(actin related protein 2/3,ARP2/3)复合体参与肌动蛋白的核聚与解聚,影响细胞运动能力,在形成细胞骨架和癌细胞侵袭性伪足等过程中起着重要作用。最近的研究发现ARP2/3复合体在多种肿瘤中表达异常,并与肿瘤的发展、侵袭、转移、预后密切相关。

细胞肌动蛋白聚合信号调控研究进展

细胞肌动蛋白聚合和解聚过程与细胞功能密切相关,在聚合和解聚过程中受多种信号调控和影响。介绍肌动蛋白聚合的一般概念、聚合的过程以及信号调控因子、调控机制及过程,以便深入理解肌动蛋白聚合的机制,为干预肌动蛋白聚合发现潜在的靶点,以抑制肌动蛋白的装配、削弱肿瘤细胞的迁移等运动,最终达到抑制癌细胞转移的目的。

维吾尔族妇女子宫颈癌ARPC2/3的表达及其相关性

目的 探讨颅内血管周细胞瘤（haemangiopericytomas,HPC）的发病率、临床病理特点、遗传学改变.方法 对2例颅内HPC进行光镜、电镜、免疫组化分析并复习颅外HPC1例、血管瘤型脑膜瘤2例与孤立性纤维性肿瘤2例的临床病理资料.结果 2例均由密集的梭形细胞组成,其内含丰富的鹿角状血管,网状纤维包绕单个瘤细胞,免疫组化CD34＋、CD99＋、Bcl-2＋.结论 颅内HPC是一种不同于脑膜瘤与孤立性纤维性肿瘤的少见肿瘤.

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能中的作用

目的探讨肌动蛋白相关蛋白(Arp)2/3复合体在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬功能中的作用.方法40只小鼠按随机数字表法分为健康对照组、健康Arp2/3复合体抑制剂(CK666)组、慢阻肺组及慢阻肺CK666组各10只,慢阻肺组和慢阻肺CK666组采用香烟烟雾暴露法建立慢阻肺模型,其对照组无烟雾暴露.造模90d后,取各组小鼠肺组织分离AM.流式细胞术测AM吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,以平均荧光强度(MFI)和吞噬FITC-E.coli阳性细胞百分比(吞噬%)表示;蛋白印迹法测AM的Arp2和F-肌动蛋白表达;激光共聚焦显微镜测AM的Arp2、F-肌动蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均吸光度及Arp2和F-肌动蛋白的共定位;扫描电镜观察AM吞噬时的形态.结果慢阻肺组AM的MFI和吞噬%均显著低于健康对照组[(4702±243)比(8684±234)和(32.21±1.66)%比(65.88±1.77)%,均P<0.01];慢阻肺CK666组[(3597±307)、(22.09±1.89)%]、健康CK666组[(7446±236)、(50.09±1.64)%]均显著低于各自的对照组(均P<0.01).慢阻肺组AM的Arp2和F-肌动蛋白相对表达量均显著低于健康对照组(0.508±0.025比0.813±0.040和0.462±0.029比0.720±0.039,均P<0.01);慢阻肺CK666组(0.265±0.014)、健康CK666组(0.637±0.032)F-肌动蛋白均显著低于各自对照组(均P<0.01).慢阻肺组AM的Arp2蛋白、F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于健康对照组(34.43±0.56比142.83±1.90、61.59±0.70比145.93±3.05、41.49±0.33比189.17±2.60,均P<0.01);慢阻肺CK666组(37.73±1.04、28.84±2.95)和健康CK666组(137.07±1.35、157.46±1.00)F-肌动蛋白、FITC-E.coli平均吸光度均显著低于各自对照组(均P<0.01).慢阻肺组孟德斯共定位系数(MOC)显著低于健康对照组(0.395±0.014比0.880±0.002,P<0.01),慢阻肺CK666组(0.297±0.006)、健康CK666组(0.737±0.031)均显著低于各自对照组(均P<0.01).健康对照组AM伸出密集且长的丝状伪足,细胞表面突起、皱褶多;健康CK666组AM丝状伪足伸出减少且较短,表面突起、皱褶减少;慢阻肺组和慢阻CK666组AM丝状伪足伸出短小或缺失,表面突起、皱褶明显减少.基础状态和CK666干预后,AM的Arp2、F-肌动蛋白相对表达量及其MOC与MFI之间呈正相关.结论Arp2/3复合体活性下降致慢阻肺小鼠AM吞噬功能低下,且慢阻肺小鼠AM对Arp2/3复合体抑制剂更敏感.

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响

目的观察肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织、癌旁组织中的表达情况,分析ARPC4蛋白的表达变化与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法应用实时荧光定量PCR和Western blot检测肿瘤组织和癌旁组织中ARPC4的mRNA及蛋白表达情况,应用免疫组织化学检测ARPC4在110例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织中的表达情况;分析ARPC4蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。采用Transwell法检测结直肠癌细胞系HCT-8中ARPC4敲降后细胞侵袭能力的变化;应用Western blot研究ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭相关蛋白,分析ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭能力的分子机制。结果实时荧光定量PCR和Western blot的结果显示,ARPC4在结肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。免疫组织化学的结果显示,ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(59%vs.12%,P<0.01)。ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移及病理分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,ARPC4蛋白阳性表达可明显缩短结直肠癌患者术后无瘤生存期(P=0.010)。多因素Cox回归分析结果表明,ARPC4蛋白阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.035)。下调ARPC4表达能够抑制HCT-8的侵袭,Western blot结果显示在HCT-8中ARPC4敲降后,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达受到抑制。结论 ARPC4蛋白在结直肠癌中高表达,并与结直肠癌的转移及预后相关,ARPC4可能通过MMP-2和MMP-9影响结直肠癌细胞侵袭。

结肠癌组织中Arp3表达及与病理特征关系研究

目的 探讨结肠癌组织中肌动蛋白相关蛋白3(Arp3)表达及与病理特征关系。方法 收集我院于2017年5月-2020年5月收治的78例结肠癌患者的肿瘤组织及其配对的癌旁组织作为癌组织和对照组织,分别采用免疫组化法和荧光定量RNA法测定Arp3蛋白和mRNA表达水平,比较癌组织与癌旁组织Arp3蛋白与mRNA表达的差异;收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、淋巴转移、临床分期等不同病理参数,并分析Arp3的表达与这些临床参数的相关性。结果 癌组织中Arp3阳性表达率(52.56%)显著高于癌旁正常组织(6.41%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中Arp3 mRNA表达(0.39±0.12)显著高于癌旁组织(0.07±0.02)(P<0.05);结肠癌组织中Arp3阳性表达率与性别、年龄、肿瘤直径和分化程度无显著相关性(P>0.05),而与临床分期与淋巴结转移密切相关(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期组Arp3阳性表达率(68.52%)显著高于临床分期Ⅰ-Ⅱ期(16.67%),淋巴结转移组Arp3阳性表达率(72.00%)高于无淋巴结转移组(43.40%)(P<0.05)。结论 Arp3可能在结肠癌中高表达,且与临床分期和淋巴结转移密切相关。

LAMβ1联合ARPC4检测在结直肠癌诊断中的应用

目的探讨层粘连蛋白β1(LAMβ1)联合肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)检测在结直肠癌诊断中的应用价值。方法收集2020年3月至2021年3月江苏省如皋市人民医院收治的74例结直肠癌患者的癌组织标本和癌旁组织标本。采用实时荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织LAMβ1、ARPC4 mRNA表达水平;采用免疫印迹法测定癌组织及癌旁组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平;采用受试者操作(ROC)曲线分析LAMβ1联合ARPC4蛋白表达水平诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌组织LAMβ1、ARPC4 mRNA、蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平诊断结直肠癌的最佳截断点分别为1.02、0.94;灵敏度分别为78.38%、81.08%;特异度分别为82.43%、78.37%;曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.804;约登指数分别为0.608、0.595;两者联合的特异度、AUC和约登指数分别为98.65%、0.873和0.757。结论结直肠癌患者癌组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平均异常升高,两者均可作为诊断结直肠癌的敏感指标,两者联合诊断价值更高。

大鲵皮肤cDNA文库构建及Arpc5l基因cDNA序列和组织表达分析

以健康大鲵背部皮肤为材料,采用Smart技术构建大鲵皮肤cDNA文库,经检测文库容量为1.50×106cfu,文库重组率为98%,插入片段平均长度约为1 kb.通过对大鲵皮肤cDNA文库的随机筛选,分离获得了大鲵肌动蛋白相关2/3复合物亚基-5样蛋白(Arp2/3 complex subunit 5-like,Arpc5l)基因cDNA序列.生物信息学分析表明,大鲵Arpc5l基因全长cDNA为699 bp,包含459 bp的开放阅读框,分子量为17 154.36,等电点(pI)为5.43;该基因编码的Arpc5l蛋白分别在7-29 AA处和44-66 AA处具有跨膜结构域及多种二级结构,且三级结构与Arp2/3 complex家族成员相似.实时定量PCR结果表明,该基因在大鲵皮肤、肌肉、肠、肝、脾、肺、胃以及肾等组织中广泛表达,且在肾、肠、肌肉中的表达量极显著高于其它组织(P<0.01).进化分析结果表明,大鲵Arpc5l氨基酸序列和小鼠(77%)等陆生动物同源性最高,和爪蟾同源性为73%,大鲵处于水生到陆生之间的过渡类型,且与陆生动物的亲缘关系更近.

潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白组学研究

目的:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质谱,筛选和鉴定与湿邪有关的疾病特异性蛋白,探寻湿邪致病的生物标志物。方法:选取SD大鼠20只随机分为对照组、外湿组,每组10只。造模成功后无菌摘除脾脏,取出脾组织10mg/只,进行双向电泳实验、双向凝胶电泳图象分析,肽质量指纹图谱与电喷雾串联质谱鉴定蛋白质,分析差异蛋白质意义。结果:通过比较正常及潮湿环境下大鼠脾组织差异蛋白质,发现3个有意义的蛋白质:表达上调的有2个:载脂蛋白A-I、肌动蛋白相关蛋白2/3复合物亚基5;表达下调的有1个:结合珠蛋白。结论:正常及潮湿环境下大鼠脾组织蛋白质存在差异表达,这些差异蛋白质可能是与湿邪致病相关的疾病特异性蛋白。

结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的表达及对肿瘤侵袭、转移的影响

目的探究结直肠癌组织中层粘连蛋白β1(LAMβ1)、肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)及间隙连接蛋白26(Cx26)的表达及与肿瘤侵袭、转移的关系。方法选取2018年6月至2019年12月如皋市人民医院病理科收集的100例结直肠癌手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁正常组织,应用实时荧光定量PCR检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达;Western blot检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达,免疫组织化学法检测LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达阳性率,并分析LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达与患者临床病理特征的关系。结果RT-PCR结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx2的mRNA表达相较于癌旁组织上调。Western blot检测结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,LAMβ1、ARPC4、Cx26着色主要分布于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。不同性别、年龄、肿瘤大小结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx26表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx2表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌肿瘤组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达量存在正相关性(P<0.05),其蛋白表达之间同样存在正相关性(P<0.05)。结论LAMβ1、ARPC4、Cx26表达升高与结直肠癌的侵袭、转移有关。

ARPC4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响

目的探讨肌动蛋白相关蛋白(actinrelated protein,ARP)2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响。方法选择结直肠癌患者78例,取所有患者手术切除的癌灶组织标本(病灶组)与癌旁结肠粘膜组织(癌旁组),采用免疫组化法检测ARPC4表达水平,调查患者的一般资料、病理特征并进行相关性分析。结果在78例患者中,病灶组的ARPC4表达阳性率为80.8%,显著高于癌旁组的28.2%(P<0.05)。不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭、淋巴结转移等患者的ARPC4表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson直线相关性分析显示:临床分期、局部侵袭、淋巴结转移与患者的ARPC4表达阳性率存在显著相关性(P<0.05)。COX回归分析显示:临床分期、淋巴结转移、ARPC4表达阳性率为导致局部侵袭的影响因素(P<0.05)。结论ARPC4在结直肠癌组织中呈现高表达状况,与患者的临床特征密切相关,且可影响结直肠癌的局部侵袭能力。

老年非小细胞肺癌组织ARPC2表达及与预后关系

肌动蛋白相关蛋白2/3复合物(actin-related protein 2/3 complex, ARPC)参与肌动蛋白核聚和解聚,ARPC可以影响细胞运动能力,肌动蛋白是运动细胞伪足的重要组成部分[1]。ARPC可促进肿瘤细胞侵袭和迁移[2]。ARPC由7个亚基组成:ARP2、ARP3、ARPC1、ARPC2、ARPC3、ARPC4、ARPC5,其中ARPC2和ARPC4形成的C型结构是ARPC的中心[3]。

ARPC5在非小细胞肺癌细胞和组织中的表达及预后意义

目的肌动蛋白相关蛋白2/3复合物5(ARPC5)参与癌细胞侵袭性伪足的形成,促进癌细胞的侵袭和转移。本研究旨在探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合物5(ARPC5)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和组织中的表达特征及其与预后的相关性。方法 RT-PCR法及Western blot法检测ARPC5 m RNA及蛋白在肺癌细胞系A549、SK-MES-1、H460、95D及人正常支气管上皮细胞系HBE中的表达。免疫组化SP法检测ARPC5在133例NSCLC和25例癌旁正常组织中的表达情况,应用Kaplan-Meier曲线和Cox风险回归模型分析其与预后之间的关系。结果 ARPC5在NSCLC细胞系的m RNA及蛋白两个水平上的表达均高于正常支气管上皮细胞系。在133例NSCLC组织标本中,ARPC5阳性表达率67.7%,而在22例癌旁正常肺组织中不表达。ARPC5蛋白的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(<0.01)。单因素生存分析显示ARPC5阴性表达患者5年生存率为57.8%,而阳性患2者为37.5%,差异有统计学意义(χ=8.634,<0.05);但多因素生存分析并未提示其为独立的预后指标。结论ARPC5是一种潜在的癌基因,可能参与肿瘤的转移,其表达影响患者预后但还不能成为判断肺癌预后独立指标。