miR-16a对牛肌卫星细胞增殖和分化的影响

为了探究miR-16a对牛肌卫星细胞增殖和分化的影响,试验通过NCBI和Ensembl数据库分析整合miR-16a的位置及信息,用miR-16a mimics转染牛肌卫星细胞,将牛肌卫星细胞分为试验组(miR-16a mimics)和对照组(NC),采用实时荧光定量PCR扩增、Western-blot检测和EdU细胞增殖试验对转染处理后的牛肌卫星细胞的增殖和分化两个时期进行研究。结果表明:miR-16a位于牛12号染色体的反义链上,并由前体bta-miR-16a的5′端加工生成成熟的miR-16a。在增殖期,与对照组比较,试验组增殖标志因子Pax7 mRNA和其蛋白相对表达量显著或极显著下调(P<0.05或P<0.01),EdU标记指数显著降低(P<0.05)。在分化期,与对照组比较,试验组分化标志因子MyoG mRNA相对表达量极显著下调(P<0.01)。说明miR-16a对牛肌卫星细胞的增殖和分化均存在抑制作用。

电针风池穴对颈肌慢性损伤大鼠肌卫星细胞及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针风池穴对颈肌慢性损伤大鼠肌卫星细胞、生肌决定因子(MyoD)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Toll样受体-4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)及核转录因子(NF-κBp65)蛋白表达的影响,探讨电针促进肌肉慢性损伤修复的可能机制。方法:从45只Wistar大鼠中选取10只作为空白组,将剩余大鼠造模后按照随机数字表法分为模型组、电针组和美洛昔康组,每组10只(5只造模不成功)。采用长时间低头固定并注射高渗盐水的方法复制大鼠颈肌慢性损伤模型。造模3个月后,使用超声诊断仪观察大鼠颈后肌的形态学变化;用肌电生理检测验证模型是否成功。电针组电针双侧风池穴,每次25 min,每日1次,连续治疗10 d为1个疗程,疗程之间间隔2 d,共治疗2个疗程。干预结束后,取各组大鼠颈后肌组织,在电镜下观察颈后肌组织的形态学变化;采用免疫组织化学法检测PCNA、MyoD、TLR4、MyD88及NF-κBp65蛋白的含量。结果:①形态学检测:与空白组相比,模型组的超声诊断结果显示大鼠颈后肌组织不连续,厚度明显变薄;肌电生理检测结果表明模型组肌电波幅及频率较空白组明显衰减;与空白组相比,模型组的肌肉电镜结果显示肌原纤维结构的排列不连续,部分线粒体肿胀,肌纤维和肌节之间有断裂,并有空泡现象存在;与模型组相比,电针组肌原纤维清晰可见,肌丝横断面呈点状分布,肌节和肌浆膜完整,个别线粒体肿胀,其中少量与肌原纤维的断裂处有空泡;美洛昔康组肌原纤维结构偶见不规则,在肌原纤维的断裂处有空泡,出现少量的线粒体肿胀。②免疫组织化学:与空白组相比,模型组中的PCNA、MyoD的表达呈现弱阳性,TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量明显增加(P<0.05);与模型组比较,电针组与美洛昔康组中PCNA和MyoD的蛋白表达量明显增加(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量明显减少(P<0.05)。电针组与美洛昔康组中PCNA、MyoD、TLR4、MyD88、NF-κBp65的蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针风池穴治疗颈肌慢性损伤,其途径可能与促进肌卫星细胞的增殖分化有关,其机制可能通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路来实现。

不同频率电刺激对2型糖尿病大鼠血糖水平及骨骼肌卫星细胞激活的影响

目的:本文旨在探究不同电刺激参数对大鼠机体血糖调控和骨骼肌卫星细胞的激活效果。方法:通过比较不同参数条件的肌肉电刺激对2型糖尿病大鼠的空腹血糖浓度和口服葡萄糖耐量的改善效果,验证肌肉电刺激对2型糖尿病大鼠机体血糖调控的影响以及确定对大鼠血糖调控最有效的电刺激条件。以及对大鼠骨骼肌卫星细胞标志性蛋白Pax7、MyoD和MyoG进行免疫荧光染色,比较不同参数条件的肌肉电刺激对大鼠肌肉卫星细胞激活效果。结果:(1)20 Hz、40 Hz和100 Hz都对2型糖尿病大鼠的空腹血糖浓度和口服葡萄糖耐量具有改善作用,其中40 Hz电刺激改善效果最为明显。(2)100 Hz电刺激对大鼠肌卫星细胞的激活效果最为明显。结论:三种电刺激诱导肌肉自主收缩来控制机体血糖,其中,40 Hz电刺激改善效果最明显;三种刺激均可有效诱导肌卫星细胞的激活,100 Hz电刺激的激活效果最显著。

干扰ACACA基因对猪原代肌卫星细胞增殖和成脂转分化过程的影响

【目的】探究乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-CoA carboxylaseα,ACACA)对猪原代肌肉卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖凋亡以及成脂转分化的影响。【方法】通过体外培养MSCs模拟猪肌内脂肪的形成过程,根据ACACA基因序列构建3条小干扰RNA,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)筛选出干扰效率最高的siRNA进行转染。成功干扰MSCs内ACACA的表达后,分别通过q RT-PCR、CCK-8细胞增殖实验、流式细胞术、油红O染色和检测甘油三酯(TG)等方法对MSCs增殖、凋亡以及转分化时期脂滴形成效果进行评估。【结果】在增殖期干扰ACACA,MSCs内细胞周期标志基因Cyclin D1(P<0.05)、Cyclin E(P<0.0001)以及抗凋亡基因BCL-2(P<0.05)的表达量下调,促凋亡基因BAX(P<0.05)的表达量上调;在对MSCs进行成脂转分化诱导作用下,MSCs具有向脂肪细胞转分化的能力,而干扰ACACA后,MSCs中脂滴极显著减少(P<0.0001)。【结论】干扰ACACA后抑制猪MSCs的增殖,促进其凋亡,并且对成脂转分化时期脂滴的形成具有抑制作用。研究结果为后续研究ACACA对肌内脂肪的影响及猪肉制品调控机制研究提供实验参考和基础数据。

m^(6)A去甲基化酶FTO对猪肌卫星细胞分化的影响

【目的】探究N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)去甲基化酶FTO表达水平对猪肌卫星细胞分化的影响,并比较不同表型猪FTO表达和m^(6)A甲基化修饰水平。【方法】收集分化第0、2和4天的猪肌卫星细胞,用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测FTO和肌球蛋白重链(MyHC)蛋白表达、肌分化因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG)的mRNA表达水平;利用免疫荧光法检测肌卫星细胞分化标志基因MyHC表达情况;采用Dot blotting检测m^(6)A甲基化修饰水平。将过表达载体(OE-FTO)、空白对照(NC)和FTO基因干扰载体(siRNA-FTO)、阴性对照(siRNA-NC)分别转染猪肌卫星细胞并诱导分化,检测FTO、肌细胞分化相关基因表达情况以及m^(6)A甲基化修饰水平,利用免疫荧光法检测MyHC表达以及肌管形成情况;利用Western blotting和Dot blotting分别检测大白猪、宁乡猪不同组织中FTO蛋白表达情况以及m^(6)A甲基化修饰水平。【结果】在猪肌卫星细胞诱导分化过程中,与诱导分化第0天相比,第2和4天时FTO、MyHC蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),FTO、MyoD和MyoG基因mRNA表达水平显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01);第4天时m^(6)A甲基化修饰水平显著下降(P<0.05)。与NC组相比,OE-FTO组FTO蛋白表达量极显著升高(P<0.01),在诱导分化的第0、1和2天,OE-FTO组FTO和MyHC基因mRNA表达水平均极显著升高(P<0.01),MyoD基因mRNA表达水平极显著下降(P<0.01);在诱导分化的第1、2、3和4天,OE-FTO组m^(6)A甲基化修饰水平显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-FTO组FTO蛋白表达水平显著降低(P<0.05),在诱导分化第0、1、2和3天,siRNA-FTO组FTO、MyHC基因mRNA表达水平极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),m^(6)A甲基化修饰水平显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01);在诱导分化第0、2和3天,siRNA-FTO组MyoG基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。大白猪背最长肌中FTO蛋白表达水平显著高于宁乡猪(P<0.05),m^(6)A甲基化修饰水平极显著低于宁乡猪(P<0.01)。【结论】FTO表达对猪肌卫星细胞分化过程有显著影响,m^(6)A甲基化修饰水平与猪肌卫星细胞分化程度呈负相关。干扰FTO会抑制猪肌卫星细胞分化,提高m^(6)A甲基化修饰水平;过表达FTO可以促进猪肌卫星细胞分化,降低m^(6)A甲基化修饰水平。本研究结果为进一步探究FTO在肌肉分化中调控机制提供参考。

去血清饥饿条件下肌卫星细胞增殖及自噬蛋白LC3、Beclin1的表达

背景:自噬可促进低氧环境下肌卫星细胞的存活,然而基于自噬有明显的时效性,不同时间的自噬水平与肌卫星细胞增殖能力间的关系如何未见探讨。目的:探讨不同时间去血清饥饿对大鼠肌卫星细胞增殖能力及自噬微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的变化。方法:原代分离培养雄性SD大鼠(广州中医药大学动物实验中心提供,体质量约120 g)多裂肌卫星细胞,取第3代细胞,培养至对数生长期后,分别设置正常血清组(体积分数10%胎牛血清)、空白血清(仅含培养基,无胎牛血清)6 h组、空白血清12 h组、空白血清24 h组,CCK-8检测各组细胞的增殖情况,并采用Western-blot法和RT-PCR法检测LC3及Beclin1蛋白及基因的表达。结果与结论:(1)细胞增殖能力:空白血清诱导12 h后细胞增殖能力较正常血清组及诱导6 h时下降(P <0.01),诱导24h后细胞增殖能力较诱导12h下降(P<0.05);(2)LC3及Beclin1蛋白及基因的表达:空白血清诱导6 h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白及基因的表达较正常血清组明显升高(P <0.05),诱导12 h及诱导24 h后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达较诱导6 h时明显升高(P <0.01),Beclin1的表达较诱导6 h时升高(P <0.05),LC3及Beclin1基因的表达较6 h均升高(P <0.05);(3)结果证实,去血清饥饿可以诱导肌卫星细胞发生自噬,自噬在去血清早期(12 h内)可保护细胞的增殖能力,12 h后细胞可出现过度自噬,不利于细胞的增殖。

骨骼肌失神经和再神经化时肌卫星细胞的变化

目的探讨骨骼肌失神经和再神经化时肌卫星细胞的变化规律，了解肌肉相应形态功能变化的细胞学机制。方法取1月龄Wistar大鼠27只制成失神经肌萎缩模型，于术后1～6个月，逐月取3只大鼠双侧小腿三头肌行组织学、组织化学等形态学检测；同时于术后1、2、3周和1～6个月逐月各取1只大鼠双侧小腿三头肌行细胞生物学检查。取1月龄Wistar大鼠35只制成神经再生模型，分别于失神经即时、术后1～6个月逐月取5只大鼠行神经植入手术，动态观察电生理指标变化至植入术后8周，然后进行形态学指标检测。结果骨骼肌失神经组显示肌湿重、肌细胞截面积迅速减少，胶原纤维含量逐渐增加，失神经后3～4个月DNA增殖期核所占百分比最高，后迅速减少，肌卫星细胞失神经3周数量开始明显增加，但2个月后急剧下降，至4个月时含量已极低。神经再生组神经植入后4～5周可引出肌诱发动作电位，以萎缩2～3个月后神经植入再生效果好，此时肌卫星细胞的分化能力较强。结论骨骼肌失神经支配4个月后卫星细胞数量极少导致肌肉进入萎缩的不可逆期；当失神经2～3个月时再神经化，增殖能力活跃的肌卫星细胞促使此时的萎缩肌功能恢复较好。

应用Percoll分离纯化组织工程用肌卫星细胞

目的 探讨应用改良Percoll非连续密度梯度离心法分离纯化培养组织工程用肌卫星细胞。方法 分别采用差速贴壁法和Percoll非连续密度梯度离心法进行兔肌卫星细胞的原代培养、光镜及扫描电镜检查细胞形态，通过免疫细胞化学染色方法鉴定培养细胞纯度，噻唑蓝法测定细胞生长曲线。结果 差速贴壁法所得细胞纯度为30％．40％，Percoll非连续密度梯度离心法所得细胞纯度在90％以上，两种方法光镜及电镜检查均符合卫星细胞形态，细胞生长曲线显示细胞生长状况良好。结论 应用Percoll非连续密度梯度离心法可以得到高纯度的肌卫星细胞，可以作为组织工程用种子细胞的培养方法。

运动激活骨骼肌卫星细胞:增龄性肌衰减症及肌肉损伤修复的运动预防和治疗

背景:骨骼肌是维持人体健康的主要组织,其衰减症会影响人们的健康和生活质量。肌卫星细胞是骨骼肌干细胞,受到运动刺激时激活增殖与分化,促进肌肉肥大,延缓肌衰减症的发生。目的:为增龄性肌衰减症、肌肉萎缩及肌肉损伤修复提供运动预防和治疗指导,同时为后续研究提供理论支撑。方法:在知网、PubMed、Web of Science等数据库中,英文以“skeletal muscle,satellite cells,proliferation,differentiation,muscle repair和sarcopenia”为关键词,中文以“运动、肌卫星细胞、增殖与分化”为关键词,检索2010至2020年发表的相关文献,对题目和摘要初步筛选,全文阅读后纳入100篇文献进行综述。结果与结论:①运动激活肌卫星细胞增殖与分化的研究较多,与耐力运动(有氧)相比,抗阻运动效果更显著;②不同的运动形式可激活不同类型肌卫星细胞的增殖与分化,其运动强度、负荷阈值、运动时间和频次等因素均影响卫星细胞激活增殖与分化程度;③运动激活肌卫星细胞增殖与分化信号通路相互作用的研究不足,发现运动可调控肌细胞外基质、氧化应激水平及细胞自噬,改善肌衰减症;④运动激活肌卫星细胞增殖与分化的信号通路如何有效协同促进还需更多深入研究与探索。

当归多糖对小鼠骨骼肌卫星细胞增殖及干细胞因子受体蛋白表达的影响

目的观察在体外造血微环境中,当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖及干细胞因子受体蛋白(c-kit)表达的影响。方法原代培养MSC,5天后采用结蛋白(desmin)免疫细胞化学鉴定;细胞随机分为8组,即空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含100、200、300μg/mLAPS的DMEM/F12培养基实验组及经100、200、300μg/mLAPS干预后骨髓基质细胞条件培养基组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及对细胞进行c-kit免疫细胞化学染色。结果分离培养的MSCs呈desmin染色阳性;MTT法检测发现各条件培养基实验组MSCs增殖显著;c-kit免疫强阳性反应存在于条件培养基培养的各组MSCs中,c-kit主要表达于细胞质。结论经APS干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变MSCs的生长特性,明显促进MSCs增殖及c-kit的表达,c-kit在MSCs增殖过程中可能起某种调节作用。

肌卫星细胞激活和补给的分子调控与肌肉疾病

肌卫星细胞(muscle satellite cell,SC)作为生肌干细胞,参与司控生后骨骼肌的生长、修复和维持等重要过程.综述了NO-HGF,Myostatin,Notch等重要信号分子及卫星细胞自身的特殊微环境对SC激活和补给的分子调控机制,希冀将来可以从这两方面入手克服目前临床中肌卫星细胞移植治疗各种骨骼肌疾病的瓶颈.

当归补血汤干预移植肌卫星细胞受体小鼠造血功能重建的研究

目的观察当归补血汤对移植骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cell,MSC)受体小鼠造血功能重建的影响。方法分离雄性同系小鼠的MSC并培养鉴定。经8Gy137Cs-γ射线照射的雌性昆明种受体鼠随机分为6组:空白对照组、移植MSC组、当归补血汤不同剂量(1、3、5、10倍临床等效剂量灌胃7天)干预的移植雄性MSC4组。观察移植后1、2、3周受体鼠脾集落形成单位(colony forming unit spleen,CFU-S)数、外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)的变化,3周存活率等指标,并采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果培养的MSC呈desmin染色阳性;第2周时移植MSC各组WBC明显升高(P<0.05),给药2、3、4组Hb明显回升(P<0.05);第3周时与移植MSC组比较,给药3、4组WBC及Hb升高明显(P<0.05),给药4组PLT恢复显著(P<0.05)。第2周时与空白对照组比较,给药3、4组CFU-S明显增多(P<0.05),对移植的存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实重建雌性受体鼠造血功能的细胞来自雄性供体。结论当归补血汤干预有助于移植MSC的受体鼠造血功能重建。

当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌卫星细胞增殖及c-kit表达的影响

目的观察当归补血汤对体外造血微环境中小鼠肌卫星细胞增殖及c-kit表达的影响。方法分离培养小鼠卫星细胞并鉴定。制备含有不同剂量当归补血汤的大鼠载药血清及对应剂量的骨髓基质细胞条件培养基。将肌卫星细胞随机分为8组:正常大鼠血清组、当归补血汤载药血清1～3组、正常大鼠血清条件培养基组、条件培养基1～3组,MTT法检测细胞增殖活性,免疫组化法检测细胞c-kit的表达情况,荧光实时定量PCR检测细胞c-kit mRNA的表达。结果培养的肌卫星细胞呈Desmin免疫阳性;与正常大鼠血清组相比,载药血清各组及条件培养基各组细胞增殖显著,载药血清3组、条件培养基各组阳性细胞c-kit蛋白及mRNA表达量有显著性差异,随当归补血汤载药血清浓度增大c-kit表达量增多,条件培养基也呈同样的变化趋势。结论当归补血汤载药血清及含载药血清的条件培养基可促进肌卫星细胞增殖及c-kit的表达。

肌卫星细胞在失重肌萎缩中的可塑性变化及机制

肌卫星细胞在骨骼肌生长发育和出生后骨骼肌损伤修复中起着重要的作用,但是有关肌萎缩中肌卫星细胞的可塑性变化、作用及其机制尚不清楚.本研究采用小鼠尾悬吊模拟失重效应诱导失重肌萎缩,动态分析了失重肌萎缩发生过程中不同类型肌纤维的肌卫星细胞数量和增殖、分化潜能可塑性的改变,发现在失重肌萎缩过程中,处于安静状态的肌卫星细胞显著增多、激活增殖的肌卫星细胞显著减少,而具有成肌分化潜能的肌卫星细胞有持续减少趋势.此外,在失重肌萎缩比目鱼肌单根肌纤维移出的体外培养中,证明了失重肌萎缩肌纤维肌卫星细胞可塑性降低的特征性变化.进一步,通过对比分析Smad3基因敲除及其同窝野生型小鼠,在失重肌萎缩中肌卫星细胞可塑性的差异性变化,揭示了Smad3在调控失重肌萎缩肌卫星细胞可塑性变化中的关键作用.

bFGF植入失神经骨骼肌对肌卫星细胞增殖与肌萎缩影响的实验研究

目的探讨bFGF植入失神经腓肠肌后填补神经营养因子丢失、促进肌卫星细胞增殖、延缓肌萎缩的作用。方法将28只健康雄性Wistar大鼠随机分成实验组和对照组,每组14只。切断大鼠左下肢坐骨神经,制备失神经支配动物模型。实验组于同侧腓肠肌内植入盛有0.1gbFGF的硅胶管,对照组植入盛有生理盐水的硅胶管。术后14d和30d取材行大体观察,电生理检测纤颤电位波幅变化,腓肠肌湿重测量,组织学观察,图像分析仪检测及透射电镜观察。结果术后14d和30d对照组腓肠肌萎缩程度及与周围结缔组织粘连程度均较实验组明显加重。术后14、30d,实验组腓肠肌纤颤电位波幅为(0.2206±0.3010)μm,对照组为(0.1552±0.0503)μm;实验组肌湿重为(2.4757±0.2546)g,对照组为(1.4591±0.6425)g;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。术后14、30d实验组HE染色示腓肠肌内肌卫星细胞核较对照组增多;Mallory三色染色示对照组蓝色结缔组织略多于实验组;PCNA染色示实验组呈阳性反应,棕黄色细胞核略多于对照组;维生素C银染示实验组肌纤维间维生素C浓度和结缔组织增生均低于对照组。透射电镜观察术后30d,对照组肌丝排列紊乱或模糊不清等萎缩改变的肌纤维及肌纤维间的胶原纤维多于实验组。术后30d,实验组肌纤维直径和截面积分别为(66.3686±12.6727)μm和(2096.1129±311.5639)μm2,对照组分别为(55.5040±4.9450)μm和(1418.0680±264.9537)μm2;实验组PCNA阳性肌细胞核数量为(116.200±5.357)个,对照组为(53.000±3.937)个;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF具有促进失神经腓肠肌的肌卫星细胞增殖、延缓肌纤维萎缩和抑制肌纤维向结缔组织增生的作用。

低功率激光对急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞增殖活性的影响

目的:观察低功率激光照射对急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞增殖活性的影响。方法:将采用打击装置造成后下肢肌群顿挫伤的60只大鼠随机分为激光治疗组(30只)和自然愈合组(30只)。激光治疗组采用美国Erchonia EML(ML2)型低功率激光器对损伤局部进行照射,自然愈合组不进行治疗。通过HE染色光镜、透射电镜观察方法分析低功率激光照射对大鼠急性骨骼肌顿挫伤组织学愈合进程的影响;并通过免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)分析低功率激光照射对肌卫星细胞增殖活性的影响。结果:低功率激光照射能加速骨骼肌的再生,促进损伤修复;低功率激光照射对急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞有较强的促增殖作用。结论:低功率激光能增强急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞增殖活性,从而加速骨骼肌的再生,促进损伤修复。

c-Met在骨骼肌损伤组织肌卫星细胞中的表达

目的探讨肝细胞生长因子受体（c-Met）在正常和注射心脏毒素后，致肌损伤的肌肉组织中具有再生能力的肌卫星细胞的表达情况；为进一步研究某些肌肉变性疾病，如进行性肌营养不良（DMD）在发病中的分子机制和治疗肌肉退行性变提供参考依据。方法C57雄性小鼠12只，饲养于独立送排风笼具（IVC Cage）实验室。随机分为6组，1-6组左侧股四头肌局部注射心脏毒素（5μg／只），右侧股四头肌为对照，1-6组分别在注射后1d、4d、1周、2周、4周、6周颈椎脱臼处死小鼠，完整分离出股四头肌。浸入4％甲醛溶液中固定，常规包埋切片染色，与对照C57小鼠股四头肌进行组织学和免疫组织化反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）比较分析（样本量为10），了解c-Met的原位表达情况。结果免疫组织化学和反转录聚合酶链式反应结果显示，正常小鼠股四头肌中c-Met在肌卫星细胞上仅有少量的表达；与对照比较，注射心脏毒素24h后，表达即明显增加并持续到观察终点的第6周，且其表达量在第1周达到高峰且直到观察期间末（第6周），仍高于正常肌肉组织，其差异有统计学意义（P〈0.05）。结论c-Met可能是肌肉损伤修复过程的关键蛋白。

当归补血汤对移植肌卫星细胞γ射线照射小鼠早期造血重建作用的影响

目的观察当归补血汤对移植骨骼肌卫星细胞的受体小鼠早期造血功能重建的影响。方法分离培养雄性同系小鼠的肌卫星细胞并鉴定。经8Gy137Cs-γ射线照射的雌性昆明种受体鼠随机分为6组:空白对照组、移植肌卫星细胞组、当归补血汤不同剂量(1,3,5,10倍灌胃7 d)干预的移植肌卫星细胞4组。观察移植后8周内受体鼠存活率、外周血血常规、脾脏指数、脾形态学的变化,并采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果培养的肌卫星细胞呈desmin染色阳性;当归补血汤各剂量组受体鼠脾脏指数、脾结节数、白细胞数、血小板数、血红蛋白数、8周内存活数均高于空白对照组和移植肌卫星细胞组,特别是给药3组及4组(P<0.05);对移植的存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实重建雌性受体鼠造血功能的细胞来自雄性供体。结论经当归补血汤干预后,肌卫星细胞能使受体鼠早期造血功能得以重建。

猪肌卫星细胞的分离培养及鉴定

目的:建立一种有效的猪肌卫星细胞分离、培养及鉴定体系。方法:取仔猪3只,从三角肌群处切取骨骼肌,分别用链霉蛋白酶、胰酶及胶原酶消化组织。用差速贴壁法纯化肌卫星细胞,并比较3种酶消化所获得的细胞数和细胞的存活率。最后采用Desmin免疫组化和MyoG和MyoD的RT-PCR鉴定肌卫星细胞。结果:链霉蛋白酶消化所得肌卫星细胞数显著高于胰酶和I型胶原酶。3种酶消化所得细胞的存活率都较高,无明显差异。Desmin免疫组化染色法的结果表明,链霉蛋白酶消化所得肌卫星细胞中95%呈阳性反应。RT-PCR也检测到MyoG和MyoD的表达。结论:链霉蛋白酶消化法是一种简便、高效分离猪肌卫星细胞的方法。

钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响

目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制。方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组)。另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组)。各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清。并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化。另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验。结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管。各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量最高,增殖速度也最快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组。(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P<0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P<0.01),明显高于其他各组(P<0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P<0.05)。而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P<0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P<0.01)且明显低于其他各组(P<0.05)。但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异。结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致。(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用。