肌微管素相关蛋白7在小鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用及机制

目的探究肌微管素相关蛋白7(Mtmr7)在小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用及其机制。方法培养小鼠主动脉平滑肌细胞系(MOVAS),用30 ng/ml血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导小鼠VSMCs体外增殖和迁移,采用qRT-PCR和Western blotting分别检测PDGF-BB干预后Mtmr7 mRNA和蛋白表达水平的变化。为探究Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的作用,用Mtmr7基因过表达腺病毒(Ad-Mtmr7)感染VSMCs促使Mtmr7过表达,将MOVAS分为对照组、Ad-Mtmr7组、PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组4组,采用Ki-67细胞免疫荧光染色、CCK-8法检测VSMCs增殖能力,划痕实验检测VSMCs迁移能力,Western blotting检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)下游靶标蛋白水平。用5 mg/L胰岛素(insulin)恢复mTORC1活性,将MOVAS分为PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB组、Ad-Mtmr7+PDGF-BB+insulin组3组,再次检测上述指标,观察Mtmr7对小鼠VSMCs增殖和迁移的影响。构建小鼠颈动脉内皮损伤模型,造模28 d后,Western blotting检测Mtmr7蛋白表达水平变化。随机将小鼠分为4组(n=10):假手术组、假手术+Ad-Mtmr7组、颈动脉内皮损伤组、颈动脉内皮损伤+Ad-Mtmr7组。在小鼠手术后立即用Ad-Mtmr7(5×10^(10)pfu/ml)行颈动脉局部孵育30 min,在造模第7、14、21天行尾静脉注射,以实现体内过表达Mtmr7。造模28 d后,采用HE染色检测各组小鼠颈动脉形态及内膜增生程度。结果与对照组比较,PDGF-BB组Mtmr7 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.001或P<0.05),Ki-67阳性细胞率增高,VSMCs相对数量增多(P<0.01或P<0.001),划痕愈合率增高(P<0.001),p-S6^(Ser235/236)和p-4EBP1^(Thr37/46)蛋白表达水平升高(P<0.05);与PDGF-BB组比较,Ad-Mtmr7+PDGF-BB组Ki-67阳性细胞率降低,VSMCs相对数量减少(P<0.01或P<0.001),划痕愈合率降低(P<0.001),p-S6^(Ser235/236)和p-4EBP1^(Thr37/46)蛋白表达水平降低(P<0.05);与Ad-Mtmr7+PDGF-BB组比较,Ad-Mtmr7+PDGF-BB+insulin组p-S6^(Ser235/236)和p-4EBP1^(Thr37/46)蛋白水平升高(P<0.01),Ki-67阳性细胞率增高,VSMCs相对数量增多(P<0.01或P<0.001),划痕愈合率增高(P<0.01)。与假手术组比较,颈动脉内皮损伤组Mtmr7蛋白表达水平明显降低(P<0.01),颈动脉内膜/中膜面积比值增高(P<0.001);而与颈动脉内皮损伤组比较,过表达Mtmr7后,颈动脉内皮损伤+Ad-Mtmr7组颈动脉内膜/中膜面积比值明显降低(P<0.01)。结论过表达Mtmr7可抑制PDGF-BB诱导的小鼠VSMCs增殖和迁移,从而减轻血管损伤后的内膜增生,其机制与Mtmr7降低mTORC1活性密切相关。