巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化

目的探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。方法将21只小鼠分为7组:对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。结果LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA共标记阳性细胞数较LPS-PF组对应时间点明显减少(P<0.01)。体外实验中,TGF-β1刺激组48 h、96 h后α-SMA、FN、Col1较对应时间点表达量明显增加(P<0.01)。检测体内、体外实验中Smad3、p-Smad3的蛋白表达量,发现LPS-PF组(第7天、第10天)和TGF-β1刺激组(48 h和96 h)均较各自对照(Ctrl)组明显增加(P<0.01)。结论MMT具有促进LPS诱导模型小鼠肺纤维化的作用,其转化过程可能经Smad3调节。

A+肌成纤维细胞中X对肺纤维化的影响及其作用机制研究

目的特发性肺纤维化(IPF)是一种破坏性的间质性肺病。IPF的标志性特征是活化肌成纤维细胞分泌大量的细胞外基质(ECM)蛋白,导致进行性瘢痕形成和机械应力。然而,肌成纤维细胞的细胞起源和命运仍然存在争议,肌成纤细胞感知肺部机械信号的机制尚不清楚。方法A-Cre ERT2;ROSA-mT/mG和ROSA-iDTR小鼠用于细胞谱系追踪和肌成纤维细胞的消融。构建肌成纤维细胞特异性X和Y/Z敲除小鼠,以研究X和Y/Z在博来霉素诱导的肺纤维化中的作用。使用人IPF样本进一步证实A和X在肌成纤维细胞中的相关性。结果A是肌成纤维细胞的可靠和独特的标志物,而损伤后切除A+肌成纤维细胞可以改善肺纤维化。X在A+肌成纤维细胞中高度表达,在A+肌成纤维细胞的机械活化和肺纤维化的发展中起着至关重要的作用。X的条件性缺失通过抑制肌成纤维细胞的活化和增殖而显著抑制肺纤维化。X的缺失导致肌动蛋白组织的破坏和Y/Z核定位的阻止,从而将肌成纤维细胞从增殖状态转变为应激和凋亡状态。此外,肌成纤维细胞特异性Y/Z缺失完全概括了A-Cre ERT2-X-KO小鼠的保护表型。结论本研究证明肺肌成纤维细胞是一种表达A的细胞类型,并且X介导的机械传导对肺肌成纤维细胞的激活至关重要。表达A的细胞是治疗肺纤维化疾病的新选择。

托法替布通过JAK/STAT3通路抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的:研究泛Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂托法替布(tofacitinib)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的作用及机制,为临床治疗结缔组织病相关的间质性肺疾病提供理论依据。方法:(1)体外培养人胚胎肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast 1,HFL-1),设立6个组,分别为DMSO空白对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1联合不同浓度托法替布(0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L)药物干预实验组。采用CCK-8法检测细胞活力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。(2)采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL1)基因及蛋白的表达水平。应用RT-PCR和酶联免疫吸附试验检测各组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和细胞培养上清液中的蛋白水平。(3)在不同组的细胞培养基中加入DMSO载体对照,以1.0μmol/L和5.0μmol/L的托法替布预培养30 min,然后加入TGF-β1处理1 h、6 h和24 h。以Western blotting检测Smad2/3、信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白磷酸化水平。结果:(1)托法替布抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞活力及迁移能力。(2)与空白对照组相比,TGF-β1诱导组HFL-1的α-SMA、COL1A1和FN1基因表达显著上调(P<0.05)。5.0μmol/L托法替布干预组的α-SMA基因表达与TGF-β1诱导组相比显著下调(P<0.05)。0.5~5.0μmol/L托法替布各干预组与TGF-β1诱导组相比均可抑制FN1基因表达(P<0.05)。各干预组与TGF-β1诱导组相比,COL1A1基因的表达无明显变化。(3)Western blotting结果提示,TGF-β1诱导组细胞α-SMA、FN1蛋白水平较对照组显著增加(P<0.05),COL1A1表达未见明显差异。托法替布不同浓度干预组与TGF-β1诱导组相比,α-SMA蛋白表达均有下降,其中2.0μmol/L和5.0μmol/L干预组与诱导组间的差异有统计学意义(P<0.05)。托法替布不同浓度干预组的FN1蛋白水平均有下降,但与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。各干预组的COL1A1蛋白表达与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。(4)TGF-β1诱导48 h,HFL-1细胞中IL-6基因及培养上清液中IL-6的表达水平较对照组显著升高,各浓度托法替布干预组与TGF-β1诱导组相比均有所降低。TGF-β1诱导1 h、6 h和24 h,STAT3蛋白磷酸化水平增加,托法替布预刺激抑制了6 h时Smad2/3的磷酸化水平,在1 h、6 h和24 h时均抑制了STAT3的磷酸化水平。结论:托法替布能抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞向肌成纤维细胞方向转化,其机制可能是通过抑制Smad2/3经典通路以及抑制TGF-β1所诱导的STAT3磷酸化,从而对肺纤维化疾病进展发挥保护作用。

皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的研究进展

典型的皮肤纤维化疾病包括增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、硬皮病等。该类疾病以肌成纤维细胞过度激活和细胞外基质沉积为特征,可导致永久性瘢痕和器官功能损伤,严重影响患者身心健康。肌成纤维细胞在皮肤纤维化疾病中起到了核心作用。目前研究表明,成纤维细胞、内皮细胞、周细胞、巨噬细胞等细胞可在经历促纤维化的介质等多因素的诱导、皮肤纤维化相关信号通路的激活、形态学和生化特征的改变、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等肌成纤维细胞标记物的表达等过程后,转化为肌成纤维细胞。靶向这些细胞转化的过程有望成为调控皮肤纤维化疾病进展的新治疗策略。本文重点围绕皮肤纤维化疾病中肌成纤维细胞来源的相关进展作一综述。

CAR-NK靶向肺动脉高压引起右心室功能障碍中的心脏肌成纤维细胞

目的肺动脉高压(PH)引起的右心室压力过载会激活心肌成纤维细胞促进其增殖和胶原生成,从而造成心肌纤维化和舒张功能障碍。目前缺乏有效治疗右心室纤维化的药物和方法。通过设计一种嵌合抗原受体(CAR)NK细胞,靶向杀伤心脏中激活的成纤维细胞,进而缓解纤维化和改善功能。方法设计功能性CAR结构:包括细胞外结构域(信号肽和Sc Fv识别抗原FAP)、跨膜区和细胞内信号结构域3部分。慢病毒包装后转染NK-92细胞系,构建CAR-NK细胞。构建过表达FAP的H9C2细胞,与CAR-NK细胞共孵育测试其靶向杀伤水平。8周龄C57小鼠尾静脉注射1×10^(6)个聚苯乙烯微球,间隔1天,连续注射2周(共7次)。第14天进行超声心动图和血流动力学检测,取心脏进行马松染色以评估右心室纤维化。结果连续注射2周后,小鼠右心室收缩压维持在50 mm Hg,右心室壁出现间质性纤维化且舒张功能受损。转然后CAR阳性NK细胞比例约为50%,最大效靶比20∶1条件下,具有60%的杀伤率。结论持续的血栓栓塞型肺动脉高压会引起右心室舒张功能障碍和间质纤维化,CAR-NK细胞在体外能有效靶向杀伤表达FAP的肌成纤维细胞。

P2Y2通过调控肌成纤维细胞增殖促进肝脏纤维化

目的研究G蛋白家族受体P2Y2是否通过影响肌成纤维细胞功能从而在肝纤维化中发挥作用。方法通过单细胞测序分析肝纤维化中的肌成纤维细胞中的P2Y2的表达情况,进一步构建Pn-GFP、Pn-DTR、Pn-m Tm G、Pn-P2Y2、Pn-P2Y2-m Tm等转基因小鼠。通过对小鼠进行腹腔注射CCl4或胆总管结扎诱导肝纤维化模型,使用免疫荧光染色、病理切片染色、实时定量荧光PCR、肝脏羟脯氨酸和小鼠血清转氨酶等水平评估纤维化程度。结果通过单细胞测序发现,P2Y2在正常肝脏组织中的肌成纤维细胞几乎不表达,但是在纤维化肝脏组织中的肌成纤维细胞中高表达。通过对Pn-GFP小鼠腹腔注射CCl4,通过免疫荧光染色发现纤维化肝脏组织中被GFP标记的肌成纤维细胞广泛分布。通过对肝纤维化造模的Pn-DTR小鼠腹腔注射白喉毒素,对小鼠体内的肌成纤维细胞进行特异性消融,发现肝纤维化显著减轻。通过对小鼠体内的肌成纤维细胞特异性敲除P2Y2,显著减轻小鼠的肝纤维化程度。通过对Pn-m Tm G和Pn-P2Y2-m Tm G腹腔注射CCl4,敲除P2Y2之后,肝纤维化时,肌成纤维细胞数量明显减少。通过对肝纤维化造模的野生型小鼠腹腔注射P2Y2抑制剂Suramin,抑制剂组小鼠的肝脏纤维化程度明显减轻。结论通过敲除肌成纤维细胞中的P2Y2或者抑制P2Y2,可以改善肝脏纤维化,这提示P2Y2是肝脏纤维化治疗的潜在靶点。

基于巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的肾间质纤维化病理机制及药物干预作用

在肾间质纤维化过程中,骨髓中募集的巨噬细胞可在损伤的肾脏中直接转化为肌成纤维细胞。巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)是肾间质纤维化的重要病理机制之一。在MMT过程中,巨噬细胞的活化受转化生长因子-β1、Janus激酶3/信号转导及转录活化因子6、Wnt等信号通路调控,阻断这些信号通路可抑制MMT,改善肾间质纤维化。在临床及体内外实验中,针对防治肾纤维化的药物干预研究较活跃,其中某些药物的干预作用可能与巨噬细胞及MMT相关。因此,深入研究肾脏MMT的病理机制及药物干预作用可以为相关疾病的治疗提供新思路。

A型肉毒杆菌毒素抑制大鼠牙龈肌成纤维细胞作用的体外研究

研究A型肉毒杆菌毒素(BTXA)对大鼠牙龈肌成纤维细胞的抑制作用,探究控制扭转牙正畸术后复发可能的方法。方法 体外分离、培养大鼠牙龈成纤维细胞,观察TGF-β1+BTXA诱导干预下,牙龈成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的情况,同时分别设置阴性对照组,牙龈FB组;阳性对照组,TGF-β1诱导牙龈肌成纤维细胞组进行对照。TGF-β1和TGF-β1+BTXA两组分别诱导72小时后收样,然后检测Western-blot、RT-PCR、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的免疫组化等相关指标。结果 经过原代培养干预之后但是没有经过诱导处理的大鼠模型其牙龈成纤维细胞α-SMA表达为阴性,提示没有显著的成纤维细胞表达出现。使用TGF-βl进行诱导处理之后,α-SMA表达为阳性,且水平较高,提示成功诱导,同时也表明成纤维细胞会转化为肌成纤维细胞。而后又再次使用BTXA进行干预,α-SMA表达为阳性,但是与TGF-βl诱导组相比的表达量显著更低,提示BTXA干预能够对成纤维细胞会转化为肌成纤维细胞这一过程产生抑制作用。结论 BTXA对能够抑制牙龈当中的肌成纤维细胞功能蛋白α-SMA,减少其功能表达。提示可以采用BTXA抑制肌成纤维细胞的出现和持续表达,从而减少局部牙龈组织的张力,降低扭转牙复发的可能性,但是具体抑制机制还需进一步深入研究。

黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的观察黄芩素(黄芩苷元,baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法体外培养人胚胎肺成纤维细胞(WI-38),TGF-β1诱导后,通过Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)相关蛋白表达的变化,同时采用免疫组化法观察细胞形态变化。TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38成肌成纤维细胞模型,再给予不同剂量的黄芩素,检测转化过程中相关蛋白α-SMA、collagen 1、Smad 2、p-Smad 2的表达变化。结果与模型组相比,黄芩素2 000nmol.L-1～125 nmol.L-1对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有抑制作用。黄芩素组以剂量依赖性下调α-SMA(P<0.01)、collagen 1(P<0.01)、Smad 2(P<0.05)、p-Smad 2(P<0.05)蛋白的表达。结论黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程中有一定的抑制作用,该作用与下调α-SMA,抑制细胞内胶原合成及干预TGF-β/Smads信号通路有关。

新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立

目的肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征。文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外肌FB分化模型的建立。方法分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB,倒置相差显微镜观察原代培养,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导FB向肌FB分化。结果采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB,2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异,但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞,且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA,需经TGF-β1诱导分化为肌FB。随TGF-β1诱导时间的延长,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调。结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB,4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型。

生肌化瘀方及其拆方对大鼠创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的 :探讨生肌化瘀方及其拆方促进创面修复 (呈皮肤修复 )的作用机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照 ,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清 ,运用细胞化学ABC法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果 :生肌方能够提高创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量 ,且均高于模型组 (P <0 0 1) ;化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量 ,且低于模型组 (P <0 0 1) ;生肌化瘀方大、小剂量组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与正常组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 :生肌化瘀方能够促进创面修复 ,其可能的作用机理是通过调节Ⅰ、Ⅲ型胶原的比值来调控Ⅰ。

生肌化瘀方对实验性大鼠创面肉芽组织成纤维细胞形态学的影响

目的 :从细胞组织形态学角度探讨生肌化瘀方促进创面修复呈皮肤修复的机理。方法 :采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞 ,并用乳鼠皮肤成纤维细胞做对照 ,分别加入用血清药理学方法制备的生肌方、化瘀方、生肌化瘀方大、小剂量药物血清。通过HE染色、透视电镜观察成纤维细胞形态学的改变。结果 :生肌方可以促进成纤维细胞的增殖 ,化瘀方能够抑制成纤维细胞的增殖 ,与模型组有显著性差异。生肌化瘀方对成纤维细胞生长具有调节作用 ,即促进其增殖 ,又避免过度增生。结论 :生肌化瘀方通过调控创面肉芽组织成纤维细胞增殖 ,影响Ⅰ、Ⅲ型胶原合成 ,使创面修复达到皮肤修复。

TSLP促进肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道募集

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)与慢性哮喘小鼠气道组织中浸润的肌成纤维细胞的关系。方法:将12只BALB/c小鼠随机分为4组:生理盐水组、屋尘螨(House dust mite,HDM)组、anti-TSLP组、同型对照组。激光共聚焦检测气道组织中出现的肌成纤维细胞。ELISA法检测肺泡灌洗液中TSLP、TGF-β1、IL-25和IL-33的表达水平。结果:拮抗TSLP可显著抑制HDM持续暴露导致的气道结构改变,减少肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道组织募集。Anti-TSLP组小鼠BALF中TSLP、TGF-β1和IL-33蛋白水平也较同型对照组明显降低(P值均<0.05)。结论:TSLP促进肌成纤维细胞向慢性哮喘小鼠气道募集是其参与气道重塑的主要机制之一。

转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制研究

目的:探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞(FB)向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法:将野生型和Smad3基因敲除(KO)型小鼠皮肤FB分为9组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB431542组、野生型FB+SB431542+TGF-β1组、Smad3KOFB组、Smad3KOFB+TGF-β1组、野生型FB+SB203580+TGF-β1组、野生型FB+PD98059+TGF-β1组和野生型FB+SP600125+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞,一部分以单细胞RT-PCR检测α-SMA阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA的表达水平变化。结果:Smad3KO组与SB431542组的α-SMA表达水平和阳性百分比显著升高(Smad3KOFB组vs野生型FB组;野生型FB+SB431542+TGF-β1组vs野生型FB+SB431542组;Smad3KOFB+TGF-β1组vsSmad3KOFB组,P<0.01),而SB203580组和SP600125组中α-SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制(野生型FB+SB203580+TGF-β1组、野生型FB+SP600125+TGF-β1组vs野生型FB+TGF-β1组,P<0.05)。结论:在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,Smad3途径介导抑制作用,而p38/MAPK、JNK/MAPK途径则介导正向调节作用。

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系转分化为肌成纤维细胞

目的研究沙利度胺(THD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转分化和对已分化MF的作用。方法体外培养HFL-F,以TGF-β1(5μg/L)诱导HFL-F向MF转分化,通过碱水解法测定羟脯氨酸含量(HYP),免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,半定量RT-PCR测定α-SMAmRNA和Ⅲ型胶原(COLⅢ)mRNA,观察THD(50μg/L)对HFL-F向MF转分化的过程及已分化MF的影响。结果TGF-β1诱导HFL-F 96 h,诱导分化同时加入THD可抑制HYP含量增高和COLⅢ mRNA表达上调(P<0.05),可抑制α-SMA蛋白表达增加,但对于α-SMA mRNA表达没有影响。TGF-β1诱导HFL-F 96 h后再加入THD可抑制COLⅢ mRNA的表达(P<0.05),但对HYP含量、α-SMA蛋白表达量和α-SMA mRNA表达无明显影响。结论TGF-β1可诱导HFL-F向MF转分化,THD可抑制这一过程中α-SMA蛋白与胶原合成。对TGF-β1诱导下已分化的MF,THD可抑制其COLⅢ mRNA的表达。

肝内肌成纤维细胞的来源及其在肝纤维化中作用的研究

肝脏慢性损伤,包括病毒性肝炎、酗酒、药物作用、代谢性疾病等各种致病因子导致肝内结缔组织异常增生,肝内细胞外基质过度沉淀形成肝纤维化,在此过程中分泌胶原能力更强且具有收缩能力的肌成纤维细胞的大量生成被认为是肝纤维化发生与发展的关键环节。目前对于肝纤维化时肌成纤维细胞来源的认识尚没有完全明了,在肝纤维化发生时肝星状细胞活化为肌成纤维细胞的主要来源;而骨髓间充质干细胞、上皮细胞经上皮间质转化及一些仍具有分化能力的外周血细胞在一定条件下也可转变为肌成纤维细胞并发挥作用。该文就近年来此方面的研究作一综述。

TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。

补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化的机制研究

目的:通过观察补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏TGF-β_1/Smads通路信号分子的表达作用,阐释补阳还五汤调节高血压前期大鼠肾脏肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤的作用。方法:将20只雄性盐抵抗大鼠(dahl salt resistant rat,SS)随机分为正常对照组,中药对照组,20只雄性dahl盐敏感大鼠(dahl salt sensitive rat,DS)随机分为模型组和中药治疗组,每组10只。高盐饲料喂养12 d后,中药对照组和中药治疗组予以补阳还五汤灌胃治疗,每日1次,共治疗5周。治疗结束后取大鼠左肾组织检测TGF-β_1Smad2 Smad7及α-SMA的mRNA表达和P-Smad2蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达升高(P<0.05),Smad7mRNA表达降低(P<0.05),P-Smad2蛋白表达升高(P<0.05);补阳还五汤治疗后,与模型组比较中药治疗组TGF-β_1Smad2和α-SMA的mRNA表达降低(P<0.05);Smad7mRNA表达升高(P<0.05),P-Smad2蛋白表达降低(P<0.05)。结论:补阳还五汤可能是通过调节肾脏TGF-β_1/Smads通路相关信号分子的表达抑制肌成纤维细胞异常转化,延缓肾脏病理损伤。

肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成中的机制

目的 探讨肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成机制中的作用。 方法 对 1998年～ 2 0 0 0年门诊或住院的 13例增生性瘢痕 ,14例瘢痕疙瘩及 7例成熟瘢痕患者的相应组织 ,应用光镜、电镜及免疫组织化学染色 ,进行观察、检测。 结果 增生性瘢痕的超微结构中均可见典型的肌成纤维细胞 ;免疫组织化学染色可见有不同程度表达的肌成纤维细胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微结构和免疫组织化学结果均未见肌成纤维细胞。 结论 肌成纤维细胞的生物学行为可能与增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有关 ,并可用于增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的鉴别。

电针对兔腰肌急性钝挫伤后组织修复与碱性成纤维细胞生长因子/细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的观察电针对兔腰肌急性钝挫伤后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、结蛋白(Desmin)以及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨电针对兔腰肌损伤后组织再生修复影响的可能机制。方法 40只雄性新西兰大耳兔随机分为空白组、模型组、电针委中组、电针局部组,每组10只。采用钝挫伤方法造成兔腰肌损伤模型并对各组动物进行外表观察评分。造模后电针治疗2周,HE染色观察腰肌组织形态改变,免疫组化染色观察腰肌bFGF的表达,Western blotting法检测腰肌Desmin与ERK1/2蛋白表达。结果模型组、电针委中组与电针局部组外表观察评分均明显高于空白组(P<0.01)。组织形态学评分由高到低依次为模型组、电针局部组、电针委中组、空白组(P<0.05),腰肌bFGF的表达依次为电针局部组、电针委中组、模型组、空白组,Desmin的表达为电针局部组=电针委中组、空白组=模型组(P<0.05),ERK1/2的表达为电针局部组=电针委中组、模型组、空白组(P<0.05)。结论电针可能通过上调bFGF/ERK信号通路的表达,促进兔腰肌急性钝挫伤后的组织修复。