Darier病与肌浆内质网钙离子-ATP酶2

Darier病是一种少见的常染色体显性遗传性皮肤病 ,以表皮棘层松解和角化异常为特征。最近 ,应用连锁分析和基因定位的方法 ,已将本病的致病基因定位在 1 2q2 3～q2 4 1上。通过检测此段染色体上的多个基因并进行突变分析 ,探明本病的致病基因可能为ATP2A2 ,编码肌浆 内质网钙离子 -ATP酶 2 ,并在 8个家系和 5个散发患者中发现了 1 3种此基因的突变。表明Darier病是由ATP2A2基因突变引起 ,钙离子信号系统在调节细胞连接和表皮分化中起着重要的作用。

二氢青蒿素结合SERCA2b诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡的机制研究

目的探讨二氢青蒿素(DHA)与肌浆/内质网钙ATP酶(SERCA)的结合位点及其通过线粒体途径诱导人结肠癌HCT-116细胞凋亡的作用机制。方法分别于不同浓度(0,10,20,40μmol/L)DHA环境中培养HCT-116细胞24 h后,用Western blotting检测细胞中SERCA2蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;行Hoechst核染色;用JC-1探针检测细胞线粒体膜电位。通过LeDock分子对接方法,预测DHA与SERCA的结合位点。基于生物膜干涉技术,将合成的Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白和非突变蛋白分别与小分子DHA进行结合检测。结果Western blotting与CCK-8检测结果显示,随着DHA浓度升高,SERCA2蛋白表达水平显著下降,细胞增殖显著降低,并呈剂量相关(P<0.01)。Hoechst核染色显示,DHA诱导了HCT-116细胞核变圆、固缩。JC-1探针检测结果表明,在DHA处理4 h内,线粒体膜电位逐渐降低,其后线粒体膜电位则出现明显降低。分子对接预测提示DHA与Thr316形成氢键相互作用,与Ile315则有疏水相互作用。进一步的生物膜干涉技术提示DHA与SERCA2b非突变蛋白结合信号良好,而与Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白结合信号较差。结论DHA可直接与SERCA2b的Ile315与Thr316位点结合,并通过线粒体途径诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡。

肌浆／内质网Ca^2＋—ATP酶与糖尿病心肌病

肌浆/内质网Ca^2＋-ATP酶（SERCA）是离子泵P型家族中的成员。作为钙泵,可调节钙离子浓度及肌肉兴奋-收缩反应。高血糖以及胰岛素抵抗状态下SERCA的活性下降,许多试验证明SERCA参与了糖尿病心肌病心脏功能的变化（包括心肌收缩和舒张功能）,同时伴随受磷蛋白水平和ryanodine受体水平的改变。对SERCA的研究为应用胰岛素等治疗糖尿病心肌病提供了一个新的治疗思路。

SERCA2表达对哮喘大鼠气道平滑肌细胞分泌IL-8的影响

目的探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)中肌浆/内质网Ca^2+-ATP酶(SERCA2)的表达对IL-8分泌的影响。方法建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘大鼠模型,分离原代ASMCs,分别用qRT-PCR及Western blotting、Fura PE-3/AM和ELISA法检测各组ASMCs中SERCA2表达、细胞内Ca^2+浓度([Ca^2+]i)和IL-8,利用si RNA技术下调SERCA2、毒胡萝卜素(TSG)抑制SERCA2以及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)抑制NF-κB活化,检测不同状态下IL-8的变化。结果与正常组比较,哮喘组SERCA2的表达减少,经缓激肽(BK)刺激的钙瞬变峰值明显下降,需更长时间重新摄取钙使[Ca^2+]i恢复至基线水平,IL-8基础值和经IL-17刺激后的诱导值均增加(P<0.05或0.01)。无论有无IL-17刺激,基因下调组IL-8 m RNA表达和分泌均显著增加(均P<0.01),与哮喘对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。哮喘组IκBα磷酸化和NF-κB p65核转位均较正常组增加(P<0.05或0.01),基因下调组和TSG抑制组的NF-κB p65核转位亦增加(P<0.05或0.01),而使用PDTC后,基因下调组、哮喘对照组和正常对照组在IL-17刺激诱导下的IL-8 m RNA表达和分泌均减少(P<0.05或0.01)。结论哮喘大鼠ASMCs中SERCA2表达减少,导致钙稳态的改变,可能通过增强NF-κB活化来介导IL-8分泌亢进。

rAAV1-SERCA2a转染改善心力衰竭犬心功能及其机制探讨

目的:研究重组1型腺相关病毒(rAAV1)介导的肌浆/内质网Ca2+-ATP酶2a(SERCA2a)基因转移对心力衰竭(HF)犬心功能的作用并探讨其机制。方法:采用快速右心室起搏建立比格犬的HF模型,设对照组、HF组、HF+EGFP组和HF+SERCA2a组(均n=4)。后2组经开胸心肌内注射rAAV1-EGFP或rAAV1-SERCA2a,剂量为1×1012病毒基因组。结果:基因转移30 d后,HF+SERCA2a组超声心动图左室射血分数接近对照组,较HF组明显改善(P<0.05),SERCA2a mRNA较HF组显著提高(P<0.05),SERCA2a蛋白在心肌组织中的表达显著高于HF组(P<0.05),心肌细胞凋亡指数和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达较HF组显著降低(P<0.05)。HF+EGFP组各项观察指标接近HF组。但是,受磷蛋白mRNA的水平没有改变。结论:rAAV1-SERCA2a转染上调HF犬心肌组织SERCA2a的表达,能改善心功能,抑制心室重塑;其机制可能与抑制心肌细胞凋亡、下调MMP-9表达有关。

一站式心脏收缩力调节器联合植入式心律转复除颤器治疗慢性心力衰竭2例

心脏收缩力调节器能增强心肌收缩力,改善心功能,对于不适合心脏再同步化治疗的窄QRS波患者疗效确切,联合植入式心律转复除颤器治疗能有效预防心脏性猝死。该文报道2例一站式心脏收缩力调节器联合植入式心律转复除颤器治疗慢性心力衰竭的案例。2例患者使用优化药物治疗效果均不佳,经评估后进行一站式手术,术后器械正常工作,短期随访显示两患者心功能均得到改善,为一站式手术的有效性及安全性提供了一定参考。

一个毛囊角化症家系的ATP2A2基因突变分析

目的探讨1例毛囊角化症家系的分子发病机制。方法提取该家系3例患者、1名正常成员以及80名正常对照的基因组DNA,结合目标序列捕获和高通量测序从皮肤病相关的基因中筛选出候选突变,应用Sanger测序和家系共分离分析进行验证。通过保守性分析、蛋白质结构及功能预测分析其致病性。结果3例患者ATP2A2基因的第15外显子均存在c.2246G>T(p.G749V)杂合突变,在1名正常成员以及80名正常对照中未发现上述突变。该位点的氨基酸在进化中高度保守,其突变将改变蛋白质的结构和功能。结论ATP2A2 c.2246G>T为该毛囊角化症家系的致病突变,可能通过破坏肌浆/内质网钙离子ATP酶2原有的结构和功能而致病。

毒胡萝卜素抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡

目的探讨毒胡萝卜素对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能的作用机制。方法用不同浓度的毒胡萝卜素处理卵巢癌细胞系OVCAR3和A2780。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内Ca^2+的变化,细胞划痕和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。采用实时荧光定量PCR(qR T-PCR)技术和Western blotting检测相关基因蛋白的表达。结果不同浓度的毒胡萝卜素能够降低卵巢癌细胞系OVCAR3(0.03125~1.0μmol/L)和A2780(0.0625~2.0μmol/L)的细胞活力,且呈剂量依赖性。选取最适浓度进行相关实验,结果显示,毒胡萝卜素能够促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞质内Ca^2+的浓度,降低细胞的迁移及侵袭能力。此外,毒胡萝卜素处理后,肌浆/内质网Ca^2+-ATP酶2、血管内皮生长因子A、B细胞淋巴瘤2、SURVIVIN、B细胞淋巴瘤XL蛋白的表达水平降低,C/EBP同源蛋白表达水平升高。结论毒胡萝卜素可能通过增加细胞内Ca^2+的浓度诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

SERCA2b与胰岛β细胞功能

肌浆（内质）网Ca^2＋ATP酶（SERCAs）是分布于肌浆网或内质网表面重要的Ca^2＋调节蛋白，作为其保守亚型，SERCA2b凭借其独特的结构优势可以保护胰岛β细胞功能，从而在胰岛素正常分泌方面起至关重要的作用。大量研究表明，糖尿病患者体内胰岛8细胞数目明显减少，高糖、炎性因子等因素，通过激活内质网应激降低SERCA2b水平，介导胰岛β细胞损伤和凋亡，此过程可能涉及一氧化氮、AMP活化蛋白激酶（AMPK）、肌醇需求激酶1α（IRE1α）-c-jun氨基末端激酶（JNK）介导的多种信号通路，而提高SERCA2b活性能够逆转损伤，保护胰岛β细胞，改善糖代谢。因此，SERCA2b激动剂也为治疗糖尿病提供了新的方向。