腺相关病毒介导的PLB基因反义RNA对糖尿病大鼠心肌肌浆网Ca^(2+)-ATPase活性的作用

目的:构建磷酸受纳蛋白(PLB)反义RNA腺相关病毒载体(rAAV-asPLB),建立糖尿病(DM)大鼠模型。直接心肌注射rAAV-asPLB,观察其对DM大鼠心肌PLB基因转录和蛋白表达的影响,以及对心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性的作用。方法:利用质粒辅助重组腺相关病毒系统试剂盒构建rAAV-asPLB。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导DM大鼠模型,将实验动物分为4组:正常组、DM组、盐水组和rAAV-asPLB组。盐水或rAAV-asPLB注射后6周,RT-PCR检测心肌PLBmRNA转录;Westernblotting检测PLB蛋白表达水平;检测心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性。结果:(1)成功构建rAAV-asPLB,诱导出DM大鼠模型。(2)DM组和盐水组PLBmRNA水平均高于正常组;rAAV-asPLB组PLBmRNA水平较DM组和盐水组明显降低。(3)DM组和盐水组PLB蛋白水平均高于正常组;rAAV-asPLB组PLB蛋白水平较DM组和盐水组明显降低。(4)肌浆网Ca2+-ATPase活性在DM组和盐水组中较正常组明显降低,而rAAV-asPLB组较DM组和盐水组升高。结论:rAAV-asPLB抑制DM大鼠心肌PLB表达,增强Ca2+-ATPase活性。

富硒绿茶对大鼠非酒精性脂肪肝Ca2+-ATPase活性和表达的影响

目的:研究恩施富硒绿茶对大鼠非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中肝脏肌浆网/内质网Ca2+-ATPase(sarco(endo)plasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA)活性及其表达的影响,探讨富硒绿茶防治NAFLD的可能作用机制。方法:将32只Wistar大鼠分成4组,分别饲喂标准饲料+常规饮水(NC组)、高脂饲料+常规饮水(HC组)、高脂饲料+普通绿茶(TC组)、高脂饲料+富硒绿茶(Se C组)。9周后处死,观察大鼠一般情况,测定肝细胞内Ca2+含量、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、肝脏组织ATPase活性;采用免疫组化染色和Western blotting检测肝脏内总SERCA蛋白表达,观察各指标变化情况。结果:HC组大鼠肝细胞内Ca2+含量明显增高,Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性降低,SERCA蛋白表达降低;富硒绿茶干预后Ca2+含量降低,酶活性升高,表达增加,较普通绿茶效果明显。结论:富硒绿茶对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病具有干预作用,可能是通过降低肝细胞内Ca2+和TNF-α含量而改善肝脏能量代谢障碍,同时提高了SERCA活性,增强其蛋白表达而实现的。

心房颤动病人心房肌浆网Ca2 +-ATPase及IP3-I受体mRNA表达变化的研究（英文）

研究房颤病人肌浆网钙操纵基因 -Ca2 + ATPase(SERCA)、及IP3 I受体 (IP3R1)mRNA表达的改变。方法 38例风心病二尖瓣狭窄接受外科手术者 ,手术时取右心房及右心耳约各约 10 0mg ,通过RT -PCR(逆转录-聚合酶链反应 )技术 ,以GAPDH为内参照 ,测量SERCA及IP3R1mRNA表达水平的变化。结果 房颤者肌浆网IP3R1mRNA较窦性心律者上调 ,而SERCA却下调 ,心房不同部位无差别。结论 房颤病人IP3R1上调 ,SERCA下调 ,说明肌浆网SERCA及IP3R1与房颤的发生或维持有关。

电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌肌浆网钙泵活性及mRNA表达的影响

目的:观察电针内关对缺血再灌注损伤大鼠心肌SERCA活性及其基因表达的影响,并以神门穴、合谷穴作对比研究。方法:实验分为假手术组、心肌缺血再灌注模型组(模型组)、电针内关组、电针神门组、电针合谷组,用无机磷比色法测定SERCA活性、RT-PCR法分析SERCA基因表达。结果:与假手术组比,模型组SERCA活性及其基因表达均有非常显著性差异(P<0.01),电针内关组、电针神门组与模型组比较差异有显著性(P<0.05,P<0.01),电针内关组优于电针神门组(P<0.05,P<0.01)。结论:电针内关上调心肌SERCA基因表达,增强SERCA活性是实现对再灌注损伤心肌组织保护作用的途径之一。电针内关与电针神门两组疗效差异说明经穴对靶器官机制调节作用与经脉(穴)脏腑间的特异联系密不可分。

静力负荷对大鼠骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响

目的:了解静力负荷作用下对骨骼肌线粒体及肌浆网功能的影响。方法:选择16只健康雄性Wistar大鼠,随机分为对照组、负荷组,每组8只。将大鼠麻醉后游离其左下肢比目鱼肌远端,负荷组施加100 g负荷,持续时间为90 min。在4℃条件下,9 000 r/min离心20 min分离比目鱼肌线粒体;40 000 r/min离心15 min,分离肌浆网,分别检测骨骼肌线粒体及肌浆网Ca2+浓度、Ca2+-ATPase活性和丙二醛(malondialchehyche,MDA)水平。结果:负荷组与对照组比较,线粒体Ca2+浓度增加111.11%,Ca2+-ATPase活力下降25.88%,MDA含量增加188.57%,差异均有显著性(P<0.01);肌浆网Ca2+浓度下降75.89%,Ca2+-ATPase活力下降61.49%,MDA含量增加122.86%,差异均有显著性(P<0.01);结论:静力负荷可致大鼠骨骼肌线粒体钙超载和肌浆网摄钙能力下降,肌浆网、线粒体膜Ca2+-ATPase活力下降、MDA增多。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对缺血再灌注心肌细胞肌浆网钙泵的保护作用

目的：心肌肌浆网Ca2＋-ATPase酶（SERCA）（在心肌细胞中含量丰富，心肌舒张时大多数钙离子的转移由SERCA完成，SERCA在心肌钙稳态的调节中发挥重要作用。

绞股蓝总皂苷对阿霉素致心力衰竭大鼠心功能的影响

目的观察绞股蓝总皂苷(GP)对阿霉素(ADR)致心衰大鼠心肌ATPase活性和肌浆网Ca2+-ATPase(SERCA2a)的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组,正常对照组(NC),阿霉素组(ADR),绞股蓝总皂苷低、中、高剂量组(L-GP,MPGP and H-GP)。大鼠腹腔注射ADR2.5 mg·kg-1·d-1,隔日1次,共6次,复制心衰模型。绞股蓝总皂苷低、中、高剂量组分别给予绞股蓝总皂苷50、100和200 mg·kg-1·d-1灌胃。第7周末,采集大鼠心室内压,分析心功能;电镜观察心肌组织超微结构变化,同时测定心肌组织ATPase活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)和SERCA2a活性;RT-PCR检测心肌SERCA2a mRNA表达。结果 (1)与NC组相比,ADR组大鼠LVSP和±dP/dtmax均明显下降,LVEDP上抬(P<0.05或P<0.01),心肌ATPase活性和SDH活性显著下降(P<0.01);SERCA2a活性和SERCA2a mRNA表达水平显著下降(P<0.01);电镜显示心肌细胞变性坏死;(2)与ADR组比较,给予中、高剂量GP后大鼠心功能均有改善,电镜下心肌细胞变性坏死程度及心肌细胞超微结构形态改变显著减轻,心肌ATPase活性、SDH活性和SERCA2a活性明显升高,SERCA2a mRNA表达水平增加(P<0.05或P<0.01)。结论绞股蓝总皂苷改善阿霉素致心衰大鼠心肌功能,其机制可能与升高心肌组织ATPase活性、SERCA2a活性有关。

SERCA2a基因治疗慢性心力衰竭的研究进展

慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是心血管疾病的主要原因之一,也是65岁以上老年人住院的主要原因,据估计,目前全世界每年治疗心力衰竭的医疗费用将近千亿美元,因此找到可以延缓和逆转CHF进展的治疗方法是临床研究方向之一。心力衰竭过程中心肌Ca^2+的调节出现严重异常,是导致心力衰竭的一个非常重要的病理原因,也是CHF的一个重要特征。正常心肌细胞内Ca^2+的浓度受到严格调控,可有效控制心肌收缩和舒张功能。在调控心肌细胞内Ca^2+信号的调控网络的许多细胞表面蛋白和胞内细胞器中,肌浆网/内质网Ca^2+-ATP酶-2a(sarco/endoplasmic reticulum Ca^2+-ATPase type 2a,SERCA2a)在心肌Ca^2+调控中起着十分重要的作用。SERCA2a可以将胞浆中的Ca^2+摄入到肌浆网中,使胞浆中Ca^2+水平下降,使肌动蛋白-肌球蛋白解偶联,从而实现心室舒张。越来越多的证据表明SERCA2a在CHF中的表达下调,进而导致严重的收缩和舒张功能障碍。因此,恢复SERCA2a的表达,改善和恢复心肌细胞对Ca^2+的调控能力,为目前研究治疗CHF提供一种很好的选择。随着科技的进步,安全有效的基因传递技术的进步已经让SERCA2a基因治疗作为CHF患者潜在的选择之一。因此,现对SERCA2a基因治疗进行综述,从最开始的质粒模型和动物模型,到后来在CHF患者中的临床试验进展,为临床研究提供参考。

维拉帕米对静态负荷骨骼肌肌浆网功能的影响

为观察维拉帕米对静态负荷骨骼肌损伤的干预效果,选取雄性Wistar大鼠24只,随机分为对照组、负荷组、干预组,每组8只。大鼠经腹腔注射苯巴比妥钠麻醉,剥离其左下肢比目鱼肌,对照组不施加负荷,负荷组和干预组游离远端后施加100 g砝码,持续1.5 h。干预组在实验前0.5h,左下肢肌注维拉帕米。检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量及骨骼肌肌浆网Ca2+浓度、Ca2+-Mg2+-ATPase活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量变化。结果显示,血清CK含量负荷组与对照组比较显著增加(P<0.01);肌浆网Ca2+浓度、Ca2+-Mg2+-ATPase活力干预组与负荷组比较显著增加(P<0.05,P<0.01);肌浆网MDA含量干预组与负荷组比较显著下降(P<0.05);血清LDH含量负荷组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。提示长时间静态负荷作用于骨骼肌,可导致骨骼肌损伤,维拉帕米可减轻肌浆网Ca2+摄入障碍及氧化损伤。