心肌肌浆网钙转运蛋白结构、功能调节及基因表达

本文简要综述了心肌肌浆网的结构和功能 ,重点综述钙转运蛋白的结构。

糖尿病减弱心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷酶的小泛素样修饰

目的:探索糖尿病是否可以通过心肌组织肌浆网钙转运三磷酸腺苷(ATP)酶(SERCA2a)的小泛素样修饰进而影响SERCA2a的活性与表达。方法:采用小动物超声和左心室压力测定评价2型糖尿病大鼠(糖尿病组)和对照大鼠(对照组)心肌收缩和舒张功能;比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a的表达情况,用免疫共沉淀方法以及小泛素样修饰试剂盒比较糖尿病组大鼠和对照组大鼠心肌组织内SERCA2a小泛素样修饰程度。结果:和对照组大鼠比较:糖尿病组大鼠心肌收缩、舒张功能均下降,尤以舒张功能下降更为明显;糖尿病组大鼠心肌组织内SERCA2a蛋白水平、基因表达和小泛素样修饰程度均下降;小泛素样修饰E2(Ubc9)的蛋白水平在糖尿病大鼠心肌中也下降,而小泛素样蛋白1(SUMO1)和小泛素样修饰E1(SAE1和SAE2组成的二聚体)蛋白水平无明显变化。结论:SERCA2a小泛素样修饰程度和Ubc9蛋白水平在糖尿病心肌组织中下降,提示SERCA2a小泛素样修饰和Ubc9与糖尿病的心肌损伤密切相关。

肌浆网钙转运ATP酶和受磷蛋白在大鼠心肌梗死后的表达变化

目的建立大鼠急性心肌梗死模型,观察心肌梗死后心室重塑过程中肌浆网钙转运ATP酶(Ca-2+ATPase,SERCA)和受磷蛋白(PLB)的表达变化。方法雄性SD大鼠,应用前降支动脉结扎法建立大鼠心肌梗死模型,术后4周观察血流动力学参数,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达。结果大鼠心肌梗死后4周,心肌梗死组左心室舒张末压(LVEDP)显著大于假手术组,左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)显著低于假手术组。心肌梗死组心肌组织中SERCA mRNA表达下调,PLB mRNA表达上调。结论大鼠心肌梗死4周后心室收缩和舒张功能已降低,进入了心力衰竭阶段,SERCA mRNA和PLB mRNA的表达变化与心力衰竭的发生发展相关,可能是心肌梗死后心肌收缩和舒张功能失调的重要机制。

坎离颗粒对心衰大鼠膈肌张力及细胞肌浆网钙转运的影响

目的:探讨中药坎离颗粒对腹主动脉缩窄致慢性心衰大鼠膈肌细胞肌浆网钙转运及膈肌张力的影响。方法:采用腹主动脉缩窄法制备Wistar大鼠左室舒张功能不全模型。分为假手术组、模型组、坎离颗粒组、培哚普利组。坎离颗粒组、培哚普利组分别于造模后1周予坎离颗粒和培哚普利,其余两组予双蒸水,共干预32周。干预结束后处死各组大鼠并取膈肌,离体状态下测定大鼠膈肌抗疲劳能力及张力恢复程度,Fura-2法检测各组大鼠膈肌细胞肌浆网钙摄取和释放功能,定磷法测定肌浆网钙泵(SERCA2a)的活性。结果:1腹主动脉缩窄32周心衰大鼠的膈肌抗疲劳能力下降、张力恢复程度降低;2受损膈肌细胞肌浆网(SR)Ca2+-ATP酶活性下降,钙摄取速率降低,钙释放速率有下降趋势;3以中药验方坎离颗粒干预,可显著增加膈肌抗疲劳能力和张力恢复程度,提高膈肌细胞SR的Ca2+-ATP酶活性,增加SR钙摄取速率。结论:腹主动脉缩窄所致舒张性心衰大鼠存在骨骼肌张力减退,可能与肌细胞SR的Ca2+-ATP酶活性减弱所致SR钙转运障碍有关;坎离颗粒干预可逆转这种病理改变。

liguzinediol基于肌浆网钙泵促进钙释放发挥正性肌力作用

目的研究liguzinediol(LZDO)正性肌力动力学特点及其作用机制。方法 1大鼠在体实验,经左侧颈外静脉缓慢推注LZDO 20 mg·kg-1,连续记录30 min左心室压力-容积环。2采用大鼠离体心脏,分别灌流咖啡因0.5 mmol·L-1以及咖啡因0.5 mmol·L-1+LZDO 100μmol·L-1,记录其左心室收缩力。3心肌细胞钙释放实验,分别灌流毒胡萝卜素2μmol·L-1以及毒胡萝卜素2μmol·L-1+LZDO 100μmol·L-1,记录其肌浆网钙释放。4采用灌流后的心脏,分离肌浆网膜蛋白之后,测定LZDO(1,10和100μmol·L-1)对肌浆网钙转运ATP酶(SERCA2a)活性作用。结果 1除心率及舒张末期容积外,LZDO 20 mg·kg-1显著减少收缩末期容积,显著增加收缩末期压力、每搏输出量、射血分数、心输出量、左室压力最大上升速率及搏出功(P<0.05)。2咖啡因0.5 mmol·L-1灌流5 min,大鼠离体心脏心率、左心室发展压及左心室内压最大上升速率增加,灌流30 min后各指标均降低。而LZDO 100μmol·L-1则能对抗咖啡因0.5 mmol·L-130 min的这种降低作用(P<0.05)。3毒胡萝卜素2μmol·L-1显著降低心肌细胞钙释放,从标准化的正常灌流液组(100±5)%降低到(51±5)%(P<0.05),而LZDO 100μmol·L-1未能对抗毒胡萝卜素的作用〔(49±4)%〕。4 LZDO(10和100μmol·L-1)显著增加心肌肌浆网钙泵活性,从正常灌流液组0.98±0.10分别增加到1.17±0.20及(1.43±0.09)μmol Pi·g-1·h-1,呈现浓度依赖性(r=0.85,P<0.05)。结论 LZDO通过增加钙泵活性提高肌浆网钙浓度梯度,从而间接增加钙释放而发挥正性肌力作用。基于其作用机制,LZDO有可能被开发为临床上使用的正性肌力药物。

肌浆网钙ATP酶过表达对心房颤动兔心房及L型钙通道a1c蛋白表达的影响

目的探讨心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达,对兔急性心房颤动(AF)的心房肌L型电压依赖钙通道蛋白alc亚单位(LVDCCalc)表达的影响。方法 48只成年新西兰兔,随机分成为房颤组(AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+EGFP+AF组,n=12)、9-型腺相关病毒+肌浆网钙ATP酶2a+增强型绿色荧光蛋白组+房颤组(rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,n=12),并设假手术组作为对照(Control组,n=12)。rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组起搏前30 d开胸心包腔内注射包含报告基因的rAAV9-EGFP和包含靶基因的rAAV9-SERCA2a-EGFP各500μL(1×1012v.g/μL)。转染30 d后,AF组、rAAV9+EGFP+AF组和rAAV9+SERCA2a+EGFP+AF组,以600 BPM刺激频率,持续起搏兔右心房24h制作AF模型。处死各组动物,倒置荧光显微镜下观察右心房肌组织EGFP表达情况,行HE染色对右心房组织形态检查,应用免疫组化技述检测SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白在心房肌中的表达情况。结果 rAAV9+EGFP+SERCA2a+AF组SERCA2a蛋白及LVDCCalc蛋白表达量显著高于AF组和rAAV9+EGFP+AF组(P<0.05),但与对照组比较差异无显著性。结论心房肌转SERCA2a基因,显著减少了急性房颤心房肌的LVDCCa1c蛋白表达的降低,有逆转急性AF电重构的作用。

肌浆网钙ATP酶过表达对急性心房颤动兔心房有效不应期的影响

目的探讨肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因过表达对急性心房颤动(AF)兔心房有效不应期(AERP)的影响。方法 40只成年健康新西兰大白兔随机分4组:正常对照组(control组,n=8)、房颤组(AF组,n=8)、绿色荧光蛋白+房颤组(EGFP+AF组,n=12)、肌浆网ATP酶2a+绿色荧光蛋白+房颤组(SER-CA2a+EGFP+AF组,n=12)。control组仅植入电极不起搏;AF组、EGFP+AF组和EGFP+SERCA2a+AF组采用快速心房起搏(频率600次/min)制作急性AF模型,后两组起搏前30d分别向心包腔内注射携带EGFP和SERCA2a+EGFP基因的rAAV载体。转染30d,荧光显微镜下观察心肌组织绿色荧光表达情况,观察起搏0、4、8、12、24hAERP的变化。结果 EGFP+AF组兔心肌冰冻切片在荧光显微镜下可见弥漫绿色荧光,起搏4h后AF组和EGFP+AF组AERP较control组显著缩短(P<0.05),随起搏时间延长呈进行性加重,AERP在AF组和EGFP+AF组间无明显差异(P>0.05),SERCA2a+EGFP+AF组自起搏12h后AERP较AF组和EGFP+AF组缩短程度减轻(P<0.05)。结论以rAAV9为载体介导SERCA2a基因转导可有效逆转快速心房起搏兔心房肌的电重构,是一种潜在的治疗AF的方法。

亚硝酰氢对心力衰竭大鼠心脏功能及肌浆网钙泵蛋白表达的影响

目的 探讨亚硝酰氢对心肌梗死后心力衰竭大鼠心脏功能及肌浆网钙泵（SERCA）蛋白表达水平的影响。方法 选取8只Wistar雄性大鼠作为假手术组，8只作为模型对照组、8只作为亚硝酰氢组。模型对照组和亚硝酰氢组制作心肌梗死后心力衰竭模型，模型制作成功后模型对照组大鼠皮下注射0.9%氯化钠注射液2 ml，亚硝酰氢组皮下注射Angeli′s salt（一种经典的亚硝酰氢供体）0.1 mg/100 g；每天给药1次，均连续给药4周；假手术组不给予药物处理。于用药前后检测左心室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期内径（LVDD）、左心室收缩末期内径（LVSD）及血清N末端脑钠肽原（NT-proBNP）水平；检测大鼠左心室非梗死区组织SERCA蛋白表达水平。结果 用药前及用药4周后，模型对照组和亚硝酰氢组LVEF明显低于假手术组，LVDD、LVSD、心率、NT-proBNP明显高于假手术组［用药前：（43±4）%、（43±4）%比（69±6）%，（8.1±0.8）、（8.0±0.6）mm比（6.8±0.6）mm，（4.57±0.51）、（4.55±0.51）mm比（2.13±0.27）mm，（450±39）、（458±35）次/min比（402±20）次/min，（4.64±0.50）、（4.58±0.48）mg/L比（0.39±0.03）mg/L；用药后：（42±5）%、（51±7）%比（68±6）%，（8.1±0.5）、（7.5±0.5）mm比（7.0±0.6）mm，（4.69±0.19）、（3.76±0.31）mm比（2.23±0.41）mm，（453±31）、（425±27）次/min比（402±20）次/min，（4.86±0.51）、（1.79±0.10）mg/L比（0.39±0.03）mg/L］（P〈0.05或P〈0.01）；用药4周后，亚硝酰氢组LVEF明显高于模型对照组，LVDD、LVSD、心率、NT-proBNP明显低于模型对照组（P〈0.05或P〈0.01）。用药4周后，模型对照组和亚硝酰氢组SERCA蛋白表达明显低于假手术组［（0.110±0.009）、（0.320±0.045）比（0.618±0.062）］；亚硝酰氢组SERCA蛋白表达明显高于模型对照组（均P〈0.01）。结论 亚硝酰氢能改善心力衰竭大鼠的心脏功能，其机制可能与上调大鼠心肌细胞中SERCA蛋白表达有关。

镍钛合金丝对大鼠心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体的影响

背景:虽然镍钛合金封堵器置入治疗先天性心脏病具有较好的临床效果,但后期发生心律失常并发症的概率较大。目的:观察镍钛合金对大鼠心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体表达的影响。方法:取30只SD大鼠,随机均分为2组,实验组于心尖部植入镍钛合金丝,对照组不做任何处理特殊处理,术后1,3,6个月取材,采用RT-PCR检测心肌细胞肌浆网钙泵与雷尼丁受体基因的表达,采用免疫组化检测心肌细胞肌浆网钙泵及雷尼丁受体蛋白的表达,采用苏木精-伊红染色检测炎症反应情况。结果与结论:实验组镍钛合金植入大鼠心肌后,炎症细胞浸润,引发炎症反应,伴纤维组织增生,随着植入时间延长,炎症反应逐渐消失;对照组未见炎细胞浸润。两组术后不同时间点的心肌细胞肌浆网钙泵、雷尼丁受体基因表达比较差异无显著性意义,相应的蛋白表达比较差异也无显著性意义。表明镍钛合金丝不影响心肌细胞肌浆网钙泵、雷尼丁受体的表达,提示镍钛合金封堵器相关心律失常可能与肌浆网钙泵、雷尼丁受体蛋白表达异常机制关系不大。

肌浆网钙离子三磷酸腺苷酶的翻译后修饰在射血分数保留的心力衰竭中的研究进展

射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)是危害人们生活质量的心血管疾病之一,占心力衰竭患者的一半,其发生发展与性别、年龄、慢性肾病、糖尿病、高血压以及肥胖等联系紧密[1-4]。HFpEF的关键特点是左心室舒张功能受损,包含主动舒张延长和被动充盈受限。心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)由跨膜螺旋蛋白(M1~10)、核苷酸结合结构域、磷酸化结构域、致动器结构域和管腔环组成,通过调控舒张期细胞质内的Ca2+浓度,进而在心室舒张功能中扮演着重要作用。翻译后修饰影响SERCA2a的功能和活性。本综述总结了SERCA2a的翻译后修饰在心室舒张功能中的病理生理功能,以及其调控机制和潜在的靶点药物。

ATP2A2通过钙离子浓度变化参与肿瘤发生机制的研究进展

ATP2A2是ATP2As基因家族的成员,编码肌浆(内质)网钙转运ATP酶中的一种,即SERCA2b。由于该酶的主要功能为将钙离子从胞质转运至肌浆(内质)网内,因而它在控制肿瘤生长、分化、血管生成、转移和凋亡的钙离子相关信号通路中发挥着重要作用。近期研究已在一些类型的肿瘤中明确了ATP2A2表达水平的具体变化,在探究ATP2A2是如何参与肿瘤形成以及它是否可作为肿瘤标记物和治疗靶点方面迈出了第一步。本文对ATP2A2参与肿瘤发生的可能机制的相关研究进行了总结,认为其表达异常可引起细胞胞质内和内质网间钙离子稳态的破坏,从而造成细胞的恶性增殖并促进肿瘤的迁移和血管形成等。本文还对该基因的研究和应用前景进行了展望。

腺相关病毒介导心肌肌浆网三磷酸腺苷酶基因治疗心力衰竭犬的安全性分析

目的研究心肌注射重组腺相关病毒(rAAV)_(2/1)介导心肌肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(SERCA2a)基因治疗慢性心力衰竭犬的安全性。方法选取成年比格犬8只,随机分为对照组和SERCA2a基因转导组(转导组),每组4只。分别采用PCR、RT PCR和Western blot法从DNA、RNA和蛋白水平检测rAAV_(2/1)SERCA2a转导后在犬体内的分布;采用双夹心ELISA法检测转导组犬的血清。结果除注射rAAV_(2/1)的心肌区域外,未注射rAAV_(2/1)的心肌区域、主要脏器、骨骼肌和性腺中均未检测到rAAV_(2/1)-SERCA2a。对照组与转导组犬心肌、腰大肌、咀嚼肌和睾丸表现出相同的SERCA2a蛋白表达谱,未在其他组织中检测到。转导组犬血清内未检测到抗rAAV_(2/1)抗体。结论 rAAV_(2/1)介导的基因转导是相对安全的,未整合到心脏以外的其他组织,也未在犬体内引发体液免疫。

基于钙超载探讨自主神经调控对HFpEF大鼠心肌结构重塑、电重塑及纤维化的影响

目的 探究自主神经调控对大鼠射血分数保留心力衰竭(HFpEF)模型结构重塑、电重塑及纤维化的影响。方法 SPF级12周龄SD大鼠44只,抽取10只作为对照组,余34只用于建立HFpEF模型。通过腹主动脉-下腔静脉瘘结扎的方式构建HFpEF模型。其中30只建模成功,4只死亡。建模成功的大鼠分为模型组、自主神经调控组(调控组)及自主神经调控+乙酰胆碱M2受体拮抗剂组(调控+拮抗组),每组10只。调控组在模型组基础上经皮耳缘迷走神经刺激。调控+拮抗组在调控组基础上每天经尾静脉注射美索曲明(0.5 mg/kg)。通过心脏超声仪测量心脏舒张末期左心室后壁厚度(LVPWD-D)、舒张末期室间隔厚度(IVS-D)及二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A)。心脏电生理刺激仪获取心脏的有效不应期(ERP)、单向动作电位时程(MAPD)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B型尿钠肽前体(NT-proBNP)水平。HE染色观察心肌细胞排列及炎性细胞浸润情况。Masson染色观察心肌纤维化程度。RT-PCR和Western blot检测心肌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)及其调节蛋白受磷蛋白(PLB)mRNA及蛋白的表达。结果 HE染色可见模型组心肌细胞排列紊乱,细胞间隙不够明显,伴有炎性细胞浸润。Masson染色可见模型组心肌纤维排列紊乱,大量胶原纤维生成。调控组上述病理改变与模型组比较均明显减轻,而调控+拮抗组与模型组相比无明显改善。与对照组比较,模型组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均升高,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组比较,调控组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均降低,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。而调控+拮抗剂组上述指标与模型组比较差异无统计学意义。结论自主神经调控可能通过钙超载途径减轻HFpEF大鼠的结构重塑、电重塑以及心肌纤维化状态,改善HFpEF预后。

白细胞介素17对大鼠高血压心力衰竭的影响及其机制分析

目的 基于核转录因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)/肌浆网钙三磷酸腺苷酶2(sarco-endoplasmic reticulum adenosine triphosphatease 2S,SERCA2)信号通路探讨白细胞介素(interleukin, IL)17对大鼠高血压心力衰竭的影响及机制。方法 选择6~8周的SPF级雄性自发性高血压大鼠30只,分为对照组、模型组、磷酸缓冲盐(phosphate buffer salt, PBS)溶液注射组(PBS组)、IL-17蛋白注射组(IL-17组)和抗体IL-17注射组(IL-17+IgG组),每组6只,PBS组、IL-17组和IL-17+IgG组大鼠建立高血压心力衰竭模型,分别腹腔注射PBS、IL-17和特异性抗体(IL-17、IgG),检测IL-17、NF-κB、SERCA2水平。结果 与对照组比较,模型组和PBS组大鼠血清N末端B型钠尿肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)、IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显升高,血管内皮生长因子(vascularendothlialgrowthfactor, VEGF),SERCA2蛋白明显降低(P<0.01)。与模型组比较,IL-17组血清NT-proBNP、IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显升高,VEGF,SERCA2蛋白水平明显降低(P<0.01)。IL-17+IgG组血清IL-17和心脏组织NF-κB蛋白水平明显低于模型组,差异有统计学意义(8.98±1.20 vs 11.19±1.22,0.88±0.03 vs 0.93±0.03,P<0.01)。IL-17+IgG组血清NT-proBNP,IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显低于IL-17组,VEGF、SERCA2蛋白水平明显高于IL-17组,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17+IgG组大鼠心率、收缩压、舒张末期室间隔厚度、左心室舒张末期后壁厚度、左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径明显低于模型组和IL-17组,左心室短轴缩短率明显高于模型组和IL-17组(P<0.01)。IL-17+IgG组大鼠左心室射血分数明显高于IL-17组[(70.81±6.50)%vs(62.77±5.43)%,P<0.01]。结论 IL-17、NF-κB、SERCA2信号通路参与调节高血压心力衰竭后的炎性反应,且抑制IL-17后可有效改善高血压心力衰竭造成的心功能损伤。

肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶干扰慢病毒表达载体构建及稳定转染PC 12细胞株的建立

目的构建肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶(SERCA)基因的干扰慢病毒表达载体,建立稳定转染的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC 12)细胞系。方法人工设计、合成针对SERCA基因干扰序列,退火后连接到PGLV3干扰载体上,与p Gag/Pol、pRev、p VSV-G共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染PC 12细胞,建立稳定细胞株;应用RT-PCR和Western blot技术检测PC 12稳定细胞中SERCA基因和蛋白表达情况,并与对照组进行比较。结果成功构建了针对SERCA基因的RNAi慢病毒表达载体,病毒滴度为3×108U·m L-1;建立稳定转染的PC 12细胞株。有效干扰验证显示,sh SERCA能明显降低SERCA的mRNA及蛋白水平(P<0.01)。结论成功构建SERCA基因的sh SERCA慢病毒表达载体,建立稳定干扰SERCA表达的PC 12细胞株。

姜黄素对心力衰竭兔肌浆网钙泵表达的影响

目的探讨姜黄素对心力衰竭（心衰）兔肌浆网钙泵表达的影响。方法采用主动脉瓣反流联合腹主动脉缩窄制作慢性心衰家兔模型。随机分为心衰姜黄素组、心衰安慰剂组、对照姜黄素组、对照安慰剂组。8周后计算心脏重量与体重比值，观察超微结构，检测肌浆网钙泵mRNA和蛋白的表达水平及活性。结果心衰姜黄素组和心衰安慰剂组心脏重量与体重比值均大于对照组（P〈0．05）；且心衰姜黄素组比值小于心衰安慰剂组（P〈0．05）。电子显微镜显示心衰姜黄素组的心脏超微结构有所改善。心衰姜黄素组和心衰安慰剂组肌浆网钙泵mRNA、蛋白表达及活性均小于对照组（P〈0．05），但心衰姜黄素组均显著高于心衰安慰剂组（P〈0．05）。结论姜黄素能在mRNA水平和蛋白水平提高心衰家兔肌浆网钙泵的表达，提高肌浆网钙泵的活性，这可能是姜黄素改善心衰的机制之一。

过表达肌浆网钙ATP酶对心肌细胞内质网应激的影响

目的研究过表达肌浆网钙ATP酶2a（SERCA2a）对心肌细胞内质网应激的影响。方法构建含SERCA2a cDNA的重组腺病毒载体（Adv—SERCA2a），以缺氧和衣霉素诱导内质网应激，随机将体外培养的心肌细胞分为以下6组：正常对照组、缺氧组、衣霉素组、过表达SERCA2a组、SERCA2a＋缺氧组和SERCA2a＋衣霉素组。采用Western印迹法检测内质网应激蛋白GRP78及C／EBP同源蛋白（CHOP）表达水平，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，台盼蓝染色检测心肌细胞存活率。结果过表达SERCA2a＋缺氧组GRP78及CHOP蛋白表达较缺氧组分别低49．1％和52．7％，细胞凋亡率较缺氧组低66．0％，细胞存活率较缺氧组高13．4％，差异有统计学意义（均P〈0．05）；过表达SERCA2a＋衣霉素组GRP78及CHOP蛋白表达较衣霉素组分别低50．4％和66．1％，细胞凋亡率较衣霉素组低54．0％，细胞存活率较衣霉素组高6．7％，差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论过表达SERCA2a通过下调内质网应激蛋白表达，降低心肌细胞内质网应激水平，缓解过度内质网应激介导的细胞损伤。

过表达肌浆网钙ATP酶治疗实验性慢性缺血性心力衰竭

目的 研究肌浆网钙ATP酶2a（SERCA2a）基因过表达对慢性缺血性心力衰竭（心衰）心功能及心肌内质网应激（ERS）相关凋亡的影响.方法采用ameroid环束扎小型猪前降支制备慢性缺血性心衰模型.开胸心肌内注射重组腺相关病毒以过表达SERCA2a或对照报告基因绿色荧光蛋白.60 d后检测血流动力学、SERCA2a的表达和活性、心肌凋亡及ERS标志蛋白-分子伴侣GRp78、凋亡蛋白caspase-12的表达.结果基因转导后60 d,与心衰对照及报告基因组相比,转基因组SERCA2a蛋白表达和活性显著增高,心功能参数改善,心肌凋亡指数降低,伴GRP78和活化caspase12表达下降.结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心衰的心脏功能,其机制可能涉及减轻ERS相关的心肌细胞凋亡.

慢性心力衰竭基因治疗的临床研究进展

慢性心力衰竭是大多数心血管病的最终阶段,是世界范围发病率和死亡率最主要的病因之一。据估计,目前全世界超过2300万人患有慢性心力衰竭,随着老龄化社会的到来,其发病率将会在未来10年继续增长。近几十年新的医学观念和手段已经使多种心脏疾病的预后获得改观,但慢性心力衰竭死亡率（5年死亡率近50%）依然高居不下。心脏移植是目前晚期心力衰竭患者最为有效的治疗手段,但供者不足、术后免疫抑制以及花费巨大严重阻碍其发展和推广。

组织微电极芯片技术观察大鼠肌浆网钙ATP酶基因修饰骨髓干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的心电活动变化ThechangesofcardioelectricalactivityofratwithmyocardialinfarctionreceivingsarcoplasmicreticulumCa“-ATPasegenemodifiedbonemarrowstemcelltransplantationbymicroelectrode

目的对比骨髓干细胞（BMSC）移植以及肌浆网钙ATP酶（SERCA2a）基因修饰的BMSC移植治疗急性心肌梗死（AMI）的疗效，同时运用组织微电极芯片技术（MEA）进行心电学方面的评估。方法建立大鼠AMI模型（n=30），随机分为4组：正常组（n=6），盐水对照组（对照组，n=8），BMSC细胞移植组（BMSC组，n=8），SERCA2a基因修饰的细胞移植组（BMSC＋rAd．SERCA2a组，n=8）。14d后心脏B超、体表心电图及MEA技术评估心功能和心脏电活动变化。结果（1）rAd．SERCA2a基因对BMSC的感染效率为80％一90％。（2）BMSC组、BMSC＋rAd．SERCA2a组大鼠左心室射血分数均明显优于对照组（P均〈0．05）。（3）BMSC＋rAd．SERCA2a组大鼠体表心电图QT间期为（80．30±6．53）ms比对照组的（105．31±21．89）nlS少了23．8％（P〈0．05），对照组室性早搏较多。（4）MEA记录可发现对照组离体心脏搏动频率明显减慢，并出现室性心律失常和房室传导阻滞。梗死面心肌组织最大场电位BMSC组为（0．51±0．15）mV、BMSC＋rAd．SERCA2a组为（0．55±0．16）mV，均明显高于对照组的（0．23±0．10）mV（P均〈0．05），场电位时程BMSC组为（104．50-4-25．43）ms、BMSC＋rAd．SERCA2a组为（107．674-24．01）ms，均显著长于对照组的（63．00±20．34）ms（P均〈0．05）。（5）BMSC＋tAd．SERCA2a组传导时间最短，且能显著改善梗死面心室肌组织的均一性传导。结论短时间内，BMSC及SERCA2a基因修饰的BMSC移植均可明显改善AMI后心脏功能，后者还可有效改善梗死面心室肌组织的均一性传导，并可预防梗死后心律失常的发生。MEA技术在细胞或基因治疗的心肌电活动研究方面有重要的应用价值。