硫氢化钠增加高糖高脂条件下小鼠心房肌细胞系HL-1谷胱甘肽合成

目的研究硫氢化钠(NaHS)是否通过调节谷胱甘肽(GSH)的合成,降低活性氧自由基(ROS)产生,改善小鼠2型糖尿病心肌病(DCM)。方法将小鼠心房肌细胞系HL-1分为对照组、高葡萄糖(HG:40 mmol/L)和棕榈酸(Pal:500μmol/L)处理组;以及硫氢化钠(NaHS,100μmol/L)、DL-炔丙基甘氨酸[PPG,胱硫醚γ裂解酶(CSE)抑制剂,1 mmol/L]和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS抑制剂,5 mmol/L)处理72 h组。Western blot检测CSE和谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达;二氢乙锭(DHE)和二氯氟甲烷(DCFH)检测ROS含量;免疫共沉淀检测核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)泛素化水平及Nrf2与肌肉特异性环指蛋白1(Murf1)的相互作用。结果与对照组比高糖高脂处理HL-1细胞后CSE、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基C(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基M(GCLM)、谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达水平下降,而NaHS能恢复其表达。高糖高脂组ROS含量高于NaHS组。与NaSH组比高糖高脂条件下Murf1与Nrf2的相互作用增加,Nrf2泛素化水平明显增加。结论硫氢化钠减轻Nrf2的泛素化,增加GSH合成关键酶的表达。

脑缺血再灌注损伤大鼠患侧骨骼肌早期形态及atrogin-1、 MuRF-1 mRNA表达的变化

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后患侧骨骼肌早期形态学变化及肌萎缩素1(atrogin-1)和肌环指蛋白1(MuRF-1)mRNA表达水平的变化。方法:60只雄性Wistar大鼠,10只为假手术对照组(A组),其余50只采用Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,其中30只造模成功大鼠随机分为B、C、D组,每组10只。B组为造模成功后1d组,C组为造模成功后4d组,D组为造模成功后7d组。应用Bederson评分评价大鼠的神经损伤后的恢复情况;分别获取A、B、C、D四组右侧肱二头肌,对各组通过HE染色检测肌纤维横截面积;通过荧光定量RT-PCR观察大鼠患侧骨骼肌中atrogin-1和MuRF-1 mRNA表达的变化。结果:B、C、D组大鼠Bederson评分明显高于对照组A组(P<0.05);B、C、D组大鼠间Bederson评分差异无显著性(P>0.05)。患侧骨骼肌HE染色显示A、B、C组肌纤维横截面积两两比较,差异无显著性意义(P>0.05);D组大鼠患侧骨骼肌肌纤维横截面积分别与其余3组相比,差异均有显著性意义(P<0.05)。B、C、D组大鼠患侧atrogin-1和MuRF-1 mRNA的表达水平分别与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05);B组与C组相比较差异无显著(P>0.05);D组大鼠分别与B、C组相比,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤大鼠早期患侧骨骼肌形态学即发生变化,其机制可能与Atrogin-1和MuRF-1 mRNA在骨骼肌中高表达,泛素连接酶蛋白降解通路被激活有关。

糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激与肌特异性环脂蛋白1表达关系的研究

目的探讨糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激水平及其对肌特异性环指蛋白1基因(MuRF1)表达的影响。方法通过高糖高脂饮食联合尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)构建2型糖尿病大鼠模型,分别检测大鼠腓肠肌肌纤维面积、脂质过氧化水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及MuRF1 mRNA的表达水平,同时设对照组;通过体外培养C2C12成肌细胞,不同浓度H2O2(0、0.01、0.05、0.10和0.20 mmol/L)诱导肌管细胞内氧化应激,Westernblot检测不同程度氧化应激下细胞MuRF1的表达水平。结果与对照组大鼠相比较,糖尿病大鼠腓肠肌肌纤维面积减小,脂质过氧化水平增高,MuRF1 mRNA表达上调(P<0.01);体外细胞培养发现0.05、0.10、0.20 mmol/LH2O2诱导的C2C12肌管细胞氧化应激可上调MuRF1的表达(P<0.01)。结论糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激水平增高,使MuRF1基因表达上调,从而导致骨骼肌萎缩。

小檗碱对糖尿病db／db小鼠骨骼肌蛋白质代谢的影响及机制研究

目的探讨小檗碱对糖尿病／胰岛素抵抗模型db／db小鼠骨骼肌蛋白质代谢及肌萎缩蛋白Fbox-1（Atrogin-1）表达的影响。方法db／db小鼠为研究对象，以野生型为对照组。予小檗碱（5mg·kg-1·d-1）腹腔注射3周，观察体重和食量；3周末处死，分离胫骨前肌和腓肠肌。胫骨前肌冰冻切片行层黏连蛋白免疫组化染色，荧光显微镜下观察并拍照，测量肌纤维横截面积并计算肌纤维面积分布图；同位素[14C]．苯丙氨酸掺入法检测肌肉蛋白合成，[3H]-酪氨酸释放率分析检测肌肉分解代谢；Northern印迹检测腓肠肌Atrogin-1和肌环指蛋白1（MurF-1）转录水平，Western印迹检测蛋白翻译水平。结果小檗碱能明显降低db／db小鼠血糖水平[（18．55±3．79对26．32±4．02）mmol／L，P〈O．01]，降低脂肪重量[（2．75±0．30对3．77±0．52）g，P〈O．05]，使胫骨前肌的肌重／胫骨长度比值及肌纤维横截面积下降，肌纤维面积分布图明显左移；小檗碱使野生型小鼠和db／db小鼠的蛋白质合成率下降18％～22％；蛋白质分解率升高24％～26％，使肌肉特异性的Atrogin-1、MurF-1转录和翻译水平增高，同时使真核转录因子3调节亚基（eIF3-f）蛋白水平降低。结论小檗碱具有降糖降脂作用，但可引起骨骼肌蛋白质合成下降，促进蛋白质分解代谢，加剧糖尿病的骨骼肌消耗，其机制与上调Atrogin-1和MurF-1表达，同时下调eIF3-f有关。