微丝相关蛋白HSPC300／hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用的鉴定

为鉴定微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1在肝脏组织的功能,采用GSTpull-down结合质谱技术,检测该蛋白在肝脏中的结合蛋白,结果提示,肌球蛋白Ⅵ与HSPC300/hHBRK1共沉降,Western印迹杂交证实了质谱的结果.构建HSPC300/hHBRK1原核表达载体,诱导并获得了His-hHBRK1融合蛋白.利用免疫共沉淀证实hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ存在相互作用,激光共聚焦检测显示hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ在肺癌95D细胞的胞浆共定位,提示其相互作用可能是直接结合.肌球蛋白Ⅵ参与细胞迁移、高尔基分泌泡的运输和维持高尔基体稳定性等作用.hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用,为微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1参与细胞迁移和胞内物质运输提供了进一步佐证.

利用偶极子模型研究肌球蛋白Ⅵ的定向运动

从整个肌球蛋白分子马达系统的结构特点和实验现象出发,利用电偶极子模型构建一个势能函数,应用朗之万方程讨论其定向运动行为.通过调整分子马达电偶极子参数,模拟得到了肌球蛋白Ⅵ分子马达系综沿微丝负向的平均位移和平均粒子流,并讨论了负载力和马达偶极子转动速率对肌球蛋白Ⅵ系综运动的影响.研究发现,分子马达的运动方向会随马达偶极子旋转方向的不同而变化,马达偶极子逆时针旋转时分子马达向微丝负端运动(此时对应肌球蛋白Ⅵ),顺时针旋转时分子马达向正端运动(此时对应肌球蛋白Ⅴ);当负载力很大时,肌球蛋白Ⅵ甚至会向微丝的正端运动.

耳蜗肌球蛋白Ⅵ相互作用蛋白筛选的初步研究

目的筛选耳蜗毛细胞中与肌球蛋白Ⅵ相互作用的蛋白。方法提取SD大鼠耳蜗蛋白,通过联合免疫共沉淀和质谱分析筛选与肌球蛋白Ⅵ相互作用的蛋白,挑选1种蛋白通过基底膜铺片和冰冻切片免疫荧光进一步验证。结果免疫共沉淀及质谱分析筛选出与肌球蛋白Ⅵ相互作用的20余种蛋白质,免疫荧光显示血影蛋白αⅡ主要表达于表皮板及两侧胞膜,肌球蛋白Ⅵ主要表达于细胞体及表皮板,两种蛋白在表皮板均高表达。结论本研究共发现20余种与肌球蛋白Ⅵ相互作用的蛋白质,提示肌球蛋白Ⅵ可能与多种蛋白相互作用维持静纤毛稳定。

miR-145对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-145对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法体外培养子宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞,检测细胞中miR-145表达水平;将SiHa细胞分为miR-145过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并用荧光素酶报告基因实验验证,蛋白免疫印记(WB)检测miR-145过表达对肌球蛋白Ⅵ(MY06)蛋白表达的影响。结果 SiHa、Hela、MS751人子宫颈癌细胞中miR-145表达水平均显著低于正常子宫颈上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-145 mimics后,SiHa细胞中miR-145表达水平显著上调(P<0.05);与NC组比较,mimics组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示MY06是miR-145潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。WB结果显示miR-145过表达后,MY06蛋白表达水平显著下调。结论 miR-145能通过下调MY06表达抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。