MYLIP和miR-542-3p与宫颈癌患者早期诊断及临床预后的关系

目的探讨血清肌球蛋白调节轻链相互作用蛋白(MYLIP)和微小RNA-542-3p(miR-542-3p)表达水平对宫颈癌(CC)早期诊断价值及与其临床预后的关系。方法选取本院2018年5月至2020年5月期间收治的128例CC患者作为CC组,另选取同期于本院就诊的86例宫颈上皮瘤变(CIN)患者作为CIN组,行体检的74例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组血清MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平,收集CC患者临床病理特征资料,分析二者表达水平与CC患者临床病理特征的关系;使用ENCORI网站预测MYLIP和miR-542-3p之间是否存在靶向关系;使用Pearson法分析MYLIP mRNA和miR-542-3p表达的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平对CC的早期诊断价值;使用Kaplan-Meier法分析血清MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平与CC患者预后的关系;使用Cox回归分析影响CC患者预后的风险因素。结果CC组血清MYLIP mRNA表达水平显著高于CIN组和对照组(F=118.850,P<0.001),CC组血清miR-542-3p表达水平显著低于CIN组和对照组(F=85.413,P<0.001);CC患者血清MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平与是否绝经(χ^(2)=5.026、6.133)、宫颈浸润深度(χ^(2)=6.767、7.957)、FIGO分期(χ^(2)=7.788、11.480)、TNM分期(χ^(2)=12.426、20.150)、淋巴结是否转移(χ^(2)=8.821、12.687)有关(P<0.05);MYLIP和miR-542-3p存在靶向结合位点,且CC患者血清MYLIP mRNA与miR-542-3p表达为负相关关系(r=-0.415,P<0.001);血清MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平单独及联合诊断CC的曲线下面积(AUC)分别为0.807、0.815、0.894,联合诊断效果优于单独诊断(Z二者联合-MYLIP=2.165、P=0.030;Z二者联合-miR-542-3p=2.360,P=0.018);血清MYLIP mRNA高表达患者3年生存率显著低于低表达患者(52.24%vs.78.69%,χ^(2)=10.869,P=0.001),血清miR-542-3p高表达患者3年生存率显著高于低表达患者(79.03%vs.51.52%,χ^(2)=11.771,P=0.001);MYLIP mRNA高表达(HR=1.972,95%CI:1.565~2.485)是CC患者死亡的危险因素,miR-542-3p高表达(HR=0.517,95%CI:0.399~0.670)是CC患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论血清MYLIP mRNA和miR-542-3p表达水平对早期诊断宫颈癌具有一定的价值,且二者表达水平与宫颈癌患者临床预后密切相关。

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、SULT1A3表达及与子宫肌瘤发生的相关性

目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和硫酸基转移酶1A3(SULT1A3)在子宫肌瘤组织中的表达及与子宫肌瘤发生发展的可能关系。方法:收集2019年1月-2021年6月在本院行手术切除治疗的子宫肌瘤患者60例子宫肌瘤组织和正常子宫组织,分别采用RT-PCR技术和免疫组化法测定MMP-2、MLCK、SULT1A3的mRNA及蛋白表达,分析各指标表达与子宫肌瘤发生的相关性。结果:子宫肌瘤组织MMP-2(1.61±0.23)、MLCK(11.87±1.60)的mRNA相对表达量均高于正常子宫组织(1.05±0.09、6.14±1.02),SULT1A3的mRNA相对表达量(0.69±0.11)低于正常子宫组织(1.65±0.44);子宫肌瘤组织中MMP-2蛋白阳性率(68.3%)、MLCK蛋白阳性率(76.7%)均高于正常子宫组织(25.0%、26.7%),子宫肌瘤组织SULT1A3蛋白阳性率(61.7%)低于正常子宫组织(100.0%)(均P<0.05)。mRNA表达,MMP-2与MLCK呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3均呈负相关性;蛋白表达,MMP-2与MLCK蛋白表达呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3蛋白表达均呈负相关性(均P<0.05)。结论:子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK呈高表达,SULT1A3呈低表达,且各指标具有相关性,这种异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。

神经调节蛋白-1原核表达及其对阿霉素致大鼠心肌细胞毒性的保护作用

目的探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)对减轻阿霉素(DOX)所致大鼠心肌细胞毒性的作用及其机制。方法提取Sprague Dawley(SD)胎鼠的心室肌细胞总RNA并原核表达NRG-1蛋白;分离并培养SD乳鼠原代心肌细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定不同浓度DOX作用下大鼠原代心肌细胞的活性;并将心肌细胞分为正常对照组、DOX(5.0μmol·L^-1)组、DOX(5.0μmol·L^-1)+NRG-1(11.0 nmol·L^-1)组和NRG-1(11.0 nmol·L^-1)组,培养7 d后分别采用Western blot法和荧光定量聚合酶链反应检测大鼠原代心肌细胞的Na+-Ca2+交换体(NCX-1)和心肌球蛋白轻链激酶(cMLCK)蛋白和mRNA表达。结果原核表达NRG-1蛋白成功;DOX的心肌细胞毒性随其浓度增高而加重;NRG-1对不同浓度DOX干预的大鼠心肌细胞活力均有恢复作用(P<0.05),DOX浓度继续增高时其恢复作用受限(P<0.05),同时NRG-1浓度越高其细胞活力恢复越好(F=3606.28、2010.60、215.41,P<0.05);5.0μmol·L^-1DOX能抑制cMLCK蛋白和mRNA的表达(P<0.05),也能提高NCX-1蛋白和mRNA的表达(P<0.05),而11.0 nmol·L^-1NRG-1能够逆转DOX的上述作用(P<0.05)。结论NRG-1能够改善DOX所致大鼠心肌细胞毒性,其机制可能与cMLCK表达上调及NCX-1表达下调有关。

肌纤生成调节因子-1促肌节F-actin组装引起新生乳大鼠心肌细胞肥大

目的探索肌纤生成调节因子-1(myofibrillogenesis regulator-1,MR-1)通过调节肌原纤维生成引起心肌肥大的机制。方法干预MR-1在体外培养的新生乳大鼠心肌细胞中的表达,检测心肌细胞表面积、心房利钠因子和脑钠肽水平及蛋白合成速率3种心肌肥大指标的变化,以鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素标志并观察肌节F-actin组装,以半定量反转录-聚合酶链反应、免疫印迹和细胞免疫荧光术检测重要肌节分子myomesin-1、肌球蛋白调节轻链-2(myosin light chain-2,MLC-2)含量及亚细胞定位。结果 MR-1过表达引起心肌细胞肥大、肌节F-actin组装明显促进、MLC-2与myomesin-1表达上调(P<0.05)以及myomesin-1的细胞核-细胞质转位;MR-1沉默后小泛素样调节因子-1过表达引起的转位和肌节F-actin组装明显抑制。结论 MR-1通过促进myomesin-1和MLC-2调节肌原纤维生成引起心肌细胞肥大。

4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移的影响及其可能机制

目的研究维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯(ATFMPE)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞迁移的影响及可能机制。方法不同浓度维甲酸(ATRA)和ATFMPE处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231 48 h后,用MTT法检测ATFMPE对细胞增殖的影响,划痕法检测对细胞迁移的影响,Western blot法检测相关迁移蛋白的表达。结果 AT-FMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,ATFMPE和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7对细胞的迁移具有明显的抑制作用,Western blot结果显示ATFMPE显著降低MLCK的表达和肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化。结论 ATFMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的迁移具有抑制作用,可能与MLCK表达和MLC磷酸化水平下调相关。

MMP-2及MLCK与子宫肌瘤的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达与子宫肌瘤的相关性。方法选取2014年3月至2016年3月收治的子宫肌瘤患者90例为研究对象,采用免疫组化法检测患者子宫肌瘤组织中及其附近正常平滑肌组织中MMP-2及MLCK的表达水平。结果与正常平滑肌组织中,子宫肌瘤组织中MMP-2及MLCK的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与平滑肌组织对比,子宫肌瘤组织中MMP-2mRNA及MLCKmRNA的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-2及MLCK在子宫肌瘤组织中均呈高水平表达状态,提示MMP-2及MLCK可能参与了子宫肌瘤的发生与发展。

PMA对4-HPR抑制HepG2细胞体外迁移的影响

目的观察乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)对N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4-HPR)抑制肝癌细胞HepG2体外迁移的影响,并探讨相关机制。方法 PMA单独或联合4-HPR处理HepG2细胞,倒置显微镜下观察HepG2细胞形态学变化和药物对生长的影响;细胞划痕实验检测HepG2细胞体外迁移能力的变化;Western blot法检测迁移相关蛋白神经钙黏蛋白(N-cadherin)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化程度。结果 PMA联合4-HPR处理组细胞密度小,形态更为细长;二者联合处理细胞迁移距离明显减少,而PMA单独处理细胞迁移距离增加(P <0. 05);抑制细胞迁移过程中,N-cadherin、MLCK表达减少,MLC磷酸化亦降低(P <0. 05)。结论 PMA联合4-HPR可抑制HepG2细胞的迁移,相比4-HPR组能更显著减少MLCK的表达和MLC的磷酸化,为进一步探讨4-HPR联合PMA治疗肝癌提供实验基础。

平滑肌收缩的非钙依赖性调节机制

在平滑肌收缩活动中 ,肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)对肌球蛋白轻链 (MLC2 0 )的钙依赖性磷酸化是引起平滑肌收缩的主要原因 ,同时还存在着其它非钙依赖性的调节途径。高浓度的MLCK和Ca2 + independentLC2 0kinase均可引起MLC2 0 的非钙依赖性磷酸化 ;Rho kinase、花生四烯酸及蛋白激酶C等都能抑制肌球蛋白轻链磷酸酶的活性 ,减少MLC2 0 的脱磷酸化 ;调宁蛋白、原肌球蛋白和钙介导蛋白等能通过与肌动蛋白或肌球蛋白的结合来调节肌球蛋白Mg2 + ATP酶活性。这些因素都有助于维持低Ca2 + 时平滑肌的张力。

LncRNA SNHG1通过miR-101-3p/MYLIP轴调节宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)对宫颈癌(cervical cancer, CC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测人正常宫颈上皮细胞(H8)和人CC细胞(Hela、Caski、C-33A、SiHa)中SNHG1、microRNA-101-3p(miR-101-3p)、肌球蛋白调节轻链相互作用蛋白(MYLIP)的mRNA和蛋白表达。体外培养Hela细胞,使用Lipofectamine 3000试剂将si-SNHG1、anti-miR-101-3p及其阴性对照si-NC、inhibitor-NC转染到Hela细胞中,分为对照(Control)组、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+anti-NC组、si-SNHG1+anti-miR-101-3p组。转染48 h后,qRT-PCR检测细胞中SNHG1、miR-101-3p和MYLIP mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中MYLIP蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;通过双荧光素酶报告(DLRA)和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证Hela细胞中SNHG1、miR-101-3p和MYLIP的调控作用。结果 CC细胞系(Hela、Caski、C-33A、SiHa)中SNHG1、MYLIP mRNA和蛋白水平升高,miR-101-3p表达水平降低(P<0.05)。敲低SNHG1可显著上调miR-101-3p表达,降低MYLIP表达,抑制Hela细胞增殖、迁移和侵袭,并促进Hela细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-101-3p可显著减弱SNHG1敲低的促凋亡和抗迁移、侵袭作用(均P<0.05)。DLRA和RIP实验证实SNHG1可以靶向并结合Hela细胞中的miR-101-3p, MYLIP是miR-101-3p的靶标。结论 SNHG1敲低可能是通过上调miR-101-3p来抑制MYLIP表达,进而抑制CC细胞增殖、迁移和侵袭,并促进CC细胞凋亡。

GLP-2对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞MLCK表达的影响

目的探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对大鼠实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响。方法建立梗阻性黄疸大鼠模型,10d后对照组给予0.01mmol/LPBS0.5mL,实验甲组给予250g/(kg.d),实验乙组给予125g/(kg.d)的GLP-2溶液0.5mL,分别皮下注射,均为每天2次,连续7d后处死。并设假手术组。检测末端回肠黏膜形态学变化;采用免疫组化和Western blots法检测MLCK的分布和表达,并利用图像分析系统对Westernblots图像结果进行定量分析。结果梗阻性黄疸时小肠黏膜萎缩明显,肠绒毛短而稀疏。外源性补充GLP-2后小肠绒毛上皮结构有所恢复;实验甲组平均肠绒毛高度、黏膜厚度和隐窝深度与对照组相比分别上升27.1%,26.4%和25.3%(均P<0.01)。梗阻性黄疸时对照组MLCK染色稀疏,分布不均。实验甲组的MLCK染色有所恢复,强阳性表达例数(8/10)较对照组(2/10)明显升高(P<0.05),实验乙组(4/10)没有变化(P>0.05)。Westernblot图像定量分析所得结果相同。实验甲组的绒毛高度的下降值与MLCK图像的吸光度的下降值呈正相关(r=0.62,P<0.01)。结论梗阻性黄疸时小肠黏膜明显萎缩,外源性补充GLP-2能增强小肠黏膜上皮MLCK的分布和表达,恢复肠黏膜上皮的形态。

血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病的关联性

目的研究血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病(HAVD)的关联性。方法采用判断抽样方法,以23例男性HAVD患者为HAVD组,以61名男性手传振动作业工人为振动接触组,以64名男性非手传振动作业工人为对照组。采用酶联免疫吸附法检测3组人群血浆中肌球蛋白轻链2(MLC2)、内皮素-1(ET-1)和黏着斑蛋白(VCL)水平。采用Logistic回归分析筛选HAVD的关联指标,以之构建新的多变量模型指标Y,通过受试者工作特征(ROC)曲线筛查判断HAVD的指标。结果 3组人群血浆中MLC2水平由高到低依次为HAVD组>振动接触组>对照组(P<0.05)。HAVD组人群血浆中ET-1水平低于对照组(P<0.05),但与振动接触组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组人群血浆中VCL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Logistic回归分析排除年龄、工龄、吸烟、饮酒和自觉症状等混杂因素后,MLC2水平越高者,发生HAVD的风险越高(P<0.05);ET-1水平越低者,发生HAVD的风险越高(P<0.05)。采用MLC2、ET-1判断HAVD的ROC曲线下面积(A_Z)分别为0.820和0.524,采用以MLC2和ET-1构建的Y判断HAVD的A_Z为0.799;A_Z由高到低依次为MLC2>Y>ET-1(P<0.01)。结论HAVD患者血浆中MLC2与ET-1水平均与HAVD有关联;MLC2作为生物标志物筛查HAVD的效果优于ET-1。未发现VCL与HAVD有关联。