肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。

肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤的保护作用

目的探讨肌球蛋白轻链激酶（MLCK）抑制剂ML-7对细菌脂多糖（LPS）诱导的人肺动脉内皮细胞（HPAEC）和急性肺损伤（ALI）的影响。方法体外培养HPAEC，待4～6代予ML-7（10μmol／L）孵育60min后，再给予LPS刺激60min，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测HPAEC活性；荧光显微镜下观察磷酸化肌球蛋白轻链激酶（p-MLCK）免疫反应细胞。20只雌性BALB／c小鼠随机分组，LPS组鼻内注入LPS（1μg／g）；ML-7组在LPS滴鼻前进行ML-7干预。观察小鼠肺湿／干重（W／D）比值、支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性和病理学改变；用免疫组化法检测肺组织MLCK和CD11b阳性免疫反应细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织MLCK mRNA表达，蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测肺组织MLCK蛋白表达。结果与LPS组比较，HPAEC在ML-7孵育下吸光度（A）值增加（P〈0．01），P-MLCK免疫反应细胞明显减少（P〈0．05），肺W／D比值、肺组织MPO活性、BALF蛋白含量均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。病理结果显示，LPS组小鼠肺部炎症反应明显，以中性粒细胞浸润为主，肺泡充血、水肿；ML-7组肺部炎症及充血明显改善。免疫组化显示位于内皮的MLCK免疫反应细胞和位于炎性细胞的CD11b在ML-7组均较LPS组明显减少。ML-7组肺组织MLCK的mRNA和蛋白表达均较LPS组降低（P均〈0．05）。结论MLCK特异性抑制剂ML-7能提高LPS诱导的HPAEC生长活性，降低p-MLCK表达；减轻LPS诱导的中性粒细胞在肺内浸润、肺水肿及MLCK、CD11b蛋白和MLCK mRNA的表达。表明抑制MLCK活性可能通过减弱MLCK磷酸化而达到稳定血管屏障功能，防治ALI的作用。

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。

原肌球蛋白受体激酶小分子抑制剂研究进展

原肌球蛋白受体激酶(TRK)属于酪氨酸激酶家族,由神经营养酪氨酸受体激酶(NTRK)基因编码,参与神经元的分化。NTRK基因与其他基因发生融合则与癌症的发病机制密切相关。近年来靶向作用于TRK的小分子抑制剂成为治疗癌症的一种新策略,现有多个TRK抑制剂处于不同的临床研究阶段,拉罗替尼和恩曲替尼分别于2018和2019年获FDA批准上市。介绍了TRK的结构及代表性TRK抑制剂研究进展,并对TRK抑制剂研发的未来前景以及克服耐药性的治疗策略进行了展望。

新型TRK激酶小分子抑制剂的筛选与验证

原肌球蛋白相关激酶(Tropomyosin-Related Kinase,TRK)属于受体酪氨酸激酶家族,具有调节细胞增殖、分化、凋亡、代谢等作用.在多种肿瘤细胞中发现TRK激酶编码基因NTRK的融合现象,TRK蛋白过表达或激酶活性组成性激活促进了肿瘤的发生发展.以TRK激酶为靶标的小分子抑制剂正处于研发之中,如Entrectinib等.本研究以Entrectinib为阳性对照,从小分子化合物库中筛选得到Crizotinib、LY2874455等7个新颖的TRK激酶小分子抑制剂,结构计算提示Dovitinib等4个化合物均属于ATP竞争性抑制剂.在NTRK1基因融合的KM12细胞体外增殖实验中,全部的TRK激酶抑制剂均能抑制细胞增殖,且LY2874455最为显著.在细胞的联合用药实验中,发现Crizotinib与Entrectinib的联用具有协同作用.

NTRK基因融合的检测及TRK抑制剂研究进展

原肌球蛋白受体激酶(tropomyosin receptor kinase,TRK)蛋白家族由神经营养性酪氨酸受体激酶(neurotrophic tyrosine receptor kinase,NTRK)基因编码,在胚胎发育和神经系统正常功能的维持中发挥作用。已在多种成人和儿童实体瘤中确定NTRK基因融合为致癌驱动因子。NTRK基因重排和融合转录可通过不同的分子病理学技术检出,这些筛查技术为确定最可能从靶向TRK融合治疗中获益的患者提供支持。本文概述了NTRK基因融合的发生机制和特征,NTRK基因融合检测方法和检测路径,以及TRK抑制剂的治疗获益和研究进展,总结了TRK融合癌的多国共识和指南,旨在帮助临床医生了解如何和何时进行NTRK基因融合检测,以及针对TRK融合癌的靶向治疗现状,从而更好地指导患者治疗。

原肌球蛋白受体激酶(TRK)抑制剂的研究进展

原肌球蛋白受体激酶(TRK)是一类由神经生长因子激活的酪氨酸激酶家族,包括TRKA,TRKB和TRKC三个亚型,分别由NTRK1(neurotrophic receptor tyrosine kinase 1),NTRK2和NTRK3基因编码.TRK激酶被磷酸化后,能够激活下游信号分子,进而调节细胞增殖、分化、代谢和凋亡等作用.NTRK基因可以与其他基因发生融合,导致激酶的高表达或者激酶活性的持续升高,诱发癌症.靶向NTRK融合基因的主要策略是开发作用于胞内激酶区的TRK小分子抑制剂,近年来TRK小分子抑制剂的开发也受到了研究人员的关注.对TRK激酶的结构、生理功能、TRK抑制剂以及克服耐药的治疗策略等内容进行综述.

原肌球蛋白受体激酶抑制剂临床研究进展

原肌球蛋白受体激酶(TRK)家族由神经受体酪氨酸激酶基因(NTRK)编码,并在神经系统的发育和正常功能中起重要作用。NTRK融合基因是各种成人和儿童癌症的致癌驱动因子。因此,近几年来TRK抑制剂被广泛关注和深入研究,首代TRK抑制剂拉罗替尼和恩曲替尼的成功获批具有里程碑式的意义。与其他激酶抑制剂相似,患者随着接受TRK抑制剂治疗时间的推移而产生耐药性,因此,解决耐药和多种突变将是未来研发的重点。通过对近几年具有不同结构类型、活性及选择性的小分子TRK抑制剂的研发进展进行详细总结,以期为进一步开发新型TRK抑制剂提供参考。

基于小分子化合物库筛选协同多腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂杀伤卵巢癌细胞的药物

多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂是一类靶向DNA修复缺陷癌细胞的新型药物。早期研究表明PARP抑制剂取得了令人满意的结果,然而药物治疗后出现的耐药机制尚未完全揭露。因此,有必要寻找更多的靶向药物与PARP抑制剂联用,以达到杀伤肿瘤细胞的目的。本文基于379种小分子化合物和PARP抑制剂尼拉帕尼(Niraparib)的联合用药筛选,通过细胞增殖实验、克隆存活实验和免疫荧光染色等方法筛选潜在的具有协同PARP抑制剂杀伤卵巢癌细胞的药物。结果表明,其中有8种小分子化合物具有较好的联合用药效果,包括2种已经报道的与PARP抑制剂具有联用效果的小分子化合物STF-118804和Disulfiram。我们从中选取原肌球蛋白受体激酶A(tropomyosin receptor kinase A,TrKA)的抑制剂GW441756,进行了多种肿瘤细胞的验证以及初步机制的探究。Niraparib和TrKA抑制剂的联合用药显著增加肿瘤细胞对PARP抑制剂的敏感性(P<0.05)。从机制上分析,联合用药组细胞内γH2AX foci的数目显著增加(P<0.05),说明TrKA抑制剂阻碍损伤后细胞的DNA损伤修复能力;同时,联合用药显著降低细胞内同源重组修复(homologous recombination repair,HRR)标志物RAD51 foci(P<0.05)的形成,说明TrKA抑制剂可能通过抑制细胞的HRR效率阻碍细胞的DNA损伤修复。本研究的结果提示,TrKA抑制剂可以作为一种与PARP抑制剂联用杀伤卵巢癌细胞的潜在药物。

下调高迁移率族蛋白B1对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的观察下调高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌Si Ha细胞随机分成对照组和实验组,分别加入0.01%DMSO和HMGB1抑制剂正丁酸钠0.5 mmol/L作用24 h。采用Transwell小室实验观察两组细胞侵袭、迁移能力,RT-PCR法和Western blotting法检测两组HMGB1及Toll样受体4(TLR4)/核因子-кB(NF-кB)信号通路相关分子[TLR4、NF-кB、整合素av、整合素β3、原肌球蛋白1(TPM1)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(maspin)]、TLR4/PI3K/Akt信号通路相关分子[磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、整合素β1]。结果实验组迁移和侵袭实验中的穿膜细胞数均少于对照组(P均<0.05)。与对照组相比,实验组HMGB1、TLR4、NF-кB p65、整合素av、整合素β3、整合素β1 mRNA和蛋白表达下降,TPM1、maspin mRNA和蛋白表达升高(P均<0.05)。结论在宫颈癌细胞中,下调HMGB1可以通过影响TLR4/NF-кB和TLR4/PI3K/Akt信号通路,促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移。

神经营养因子受体酪氨酸激酶基因融合在非小细胞肺癌诊疗中的研究进展

精准的分子靶向治疗能够显著改善晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的预后,并已成为敏感驱动基因阳性晚期NSCLC的一线标准治疗。近年来,罕见基因突变的靶向治疗成为研究的热点。神经营养因子受体酪氨酸激酶(NTRK)基因融合突变在NSCLC患者中的发生率虽然不足1%,但该基因家族中任何一个基因与其他基因发生融合突变,均会导致肿瘤细胞的异常活化,从而驱动肿瘤的发生。靶向NTRK基因的药物原肌球蛋白受体激酶(TRK)抑制剂能够为NTRK阳性的多种实体瘤患者带来显著的临床获益,且安全性好。本文从NTRK基因、一代和二代TRK抑制剂的研究进展及未来可能的治疗模式进行综述。

Trk激酶与肿瘤发生的关系及其小分子抑制剂的研究进展

Trk是一类神经生长因子激活的酪氨酸激酶家族,包括Trk A、Trk B和Trk C 3个亚型,分别由NTRK1(neurotrophic receptor tyrosine kinase 1)、NTRK2和NTRK3基因编码。Trk激酶被磷酸化后,能够激活下游信号分子,从而起到调节细胞增殖、分化、代谢、凋亡等作用。NTRK基因可以与其他基因发生融合,导致Trk激酶的高表达或者Trk激酶活性持续升高,最终可能引起癌症的发生。近几年来,Trk激酶的小分子抑制剂作为一种新的癌症治疗手段,进入人们的视线,这些化合物对NTRK基因融合的癌症患者有显著的治疗效果。现总结了Trk激酶的结构及生理功能,以及NTRK基因融合与肿瘤发生的关系;同时列举了10多种近十几年来研究发现的Trk激酶抑制剂,并讨论了其分子抑制的机制以及未来的发展方向。

脑源性神经营养因子对无血清培养的神经元保护机制的研究

目的探讨在无血清培养条件下脑源性神经营养因子(BDNF)对神经元样细胞存活的影响及其作用机制。方法在无血清条件下培养具有BDNF受体TrkB表达的神经母细胞瘤细胞SY5Y-TrkB,在培养液中单独加入BDNF,或联合加入磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂进行细胞培养,利用细胞活性测定法(MTS)检测活细胞活性。结果与在10%胎牛血清(FBS)培养液中培养的细胞相比,无血清条件下培养24、48 72 h后,SY5Y-TrkB细胞的存活率分别为51%、38%、25%。若细胞在无血清条件下培养24 h,无处理因素的细胞存活率设定为100%,给予BDNF后的细胞存活率为154%;用10μmol/L PI3K抑制剂LY294002预处理1 h,再给予BDNF后的细胞存活率为100%;而应用80μmol/LMAPK抑制剂PD98059预处理1 h,再给予BDNF后的细胞存活率为158%。结论 BDNF通过PI3K信号通路保护SY5Y-TrkB细胞免受无血清培养引起的细胞死亡。

经典途径IKKα与IKKβ在血液肿瘤中的作用机制及阻断其作用的药物治疗的最新研究进展

近年来,除了经典的发病机制外,发现经典的IKKα与IKKβ途径在血液肿瘤中关系密切,且对经典的IKKβ途径的研究较为深入。研究表明,在胞外IL-6、TNF-α等刺激因子作用下,IKKβ被激活,通过多种级联反应使NF-κB磷酸化,在多发性骨髓瘤中引起细胞周期蛋白D表达增加,在慢性髓系白血病中引起抗凋亡基因BCL-x(L)表达增强;在细胞层面上,IKKβ途径促进肿瘤细胞生存及增殖,减少细胞凋亡,促进血管生成及细胞迁移;而经典的IKKα虽在调节IKKβ活性方面起到作用,但在非经典途径中作用更突出。本文就此对血液肿瘤发病机制的最新研究进展进行综述,为更加深入认识血液肿瘤发病机制及研究方向提供理论依据。目前,阻断经典的IKKα与IKKβ途径已成为治疗血液肿瘤的一个新的作用靶点,已研发出一些特异性IKKα及IKKβ抑制剂,如LY2409881、BMS-345541等,大部分药物正处于临床试验阶段,具有良好的抗肿瘤作用。

TRK抑制剂的研究进展

原肌球蛋白受体激酶(TRK)是蛋白酪氨酸激酶家族的一员,其可对哺乳动物神经系统突触的可塑性进行调节,并在多种肿瘤中表达。对于TRK生理作用的研究相对完全,现有多个TRK抑制剂处于临床研究阶段,其中部分药物(如larotrectinib、entrectinib)已获FDA批准上市,表明TRK抑制剂具有较好的开发前景。本文作者介绍了TRK和NTRK融合蛋白的生物学功能,并对不同类型的TRK小分子抑制剂的开发过程、活性、选择性以及耐药性进行了综述。

四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质组学影响的研究

目的:探讨四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质表达变化的影响。方法:SD雄性大鼠42只,随机取6只作为正常组,其余36只复制慢性心力衰竭大鼠模型,造模成功后,分为四君子汤高、低剂量组(11.88,2.97 g·kg^(-1)·d^(-1)),卡托普利组(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),正常组和模型组分别给予相同体积生理盐水,连续灌胃给药1月。分别留取各组左心室组织,双向凝胶电泳分离心肌蛋白,分析差异显示的蛋白,并对有显著差异的蛋白点进行胶内酶切和质谱鉴定。结果:与模型组比较,四君子汤组有31种蛋白质表达上调,28种蛋白质表达下调,各选取8个差异显著(Volume值相差≥1.5倍)的蛋白进行质谱鉴定,通过整合去重,鉴定出4个蛋白:与能量代谢相关的Suclg2蛋白、丙酮酸脱氢酶复合体;与心肌细胞收缩功能相关的肌球蛋白轻链2;与心肌细胞重构相关的丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N。结论:四君子汤可调节慢性心衰大鼠心肌组织多种蛋白表达,可能通过调节能量代谢、减少心肌重构、提高收缩功能而改善心功能。

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织微环境Rho-ROCK Ⅱ通路相关因子的影响

目的:观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠神经细胞轴突再生相关抑制因子重组人Ras同源物基因家族成员A(RhoA)、Rho蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ)、肌球蛋白轻链(MLC)蛋白的影响,探讨夹脊电针治疗急性脊髓损伤(ASCI)的作用机制。方法:雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、夹脊电针组、抑制剂组,每组12只。采用脊髓打击法制备大鼠ASCI模型。夹脊电针组于模型制备成功后3h进行夹脊电针治疗,每日1次,每次30 min,连续治疗14d、28d;抑制剂组于造模成功后立即给予腹腔注射盐酸法舒地尔(10mg/kg),每日1次,连续治疗14d、28d。采用BBB评分法评估大鼠后肢运动功能变化,免疫组化法检测各组大鼠脊髓组织中RhoA、ROCKⅡ、MLC蛋白的表达情况。结果:BBB评分结果显示:与假手术组比较,造模后14d、28d模型组大鼠运动功能评分显著降低(P<0.05);与模型组比较,造模后14d、28d夹脊电针组、抑制剂组大鼠运动功能评分均显著升高(P<0.05);夹脊电针组、抑制剂组造模后28d大鼠肢体运动功能评分较造模后14d显著升高(P<0.05)。免疫组化结果显示:与假手术组比较,造模后14d、28d模型组大鼠脊髓组织RhoA、ROCKⅡ、MLC阳性细胞数增加(P<0.05);与模型组相比,造模后14d、28d夹脊电针组、抑制剂组大鼠脊髓组织RhoA、ROCKⅡ、MLC阳性细胞数显著降低(P<0.05);夹脊电针组、抑制剂组造模后28d大鼠脊髓组织RhoA、ROCKⅡ、MLC阳性细胞数较造模后14d显著降低(P<0.05)。结论:夹脊电针能够显著改善ASCI大鼠肢体运动功能,其作用机制可能与抑制大鼠脊髓损伤组织微环境Rho-ROCKⅡ信号通路RhoA、ROCKⅡ、MLC抑制因子表达有关。

靶向 Trk 抗肿瘤药物 larotrectinib 的新合成方法

目的改进抗肿瘤药larotrectinib的合成路线。方法以4-氯丁酰氯和N,O-二甲基羟胺盐酸盐为起始原料,经取代、格氏交换、缩合、还原、环合、成盐得到2R-(2,5-二氟苯基)吡咯烷,其与5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶反应得到中间体(R)-5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶,该中间体经硝化、还原后再与(S)-3-羟基吡咯烷盐酸缩合得到目标物larotrectinib。结果与结论合成larotrectinib的总收率为13.3%(以N,O-二甲基羟胺盐酸盐计),目标物及关键中间体的结构经MS、~1H-NMR谱确证。与原研专利路线相比,新合成路线使用了廉价易得的原料,提高了反应收率,优化了反应条件,可为工业化生产提供参考。