柞蚕肌球蛋白轻链1基因(MLC-1)的序列特征及表达谱与系统进化分析

从柞蚕蛹全长cDNA文库中分离和鉴定了柞蚕肌球蛋白轻链1(myosin light chain 1,MLC-1)基因。柞蚕MLC-1基因全长863 bp,包含一个453 bp的开放阅读框,编码150个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为16.75 kD,等电点为4.62。柞蚕MLC-1基因在4个发育阶段(卵、幼虫、蛹、成虫)和幼虫的10种组织(血液、脂肪体、中肠、丝腺、体壁、马氏管、精巢、卵巢、大脑和肌肉)中均有表达,表明该基因在柞蚕生长发育过程中起着重要作用。柞蚕MLC-1与已知鳞翅目昆虫MLC-1的序列相似度为88%～98%,与其它昆虫MLC-1的序列相似度为60%～74%,表明MLC-1在昆虫的进化过程中高度保守。利用MLC-1蛋白质序列构建的系统进化树中,无脊椎动物和脊椎动物明显地聚成2个类群,且鳞翅目、膜翅目、半翅目、双翅目等昆虫的聚类也与传统形态学分类相一致。

斑鳜肌球蛋白轻链1基因cDNA的克隆及其分析

为提取斑鳜肌肉组织的总RNA,应用PCR法扩增肌球蛋白轻链1基因(MLC1)。结果获得斑鳜MLC1(基因库登录序列号为:GQ282999),cDNA序列的全长为579 bp,编码192个氨基酸,理论相对分子质量为20 778.57,等电点为4.51,该序列具有2个EF-手相结构。氨基酸序列比对结果表明,第2个EF-手相结构中的Ca2+结合域非常保守,氨基酸序列同源性为100%。

先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因的RFLP分析

本研究利用人心室肌球蛋白轻链1cDNA探针对先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因进行了RFLP分析。从患有四种不同先天性心脏病的9个家系40名成员和13名无血缘关系患者的RFLP分析结果发现,有两个家系呈现限制酶切片段多态性,但这种限制性酶切片段多态性似与先天性心脏病的发生没有联系。

烧伤后立即一次性切痂对大鼠血浆肌球蛋白轻链1变化的影响

心肌损伤是烧伤后最严重的并发症之一，通过检测血浆肌球蛋白轻链１（ＭＬＣ１）浓度的变化，可以判明是否存在心肌损伤及其程度［１］。笔者通过对３０％体表总面积（ＴＢＳＡ）Ⅲ度烧伤大鼠立即一次性切痂后血浆ＭＬＣ１浓度变化的观察，探讨伤后立即一次性切痂对防治烧...

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

猪Myl1基因启动子克隆及多态性研究

肌球蛋白轻链1基因(Myl1)编码的不同剪切体(主要是MLC1f和MLC3f)与哺乳动物骨骼肌肌纤维类型相关。通过猪BAC文库筛选及引物步行法测序获得Myl1基因的启动子序列,采用PCR-RFLP技术分析蓝塘猪、大花白猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个品种Myl1基因启动子区的多态性。结果表明,Myl1基因-678C/T位点在蓝塘和大花白等本地猪种中多态性丰富,而在杜洛克、长白和大白等外来猪种中几乎只有CC基因型。

MYL1基因mRNA选择性剪切体的鉴定及其在不同发育时期的蓝塘与长白猪骨骼肌中的表达

肌球蛋白轻链1基因(MYL1)的2个剪切体MLC1f及MLC3f在骨骼肌不同发育时期中发挥着重要作用。为进一步了解MYL1基因在猪骨骼肌发育过程中的重要作用,通过电子克隆、RT-PCR扩增及实时定量PCR方法克隆和鉴定了猪MYL1基因mRNA 5个选择性剪切体(MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C)。其中MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C是在猪背最长肌中鉴定到的MYL1基因的3个新转录本,目前在人、鼠等其它物种尚无这三种转录本的报道。结果表明,剪切体MLC3f在180日龄长白猪中的表达量最高,而剪切体MLC1f则是在90日龄蓝塘猪的表达量最高;剪切体MLC5f-A在蓝塘与长白猪中各发育时期的表达量都很低;除了剪切体MLC1f外,其余转录本的表达量均为随个体体重的增加而逐步增加。通过对MYL1基因不同选择性剪切体的鉴定,为其在骨骼肌不同发育阶段或组织类型特异性表达调控研究奠定了基础,为该基因功能的研究提供重要线索。

MLC-1对冠心病的诊断和院内预后评估的作用

目的:探讨血清肌球蛋白轻链-1(MLC-1)水平与冠心病(CHD)的相关性。方法:将72例患者分为正常对照组、稳定型CHD组及急性冠脉综合征(ACS)组。采集正常对照组入院24 h内及造影后24h内血样,采集稳定型CHD组和ACS组入院24 h内、冠状动脉造影后24 h内及入院第5 d血样。双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清MLC-1水平。结果:入院24 h内ACS组的血清MLC-1水平显著高于正常对照组及稳定型CHD组,正常对照组与稳定型CHD组相比无显著差异。造影后术后24 h内,3组血清MLC-1水平无显著差异,各组术前和术后血清MLC-1水平亦无显著差异。入院第5天,ACS组的血清MLC-1水平显著高于稳定型CHD组。ROC曲线分析提示,血清MLC-1水平诊断ACS的AUC为0.90。发生院内不良事件的冠心病患者,其入院24 h内血清MLC-1水平有高于未发生院内不良事件的冠心病患者的趋势,但无统计学差异。结论:检测血清MLC-1水平对诊断ACS有一定的价值。

快速补液对烧伤延迟复苏并发心肌损害的防治

目的 探讨快速补液对烧伤延迟复苏血液流变学特性和心肌局部血流量的改善作用。方法 采用大鼠 30 %TBSA烧伤模型 ,动态观察烧伤延迟复苏快速补液和均匀补液后 ,大鼠血液流变学特性和心肌局部血流量及血浆中心肌肌球蛋白轻链 - 1浓度的改变。结果 伤后 1h ,全血粘度即显著升高 ,6h达高峰 ,补液后 ,全血粘度均降低 ,快速补液组的降低幅度显著大于均匀补液组 ,血浆粘度、红细胞比积、血浆纤维蛋白原含量和红细胞膜带电性质等血液流变学参数也发生改变 ;心肌局部血流量和血浆中心肌肌球蛋白轻链 - 1的浓度也相应发生改变 ,其变化趋势与全血粘度改变密切相关。结论 烧伤延迟复苏快速补液能够改善血液流变学特性 ,提高心肌局部血液灌注量 ,使心肌损害程度减轻 ,因此 。

快速补液对烧伤延迟复苏并发心肌损害的保护作用

制作大鼠30%TBSAⅢ度烧伤模型,动态观察了烧伤延迟复苏快速补液和均匀补液前后血浆中CMLC-1浓度变化及伤后24h的病死率。结果,伤后大鼠血浆中CMLC-1浓度为(924±315)μg/L,伤后1h即显著升高至(18198±6692)μg/L(P<005),6h达最高峰(35941±13219)μg/L。补液后,伤后12、24、48h,快速补液组的血浆中CMLC-1浓度下降幅度显著大于均匀补液组(P<005)。24h的病死率,快速补液组为1466%,明显低于均匀补组的4666%。结果提示,烧伤延迟复苏快速补液能迅速补充循环血容量,在一定程度上遏制心肌继续缺血缺氧性损害,减轻心肌受损程度,对于临床延迟复苏的大面积烧伤病人救治具有重要意义。

香砂六君子汤调控RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路改善功能性消化不良大鼠胃动力的机制

目的:基于RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)/肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(MYPT1)信号通路探讨香砂六君子汤对功能性消化不良(FD)大鼠胃动力障碍的干预机制。方法:将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为正常组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法复制FD大鼠模型。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水灌胃,莫沙必利组给予1.35 mg·kg^(-1)·d^(-1)莫沙必利灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予12、6、3 g·kg^(-1)·d^(-1)香砂六君子汤汤剂灌胃,持续干预14 d。造模和给药前后观察大鼠一般生存状况,测定大鼠体质量、3 h平均进食量。给药干预结束后,测定大鼠肠推进率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察胃组织病理改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组大鼠延髓和胃组织匀浆液中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、血管活性肠肽(VIP)含量,采用冰冻切片染色技术观察各组大鼠胃窦平滑肌中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶分布,采用蛋白免疫印迹法检测胃组织中RhoA、ROCK2、磷酸化(p)-MYPT1蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠毛发枯乱、倦懒怠动、行动缓迟,一般生存状况较差,体质量、3 h平均进食量以及肠推进率均明显下降(P<0.05);胃组织病理未见明显异常;延髓和胃组织中ChAT含量减少,胃组织中VIP含量增多,胃窦平滑肌中ATP酶分布明显减少,胃组织中RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠一般生存状况明显好转,体质量、3 h平均进食量及肠推进率明显增加(P<0.05);胃组织病理未见明显差异;延髓和胃组织中ChAT含量明显增加,胃组织中VIP含量减少,胃窦平滑肌中ATP酶分布明显增加,胃组织中RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),上述指标香砂六君子汤组干预作用呈剂量依赖性。结论:香砂六君子汤能够有效改善FD大鼠一般生存状况及胃动力,其具体机制可能与香砂六君子汤激活胃组织中RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路调控平滑肌舒缩,促进胃动力有关。

快速补液对烧伤延迟复苏的心肌保护作用

目的 :探讨快速补液对大鼠烧伤延迟复苏心肌局部肾素—血管紧张素系统的影响及其心肌保护作用。方法 :采用大鼠 30 %TBSAⅢ度烧伤模型 ,分为快速补液组和均匀补液组 ,测定伤前和伤后1、3、6、1 2、2 4、4 8h心肌组织中血管紧张素转换酶 (ACE)的活性 ,血管紧张素 -Ⅱ (AⅡ )的含量及其血浆中心肌肌球蛋白轻链 -1 (CMLC -1 )的浓度。结果 :伤后 1h ,两组鼠心肌ACE活性由 ( 1 .2 1± 0 .54)nmol·mgpro- 1·min- 1升高至 ( 1 .91± 0 .71 )nmol·mgpro- 1·min- 1,同时 ,AⅡ含量及CMLC -1浓度也显著升高 ,伤后 6h均达高峰。补液复苏后三者均逐渐下降。快速补液组的下降幅度显著大于均匀补液组。三者变化趋势一致 ,呈明显正相关。结论 :烧伤延迟复苏快速补液能够降低心肌组织肾素—血管紧张素系统活性 ,减少心肌局部AⅡ的生成 。

MRI联合血清LncRNA MYLK-AS1水平对早期肝癌诊断价值探讨

目的探讨磁共振成像(MRI)联合血清长链非编码RNA(lncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(MYLK-AS1)水平对早期肝癌的诊断价值。方法选取2019-11-14-2021-11-14河南大学第一附属医院行手术治疗的76例早期肝癌患者为研究对象(肝癌组)。选取同院同期接受检查的60例肝炎、肝硬化患者为对照(良性组)。采用实时荧光定量PCR检测血清MYLK-AS1水平。所有入选者均行MRI检查,分析MRI联合血清MYLK-AS1对早期肝癌的诊断价值。结果76例肝癌患者共有84个癌灶,MRI动态扫描显示,DWI高信号(76个,90.48%),T1WI显示低信号(65个,77.38%),T2WI显示稍高信号(70个,88.33%)。DCE扫描结果显示,延迟期部分病变可见包膜强化(22个,26.19%)。肝癌组血清MYLK-AS1水平为(2.11±0.36),高于良性组的(1.02±0.19),t=21.224,P<0.001。MYLK-AS1在早期肝癌诊断中的准确度为86.76%,灵敏度为89.47%,特异度为83.33%;MRI在早期肝癌诊断中准确度为92.65%,灵敏度为94.74%,特异度为90.00%;两者联合检测在早期肝癌诊断中准确度为91.18%,灵敏度为98.68%,特异度为81.67%。结论MRI联合血清MYLK-AS1水平对早期肝癌的诊断价值优于各单项检测。