原代人口腔角质细胞在产黑普氏菌作用后的转录组分析

目的探究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,P.m)作用下原代人口腔角质细胞(primary human oral keratinocytes,pHOK)的转录组变化,并在人口腔角质形成细胞(human oral keratinocyte,HOK)细胞系中进行验证。方法分离培养pHOK,并与P.m共培养4 h与24 h,提取总RNA,构建基因文库,转录组测序,分析差异表达基因,并进行基因本体论(gene ontology,GO)通路分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,在HOK与P.m共培养模型中采用qRT-PCR及Western Blot对差异基因进行验证。结果在pHOK与P.m共培养4 h组与对照组间上调表达的差异基因有:淋巴细胞胞浆蛋白1(lymphocyte cytosolic protein 1,LCP1)、角蛋白7(keratin 7,KRT7)、纤毛和鞭毛相关蛋白251(cilia and flagella associated protein 251,CFAP251)等,下调表达的差异基因有:含FERM、RhoGEF和Pleckstrin结构域蛋白1(FERM,ARH/RhoGEF and Pleckstrin domain protein 1,FARP1)、WW结构域转录调控因子1(WW domain containing transcription regulator 1,WWTR1)、含Discoidin、CUB和LCCL结构域蛋白2(Discoidin,CUB and LCCL domaincontaining protein 2,DCBLD2)等,共1788个差异表达基因;24 h组与对照组间上调表达的差异基因有:LCP1、补体C1s(complement C1s,C1S)、犬尿氨酸酶(kynureninase,KYNU)等,下调表达的差异基因有:磷酸丝氨酸转氨酶-1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)、FARP1、FKBP型脯氨酰异构酶10(FKBP prolyl isomerase 10,FKBP10)等,共1832个差异表达基因;其中共同差异表达基因(common differentially expressed genes,cDEGs)有LCP1、KYNU、长链非编码RNA958(long intergenic non-protein coding RNA 958,LINC00958)等1090个,差异均具有统计学意义。通过GO数据库分析,cDEGs主要富集到细菌对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应、细胞的顶端部分等;通过KEGG分析,cDEGs富集到的通路有白介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Toll样受体通路等;从cDEGs中筛选肌球蛋白1B(myosin1B,MYO1B)在HOK与P.m共培养模型中进行验证,qRT-PCR及Western Blot检测结果表明,MYO1B的表达在对照组和P.m刺激组之间存在显著性差异(P<0.001),且其表达随P.m刺激时间的延长及刺激浓度的增大而递增。结论P.m对口腔角质细胞的转录组存在重要影响。