平滑肌肌球蛋白B的超沉淀与肌球蛋白轻链磷酸化

本文报导了牛胃肌球蛋白B(天然肌动球蛋白)的超沉淀性质。当钙离子、钙调蛋白和ATP存在时,肌球蛋白B出现超沉淀,在pH6.8和7.5处,有两个峰值。Ca^(2+)(PCa值8-4)对超沉淀影响的浓度-反应曲线呈典型的S形,表明当Ca^(2+)浓度处于微摩尔水平时产生超沉淀。伴随超沉淀发生了肌球蛋白调节轻链磷酸化。这说明肌球蛋白轻链的Ca^(2+)-CaM依赖性磷酸化可能包含在脊椎动物平滑肌收缩活动的调节机制中。

翘嘴鳜肌球蛋白轻链3b基因(MLC3b)的分子克隆和特征分析

翘嘴鳜以其优良肉质性状近期已成为中国极具商品价值和大力推广的人工养殖名贵鱼类之一。为了解其控制优良肉质性状的遗传基础,本文采用同源克隆RT-PCR方法,获得该鱼肌球蛋白轻链MLC3b基因cDNA序列,该基因cDNA序列为453bp,编码150个氨基酸残基,通过PROSITE tools软件预测显示,该轻链具有两个保守的EF-手相结构和一个C-末端保守序列,且该MLC3轻链N端没有高等脊椎动物特有标志序列。MLC3b基因cDNA序列与MLC3a编码区的同源性达97.7%。本研究结果将为名贵鱼类肉质结构基因及功能的研究提供分子生物学基础。

转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响

目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(HumanInsulin -likeGrowthFactor-Ⅰ,hIGF -Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(MyosinHeavyChain -Ⅱb ,MHC -Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表达的影响。方法:将90只7～12周雄性C3H小鼠右下肢腓肠肌中段内侧实施急性钝挫伤后,随机分为自然愈合组、单纯成肌细胞注射组和转基因成肌细胞注射组。挫伤后第3天,对单纯成肌细胞注射组、转基因成肌细胞注射组损伤局部分别注射等量单纯成肌细胞和转基因成肌细胞,并于损伤后第1、5、10、2 0、30天取材。检测不同时间点MHC -Ⅱb和VimentinmRNA表达水平,观察比较各组骨骼肌修复情况。结果:(1)在急性骨骼肌钝挫伤修复期,3组小鼠骨骼肌MHC -ⅡbmRNA均明显升高,第2 0天达到峰值。转基因成肌细胞注射组MHC -ⅡbmRNA表达水平最高,其次为单纯成肌细胞注射组。(2 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,转基因成肌细胞注射组VimentinmRNA的表达水平始终在3组中表达最低。结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,注射转基因成肌细胞能提高损伤后MHC -IIbmR NA表达水平,促进肌纤维的增生,加速骨骼肌愈合进程。同时,损伤局部注射转hIGF -Ⅰ基因的成肌细胞后,使得损伤局部VimentinmRNA表达低于另两组。

青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的观察青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌中Ⅱb型肌球蛋白重链(myosin heavy chain;MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅰ和collagen-Ⅲ)蛋白表达的影响。方法 72只雄性SD大鼠随机分为模型对照组、云南白药组、青白散组,每组24只。采用慢性软组织损伤动物模型,分别予以生理盐水、云南白药和青白散灌胃。于给药后第1周末、第2周末、第3周末,用免疫组织化学方法检测大鼠慢性软组织损伤后骨骼肌中MHC-Ⅱb蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,并分析其相关性。结果青白散组在不同时间点的骨骼肌中MHC-Ⅱb蛋白表达水平均较模型对照组显著增高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平均较模型对照组显著降低。结论青白散能显著促进大鼠慢性损伤骨骼肌中MHC-Ⅱb蛋白表达,阻止Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达过度增高,从而有利于损伤组织的修复。

扇贝肌钙蛋白及其对肌球蛋白超沉淀的影响

分离了扇贝闭壳肌肌钙蛋白，其分子量为４６（ＩｎＩ），４０（ＴｎＴ），和２２（ＴｎＣ）ｋＤ．肌球蛋白Ｂ含有主要的收缩蛋白质与调节蛋白质，在有Ｃａ２＋和ＡＴＰ存在时，它会发生超沉淀作用．经低离子强度溶液反复沉淀处理，即失去Ｃａ２＋－敏感性，成为去敏肌球蛋白Ｂ．在Ｃａ２＋和ＡＴＰ作用下，它仍可发生超沉淀作用，但仅及最大活性的５０％．若加入肌钙蛋白，则反应活性可完全恢复．兔骨骼肌肌钙蛋白可替代扇贝闭壳肌肌钙蛋白．这表明扇贝闭壳肌兼有肌动蛋白相关调节和肌球蛋白相关调节．

基于BDNF-TrkB/proBDNF-p75^(NTR)信号通路探讨电针治疗脊髓损伤的分子机制

电针治疗脊髓损伤可以显著提高脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(tropomyosin-receptor kinase,TrkB)蛋白的表达,下调p75神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75^(NTR))蛋白的表达。电针可以通过提高BDNF促进神经元的存活、促进受损纤维的再生、促进神经可塑性、促进髓鞘形成BDNF基因修饰的成纤维细胞。BDNF诱导的TrkB信号可能通过四种主要的细胞内途径影响突触可塑性、轴突生长、存活和细胞内阳离子平衡:(1)经磷脂酰-3激酶(P1-3K)/Akt通路促进神经元树突分枝和树突棘生成,影响突触生长和结构形成。(2)受体诱导小分子GTP酶Ras的激活,经过一系列复杂的磷酸化过程,最终激活许多细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated Kinase,ERK)途径并对环腺苷3′,5′-单磷酸含量进行调节促进轴突生长。(3)经磷脂酶C-γ(Phospholipase C-γ,PLC-γ)/肌醇3-磷酸(inositol triphosphate,IP-3)通路参与Ca^(2+)的调控,促进Ca^(2+)从细胞内储存释放,促进突触可塑性等。(4)此外通过N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体的磷酸化,TrkB信号可能导致钙和钠内流的增加。故电针治疗脊髓损伤,可使BDNF与TrkB高亲和力结合,促进脊髓损伤的修复。其可能是通过激活BDNF-TrkB信号通路,抑制BDNF前体(brain-derived neurotrophic factor precursor,proBDNF)-p75^(NTR)信号通路来实现对神经的再生修复。

基于2-Cl-MGV-1/BDNF-TrkB通路探讨脑梗死后认知功能改善的研究

目的基于2-(2-氯苯基)喹唑啉-4-基二甲基氨基甲酸酯(2-Cl-MGV-1)/脑源性神经营养因子(BDNF)-原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)通路探讨脑梗死后认知功能改善的研究。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组20只,分别为对照组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和2-Cl-MGV-1组。除对照组外,其他组建立MCAO模型,2-Cl-MGV-1组在模型建立后采用2-Cl-MGV-1治疗,连续给药7 d。评估各组大鼠脑梗死面积、空间学习记忆障碍、线粒体损伤和BDNF/TrkB信号通路。体外将PC12神经元细胞系分为以下3组:对照(Con)组、氧气和葡萄糖剥夺/再灌注模型(OGD/R)组和2-Cl-MGV-1组。除Con组,其他组建立OGD/R模型,2-Cl-MGV-1组加入25μmol/L 2-Cl-MGV-1处理细胞24 h。通过CCK-8评估细胞活力。结果与MCAO组相比,2-Cl-MGV-1组梗死面积显著减少(P<0.05),和尼氏体的数量显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组大鼠的逃避潜伏期显著增加(P<0.001),而2-Cl-MGV-1组的逃避潜伏期显著低于MCAO组(P<0.01)。在第7天,MCAO组大鼠穿过平台的次数显著低于对照组(P<0.001),而2-Cl-MGV-1组大鼠穿过平台的次数较MCAO组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组皮质中的线粒体膜电位和ATP产量显著降低(P<0.01),而2-Cl-MGV-1组线粒体膜电位和ATP产量较MCAO组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,MCAO组大鼠皮层神经元中的BDNF、TrkB蛋白水平显著增加(P<0.05),并且2-Cl-MGV-1组BDNF、TrkB蛋白水平显著高于MCAO组(P<0.05)。与Con组相比,OGD/R组细胞活力和ATP产量显著降低(P<0.05),而2-Cl-MGV-1组细胞活力和ATP产量较OGD/R组显著增加(P<0.05)。与Con组相比,OGD/R组PC12细胞中BDNF、TrkB蛋白水平显著增加(P<0.05),并且2-Cl-MGV-1组BDNF、TrkB蛋白水平显著高于MCAO组(P<0.05)。结论2-Cl-MGV-1对MCAO诱导的大鼠脑缺血/再灌注损伤具有线粒体保护作用,并改善大鼠的认知功能。2-Cl-MGV-1可能通过调节BDNF/TrkB信号通路发挥神经保护作用。

右美托咪定对抑郁症大鼠行为及海马BDNF和mTOR蛋白表达的影响

目的:观察右美托咪定(DEX)对抑郁症大鼠行为及海马脑源性神经营养因子(BDNF)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响并探讨其机制。方法:实验设5组,即假手术(sham)组、抑郁症模型(model)组及DEX(2.5、5和10μg/kg)组,每组12只大鼠。抑郁症动物模型采用卵巢摘除加慢性不可预知性温和应激法制备。DEX各剂量组大鼠连续腹腔注射给药21 d。强迫游泳及旷场实验观察大鼠行为变化。Morris水迷宫实验评价大鼠空间学习和记忆能力。海马神经元病理变化采用尼氏染色法检测。大鼠海马白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达水平采用RT-qPCR法检测。Western blot检测海马IL-1β、IL-6、TNF-α和BDNF蛋白表达水平及蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和mTOR蛋白的磷酸化水平。结果:与model组相比,DEX各剂量组大鼠强迫游泳不动时间明显降低,自发活动明显增加,逃避潜伏期明显降低,穿越平台次数明显增加(P<0.05或P<0.01),海马神经元损伤显著减轻,IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平明显降低,PKA、CREB及TrkB的磷酸化水平和BDNF表达水平均明显升高,同时PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白磷酸化水平明显上调(P<0.01)。结论:右美托咪定可改善抑郁症大鼠行为及空间学习和记忆能力,其机制可能与其抗炎、调节海马BDNF蛋白表达及TrkB磷酸化水平、进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

夹脊穴埋线对大鼠脊髓损伤后自噬及BDNF/TrkB通路的调控作用

目的观察夹脊穴埋线通过调控脑源性神经营养因子(BDNF)/原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)信号通路对大鼠脊髓损伤后自噬的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和穴位埋线组,每组20只。模型组和穴位埋线组大鼠采用重物坠落法建立脊髓损伤模型,穴位埋线组于造模成功后取夹脊穴给予简易埋线,每7 d埋线1次,模型组不予干预。分别于实验第7天、第28天,应用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分和斜坡实验评估大鼠的运动功能和平衡功能,ELISA法检测血清中炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)]水平,免疫组织化学染色观察脊髓组织中BDNF的阳性表达情况,Western blot法检测脊髓组织中自噬标记蛋白(Beclin-1、LC3-B)和BDNF/TrkB通路蛋白(BDNF、TrkB、p-TrkB)的表达情况,RT-PCR法检测脊髓组织中BDNF、p-TrkB mRNA表达情况。结果实验第7天、第28天,与假手术组比较,模型组大鼠BBB评分及斜坡实验角度均明显降低(P均<0.05),血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显升高(P均<0.05),脊髓组织中BDNF阳性细胞数和Beclin-1、LC3-B、BDNF、p-TrkB蛋白相对表达量及BDNF、p-TrkB mRNA相对表达量均明显增加(P均<0.05);与模型组比较,穴位埋线组大鼠BBB评分及斜坡实验角度均明显升高(P均<0.05),血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显降低(P均<0.05),脊髓组织中BDNF阳性细胞数和Beclin-1、LC3-B、BDNF、p-TrkB蛋白相对表达量及BDNF、p-TrkB mRNA相对表达量均明显增加(P均<0.05)。结论夹脊穴埋线可激活大鼠脊髓损伤后自噬活动,促进运动和神经功能恢复,其机制与激活BDNF/TrkB通路,提高BDNF活性和TrkB磷酸化水平相关。

脑卒中后抑郁大鼠海马、丘脑组织中BNDF、TrkB的表达变化及意义

目的观察脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马、丘脑组织中BDNF及其高亲和力受体原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)的表达变化,并探讨其意义。方法将32只大鼠随机分为正常组、抑郁组、卒中组及PSD组各8只。正常组不干预;抑郁组采用孤养法制作抑郁模型;卒中组及PSD组采用线栓法致局灶性脑缺血(卒中);PSD组加慢性不可预见的中等应激刺激和孤养法制作PSD模型。采用RT-PCR法检测各组大脑海马及丘脑组织中的BNDF mRNA和TrkB mRNA。结果 PSD组海马BNDF mRNA、丘脑TrkB mRNA表达均明显低于对照组(P均<0.05);其余各组海马BNDF mRNA表达、丘脑TrkB mRNA表达比较均无统计学差异。结论 PSD大鼠海马、丘脑组织中BDNF及TrkB表达降低,二者可能参与了PSD的发病。

脑源性神经营养因子及其受体原肌球蛋白相关激酶B在肝癌组织中的表达以及对肝癌细胞97-H凋亡和侵袭作用的影响

目的:研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受体原肌球蛋白相关激酶B(Tropomyosin-related kinase B,TrkB)在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,并探讨2者在HCC发生、发展中的作用。方法:采用蛋白质印迹法检测BDNF和TrkB蛋白在30例HCC和癌旁组织中的表达情况。采用ELISA法检测BDNF在人HCC细胞系97-H培养液上清中的浓度;FCM和Transwell小室法分别检测抗BDNF抗体或TrkB激酶活性抑制剂K252a对细胞凋亡和侵袭的影响。结果:30例配对组织标本中,BDNF和TrkB在HCC组织中的表达水平高于癌旁组织(P均<0.05)。BDNF在97-H细胞培养液上清中的表达量为(119.08±6.21)pg/mL。抗BDNF抗体或K252a都能有效诱导97-H细胞的凋亡,并抑制细胞的侵袭能力。结论:BDNF/TrkB可能对HCC细胞的存活和侵袭具有重要的支持作用,并促进HCC的发生及发展。

MYO9B基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病及其临床表型的关联性分析

目的:探讨肌球蛋白9B(MYO9B)基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病及其临床表型的关系,阐明精神分裂症发病的遗传学机制。方法:收集了427例中国北方汉族人群精神分裂症患者与439名健康对照者全血样品,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测MYO9B基因rs2279007、rs8113494和rs1545620位点基因型和等位基因型。应用拟合优度χ2检验分析精神分裂症病例组和健康对照组研究对象各单核苷酸多态性(SNPs)位点的基因型频数分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律,各SNPs位点等位基因和基因型频数与精神分裂症及各种临床表型的关联性分析采用χ2检验。结果:病例组MYO9B基因各SNP位点等位基因、基因型频数分布与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);临床表型分析,rs2279007位点基因型频数与幻觉妄想综合征有关联(χ2=4.160,P=0.041);rs1545620位点基因型频数与意志缺乏有关联(χ2=10.768,P=0.013)。结论:MYO9B基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病无关联,但可能与精神分裂症患者幻觉妄想综合征和意志缺乏的临床表型有关联。

督脉电针联合重复经颅磁刺激对脊髓损伤后大鼠脊髓BDNF及其受体TrkB和p75^(NTR)表达的影响

目的:观察电针联合重复经颅磁刺激对脊髓损伤(SCI)大鼠行为学、神经营养因子BDNF及其受体TrkB和p75^(NTR)表达的影响,探索电针联合重复经颅磁刺激治疗SCI的可能机制。方法:将120只清洁级SD大鼠随机分为空白组(12只)、假手术组(12只)、模型组(24只)、电针组(24只)、经颅磁刺激组(24只)和联合组(24只)。模型组、电针组、经颅磁刺激组及联合组再按干预1 d、7 d分为2个亚组,每个亚组12只。并采用改良式Allen’s打击装置制备大鼠SCI模型。空白组不做任何处理;假手术组只暴露脊髓,不打击;电针组穴取“大椎”和“命门”;经颅磁刺激组应用90%静息运动阈值;联合组用电针加经颅磁刺激治疗。1 d组于造模清醒后治疗1次,7 d组于1 d组同一时间每天重复治疗1次。采用BBB评分评定大鼠脊髓损伤后的功能;HE染色法观察脊髓组织病理形态改变;免疫组织化学法、Western blot法检测脊髓组织BDNF、TrkB及p75^(NTR)蛋白表达。结果:BBB评分结果显示,与空白组比较,1 d、7 d模型组BBB评分均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);7 d时:与模型组和经颅磁刺激组比较,电针组和联合组BBB评分显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,联合组BBB评分显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。在HE染色中,干预1 d,可见模型组及各干预组脊髓组织结构被破坏,组织坏死,分界不清,中央管结构紊乱,红细胞大量聚集明显的空泡等;干预7 d,各组出血减少,电针组、联合组较模型组组织结构更加完整、空洞减少。免疫组织化学法及Western blot法结果显示,与空白组比较,1 d、7 d模型组BDNF、TrkB蛋白表达均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);7 d时:与模型组和经颅磁刺激组比较,电针组和联合组大鼠脊髓组织中BDNF、TrkB蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,联合组大鼠脊髓组织中BDNF、TrkB蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,1 d、7 d模型组p75^(NTR)蛋白表达量均显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05);7 d时:与模型组和经颅磁刺激组比较,电针组和联合组p75^(NTR)蛋白表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,联合组p75^(NTR)蛋白表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:督脉电针联合重复经颅磁刺激可改善脊髓损伤大鼠神经功能损伤症状,其机制可能与上调脊髓中BDNF、TrkB以及下调了p75^(NTR)的表达有关。电针相对单纯经颅磁刺激在大鼠早期干预中效果更好,联合治疗对比单纯电针的效果更显著。

白蒺藜皂苷对2型糖尿病大鼠视网膜的保护作用及TrkB信号通路的影响

目的探讨白蒺藜皂苷对2型糖尿病大鼠视网膜的保护作用及TrkB信号通路的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为对照组、模型组、二甲双胍组、白蒺藜皂苷低、高剂量组,每组20只。模型组、二甲双胍组、白蒺藜皂苷低、高剂量组腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素诱导糖尿病视网膜病变模型;建模成功后,二甲双胍组给予二甲双胍20 mg/kg腹腔灌胃,白蒺藜皂苷低、高剂量组分别给予白蒺藜皂苷20、40 mg/kg腹腔灌胃,对照组和模型组给予等体积的生理盐水。测定5组大鼠血糖及视网膜组织伊凡斯兰渗透量、神经节细胞凋亡水平、脑源性神经营养因子(BDNF)和p-TrkB mRNA及蛋白水平。结果与对照组比较,模型组血糖、视网膜组织伊凡斯兰渗透量、神经节细胞凋亡水平升高,BDNF、p-TrkB mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组比较,二甲双胍组、白蒺藜皂苷低、高剂量组血糖、视网膜组织伊凡斯兰渗透量水平、神经节细胞凋亡水平降低,BDNF、p-TrkB mRNA和蛋白水平升高(P<0.01)。与二甲双胍组比较,白蒺藜皂苷低、高剂量组血糖、视网膜组织伊凡斯兰渗透量、神经节细胞凋亡水平升高,BDNF、p-TrkB mRNA和蛋白水平降低(P<0.05)。白蒺藜皂苷高剂量组血糖、视网膜组织伊凡斯兰渗透量、神经节细胞凋亡水平低于白蒺藜皂苷低剂量组,BDNF、p-TrkB mRNA和蛋白水平高于白蒺藜皂苷低剂量组(P<0.01)。结论白蒺藜皂苷能降低2型糖尿病大鼠血糖水平,对视网膜具有保护作用,其机制与白蒺藜皂苷能促进2型糖尿病大鼠视网膜BDNF、p-TrkB mRNA和蛋白高表达,进而激活TrkB信号通路相关。

肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察

目的:观察非肌肉肌球蛋白重链ⅡB(nonmuscle myosin heavy chainⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TN-FR1)转位的影响。方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染入HUVECs,筛选获得稳定克隆株。设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,si RNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFα诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR1蛋白含量的变化。结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB si RNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2)∶(0.454 0±0.041 1),P<0.01],也可以明显减少TNFα诱导前[(0.430 6±0.028 9)∶(0.324 8±0.016 7),P<0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]细胞质膜TNFR 1的含量。在转染NMHC-ⅡB si RNA的细胞,TNFα的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7)∶(0.492 2±0.021 7),P<0.01]。结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用,但是可能并不是惟一的或决定性的因素。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B羧基端多肽单克隆抗体的制备及鉴定

为了得到能够特异性识别非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B(NMHCⅡ-B)的单克隆抗体,根据Marc-145细胞上NMHCⅡ-B羧基端的蛋白质序列,合成多肽,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选阳性克隆;制备腹水并纯化;用间接ELISA和间接免疫荧光试验检测纯化抗体的特异性。结果显示,获得2株能稳定传代并分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系;单克隆抗体的特异性鉴定显示,2株细胞系所产生的抗体能够特异性地与NMHCⅡ-B羧基端蛋白反应而且能与Marc-145细胞产生特异性的结合。这2株单抗的制备及鉴定为研究易感细胞上NMHCⅡ-B与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的关系奠定了基础。

低氧预适应下DNA甲基化调控BDNF和TrkB受体的研究进展

低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)是指机体在经历一次或多次短暂、非致死性低氧刺激后,获得的对更严重甚至致死性低氧/缺血刺激的耐受性,被认为是机体抗低氧/缺血的一种内源性保护现象[1]。虽然HPC可以明显减轻组织、器官尤其是神经系统的低氧/缺血损伤并产生保护作用[2-3],但其分子机制还不甚清楚。

颅脑损伤后BDNF及其小分子模拟物的治疗潜力

颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是一个全球性的公共卫生问题[1],是全球死亡、致残的主要原因.TBI是由外力所致的脑功能的损失或改变.原发性损伤指外部损害导致细胞立即死亡,继发性损伤是原发性损伤周围区域的一系列生物化学变化的结果,进一步导致记忆、认知等功能缺陷.

ANA-12通过靶向阻断BDNF/TrkB信号通路降低大鼠的脊髓炎症和缓解病理性疼痛

目的探讨ANA-12靶向阻断脑源性神经营养因子(BDNF)/原肌球蛋白受体激酶B(TrkB)信号对炎症痛的抑制作用及机制。方法将42只大鼠随机分为7组(6只/组):BDNF处理下的对照组、ANA-12处理组、BDNF处理组以及BDNF和ANA-12联合处理组(BDNF+ANA-12);炎症痛模型下的对照组、CFA处理组以及CFA和ANA-12联合处理组(CFA+ANA-12)。给药完毕后,对各组大鼠进行痛觉行为学检测,记录ANA-12处理对BDNF-急性痛和CFA-慢性炎症痛大鼠痛觉行为的影响;采用免疫印迹法检测各组大鼠脊髓组织TrkB信号、小胶质细胞标记蛋白Iba1和促炎细胞因子TNF-α以及炎症因子IL-1β、Caspase-1、NLRP3的表达水平。结果与对照组相比,BDNF增加自发缩足次数(P<0.05);与BDNF组相比,ANA-12降低自发缩足次数(P<0.05)。与对照组相比,CFA增加同侧机械刺激敏感性(P<0.05);与CFA组相比,ANA-12增加同侧缩足阈值(P<0.05)。与对照组相比,BDNF和CFA增加磷酸化TrkB(Y705)水平(P<0.05);与BDNF或CFA组相比,ANA-12降低TrkB(Y705)磷酸化水平(P<0.05)。与对照组相比,BDNF和CFA上调Iba1、TNF-α以及炎症因子表达(P<0.05);与BDNF或CFA组相比,ANA-12降低Iba1、TNF-α以及炎症因子表达水平(P<0.05)。结论ANA-12靶向阻断BDNF/TrkB信号可降低脊髓炎症并缓解急性痛和慢性痛。

纳米磁珠联合质谱技术筛选大肠癌患者血清特异性蛋白标志物

目的：通过纳米磁珠联合质谱技术筛选并鉴定大肠癌患者特异性蛋白标志物及在大肠癌早期诊断中的意义。方法采用弱阳离子纳米磁珠联合MALDI-TOF-MS质谱技术分析102例大肠癌患者和124例健康对照者血清蛋白表达谱，并建立蛋白分类模型，采用LCQ液质联用质谱（LC-MS）技术鉴定已筛选出的特异性蛋白，并用该模型在双盲模式下从使用未建立模型的其它样本中选取59例大肠癌血清标本（Dukes A、B、C期各33例、18例和8例）和正常体检者90例进行检测以验证其诊断的准确性。结果大肠癌组与健康对照组间有8个蛋白表达存在明显差异（P〈0.05），其中大肠癌患者中有3个蛋白质高表达。差异蛋白质峰[质荷比（m/z）2963.17、4095.13、5906.83和38146.5]为最佳的大肠癌患者血清学诊断模型，敏感性为82.3%，特异性为90.3%，阳性预测值为90.3%，ROC曲线下面积为0.922。在双盲模式下的诊断准确率为89.83%，排除率为94.44%。其差异蛋白峰和大肠癌的分期无明显相关。LC-MS成功鉴定到m/z 2963.17（myosin-7B）、m/z 5906.83（Myoferlin）。结论纳米磁珠联合质谱技术对大肠癌患者血清学诊断具有较高灵敏度和特异性，并通过LCQ液质联用质谱成功鉴定到的myosin-7B和Myoferlin可能有助于大肠癌的早期诊断。