骨骼肌C2C12细胞培养分化及肌纤维类型鉴定

目的建立体外骨骼肌细胞培养分化与肌纤维鉴定技术模型。方法取骨骼肌C2C12细胞,用含20 mL/L马血清的高糖DMEM培养基调节细胞浓度为5×104/mL,在孵育箱内分化培养成肌管细胞。采用免疫荧光技术检测肌细胞生成素(myogenin)的表达。在C2C12细胞成功分化为肌管细胞后分为内脏脂肪素(visfatin)刺激组(给予25 ng/mL visfatin刺激48 h)和对照组(不以visfatin刺激),分别采用RT-PCR与Western blotting技术检测肌球蛋白重链(MHC)亚型(MHC-Ⅰ、MHC-ⅡA和MHC-ⅡB)的相对表达量,并计算Ⅰ型纤维/Ⅱ型纤维的比例。结果骨骼肌C2C12细胞分化前呈梭形,单核伴多个核仁,分化时逐渐变长,形成肌管,细胞核为多核,呈串珠样排列。免疫荧光显示myogenin表达于细胞核中,验证了C2C12细胞的分化潜能。RT-PCR和Western blotting检测均显示所培养的骨骼肌C2C12细胞在马血清诱导分化成肌管细胞后,具有表达3种MHC亚型mRNA和蛋白的能力,visfatin刺激组3种MHC亚型的mRNA和蛋白的表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和visfatin刺激组的Ⅰ型纤维/Ⅱ型纤维比例分别为0.63和0.60。结论骨骼肌C2C12细胞模型可用于肌纤维分化及类型鉴定,并能对低浓度visfatin刺激产生有效反应,为后续visfatin引起上气道肌肉塌陷的机制研究奠定了基础。