肌细胞增强因子2A基因P279L变异与冠心病的关系

目的:探讨肌细胞增强因子2A基因P279L变异是否与冠心病相关。方法:选择西北地区汉族人385例,采用酚氯法提取全基因组DNA,应用聚合酶链式反应、限制性内切酶反应体系结合测序的方法检测MEF2A基因多态性。结果:冠心病组L、P等位基因的频率分别为16.53%和83.47%;对照组L、P等位基因的频率分别为5.48%和94.52%,MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布存在显著性的差异(P<0.01),而且L等位基因的分布频率在冠心病组显著高于对照组(P<0.01)。结论:MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布有显著性差异,与冠状动脉病变的严重程度显著相关,L等位基因的携带者冠心病发病率显著高于非携带者,而且冠脉的病变更为严重。

肌细胞增强因子2A基因P279L变异对eNOS的影响

目的:探讨肌细胞增强因子2A基因P279L变异对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响。方法:选自西北地区385名汉族人,采用酚氯法提取全基因组DNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中eNOS。结果:在MEF2A-P279L的PP、PL、LL的3种基因型中,eNOS水平差异有统计学意,LL型eNOS水平明显低于LP型和PP型,PL型100.35±12.61pg/ml与PP型103.28±13.35pg/ml差异无统计学意义(P>0.05),但eNOS水平成上升趋势。结论:MEF2AP279L变异影响eNOS水平,L等位基因可能具有致动脉粥样硬化的作用。

阿托伐他汀对肌细胞增强因子2A基因突变型血管平滑肌细胞的作用

目的观察阿托伐他汀对肌细胞增强因子2A(MEF2A)基因突变型血管平滑肌细胞(VSMC)的作用。方法将人主动脉血管平滑肌细胞分为3组:①WT组,转染野生型(WT)MEF2A质粒;②△21组,转染21碱基缺失突变型(△21)MEF2A质粒;③阿托伐他汀组,转染MEF2A△21质粒,并在实验前向该组细胞培养基中加入阿托伐他汀溶液至终浓度100μmol.L-1。通过溴化噻唑基蓝四唑(MTT)法和Millicell小室观察VSMC的增殖和迁移变化,免疫印迹(Western blotting)检测VSMC内平滑肌α肌动蛋白、SM22α、骨桥蛋白、p38和ERK1/2丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路表达差异。结果 MEF2A基因△21突变可促进VSMC增殖、迁移和表型转化。而阿托伐他汀可抑制这些变化,并且明显下调磷酸化p38和ERK1/2信号通路表达。结论阿托伐他汀通过作用于p38和ERK1/2MAPK信号通路,以抑制MEF2A基因突变诱导的VSMC增殖、迁移和表型转化。

心肌细胞增强因子2A基因与血管内皮功能

在脊椎动物中，心肌细胞增强因子2（myoeyte enhancer factor-2，MEF2）家族成员包括4种转录因子MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D，连同某些特定的剪接变异体，最初称为肌细胞特定DNA结合蛋白，突出的功能是控制肌细胞分化过程中的基因转录。然而，最近的一些研究表明，MEF2蛋白还在多种细胞的信号传导、激活遗传程序、控制细胞分化、增殖、细胞形态学、生存和凋亡等方面发挥重要的作用。

肌细胞增强因子2A基因与冠心病相关性的研究进展

冠心病的遗传因素尚不明确,肌细胞增强因子2A基因突变可能与冠心病有关。但此基因与冠心病之间相关机制仍不清楚,本文就肌细胞增强因子2A基因与冠心病相关性的最新研究进展作一综述。

人肌细胞增强因子2A基因病毒载体构建及嗜铬细胞瘤PC12稳转细胞系的建立和鉴定

目的构建表达肌细胞增强因子2(MEF2)A基因的反转录病毒载体,并观察稳定感染嗜铬细胞瘤PC12细胞后MEF2A蛋白的表达情况。方法用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA3-MEF2A-flag质粒,得到MEF2-flag基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化后获取反转录病毒颗粒。将反转录病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出。采用Western印迹法检测MEF2-flag的表达情况。结果连接重组后经酶切和测序筛选出pBabe-MEF2A-flag。转染pBabe-MEF2A-flag的PC12的细胞组中MEF2A的含量为2.03±0.06,显著高于空载体对照组的1.00±0.04(P<0.01)。结论成功构建pBabe-MEF2A-flag反转录病毒载体,并建立了其稳定转染的PC12细胞系。

肌细胞增强因子2A基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响

目的:构建肌细胞增强因子2A(MEF2A)基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞增殖能力的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-QPCR)检测MCF-7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中MEF2A mRNA的表达。采用全基因合成法合成MEF2A编码区序列,克隆入pcDNA3.1(+)-HA载体,构建重组质粒pcDNA3.1-MEF2A-HA。重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot及RT-QPCR检测MEF2A的表达效率。细胞计数实验检测细胞的增殖能力。结果:3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中MEF2A mRNA表达水平较低;其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明MEF2A重组质粒构建成功。将MEF2A重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,MEF2A表达质粒组与对照组比较,其MEF2A表达升高,细胞增殖能力增强。结论:成功构建MEF2A过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达MEF2A促进细胞的增殖能力。

骨髓间充质干细胞向心肌细胞诱导过程中脉动电流刺激对肌细胞增强因子2C基因表达的影响

背景:一些研究发现电刺激可以改变成熟心肌细胞的分布和电生理特性,其是否对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程产生影响目前还不清楚。目的:在诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化过程中,观察低压脉动电刺激对肌细胞增强因子2C基因表达的影响。设计、时间及地点:对比观察电刺激细胞学体外实验,于2005-09/2007-03在四川大学老年病研究室完成。材料:清洁级4周龄雄性SD大鼠5只,由四川大学华西医学中心动物实验室中心提供。诱导剂5-氮胞苷为Sigma产品。使用一次性100mL培养瓶、镍钛合金金属丝、心脏起搏器和连接导线设计制作电场。方法:密度梯度离心+贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代按1×107L-1接种到电场内,细胞爬满80%后,加入终浓度为10μmol/L5-氮胞苷进行诱导。分别于诱导第1,2,3,4周收集细胞,分为2组:刺激组施加电场刺激,刺激参数选择1.5V/cm电压,2ms方波,频率1Hz,刺激2周;对照组单纯以5-氮胞苷诱导。主要观察指标:免疫细胞化学法和westernblot技术检测肌钙蛋白I表达,RT-PCR法分析肌细胞增强因子2C基因的表达。结果:诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周两组均开始出现肌钙蛋白I阳性细胞,第3、4周明显增强,诱导各时间点刺激组肌钙蛋白I表达量均显著高于对照组(P<0.05)。诱导第1周两组均开始表达肌细胞增强因子2C基因,第2周明显增强,第3周达高峰,持续到第4周,诱导各时间点刺激组肌细胞增强因子2C基因的表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:肌细胞增强因子2C基因可能参与调控心肌细胞的形成过程,而电场刺激通过上调肌细胞增强因子2C基因的表达,进而促进肌钙蛋白I的表达和心肌细胞的形成。

肌细胞增强因子2B基因在人和动物中的研究进展

肌细胞增强因子2B(MEF2B)基因属于肌细胞增强因子2(MEF2)基因家族成员,广泛表达于人和动物的肌肉和神经组织中,在肌肉生成、神经系统发育和分化、肝脏纤维化等方面具有重要的作用,作者从MEF2B基因的结构、组织分布、生物学功能及研究进展等方面对该基因进行了综述。

乙酰化肌细胞增强因子2D调节Nur77基因对T细胞凋亡的影响

目的:Nur77是介导T细胞凋亡的重要基因,它的激活需要第二信使钙离子,而Nur77基因启动子的钙反应元件是转录因子肌细胞增强因子2D的结合位点。探讨在Nur77诱导T细胞凋亡过程中肌细胞增强因子2D是否可以被乙酰化,以及通过调节Nur77基因乙酰化对T细胞凋亡的影响。方法:实验于2006-11/2007-09在吉林大学第一医院血液肿瘤科完成。①材料:大肠杆菌DH5α、pcDNA3质粒由吉林大学第一医院中心研究室保存。pET32M质粒、Flag-p300质粒、pSilencerTM-p300RNAi质粒由香港科技大学Zhengguo Wu博士馈赠。NFATp质粒由哈佛大学Yun Chen博士馈赠。Jurkat细胞由吉林大学第一医院血液肿瘤科提供。②实验方法:PCR法产生全长的Nur77和依赖Nur77的荧光报告基因被亚克隆到pcDNA质粒中,产生的肌细胞增强因子2D(1-514)、(1-121)、(1-300)、(301-514)各片段以及含4个赖氨酸(K245/K250/K267/K279)位点突变为精氨酸位点的肌细胞增强因子2D(4KR)突变体亚克隆到pcDNA后在氨基端含有Flag抗原簇,于细菌表达载体上进行质粒构建,验证正确的质粒使用脂质体DMRIE-C进行转染。③实验评估:将Nur77荧光报告基因与肌细胞增强因子2D、p300、NFATp共转染到Jurkat细胞中,检测p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77转录的影响。免疫沉淀法检测内源性肌细胞增强因子2D是否能够被乙酰化,以及阻滞p300表达后是否影响其乙酰化。体外乙酰化法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化位点。荧光素报告分析法检测肌细胞增强因子2D的乙酰化功能缺失对Nur77转录活性的影响。采用流式细胞仪检测其功能缺陷对Nur77诱导T细胞凋亡的影响。结果:①肌细胞增强因子2D与NFATp的二聚体虽然不能促进Nur77的转录,但p300、NFAT、肌细胞增强因子2D的三聚体却能明显促进Nur77的转录,且p300与肌细胞增强因子2D的二聚体也明显促进Nur77的转录。②PMA/Iono活化钙信号传导通路后,肌细胞增强因子2D被乙酰化。当内源性p300RNAi后,p300的表达被阻滞时,肌细胞增强因子2D的乙酰化水平显著下降。③K245,K250,K267,K279氨基酸同时突变可以使肌细胞增强因子2D乙酰化程度大部分丧失,说明在体外这4个赖氨酸位点是肌细胞增强因子2D的主要乙酰化位点。④与空载体比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D可使Nur77转录功能提高2.48倍;与转染野生型的肌细胞增强因子2D比较,转染乙酰化缺陷的肌细胞增强因子2D能降低Nur77基因70.4%的转录功能。⑤与空载体比较,Nur77表达能够促进T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从4.3%提高至16.3%;共表达野生型肌细胞增强因子2D与Nur77能够进一步促进T细胞的凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%提高到31.0%;但肌细胞增强因子2D乙酰化功能缺失的突变体肌细胞增强因子2D明显降低Nur77介导的T细胞凋亡,早晚期凋亡之和从16.3%降低到9.2%。结论:p300对肌细胞增强因子2D促进Nur77的转录起主要作用。肌细胞增强因子2D在Nur77诱导的T细胞凋亡过程中可以被乙酰化,乙酰化的肌细胞增强因子2D通过上调Nur77基因的转录来促进T细胞凋亡。

肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移

目的观察肌细胞增强因子2D(myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6(mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图;用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK)和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力;用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照(negative control,NC)组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M(同时下调MIG6和MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系(r=-0.78)。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化;同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化72 h时,各组间方差分析差异有统计学意义(F=20.68、P<0.01);下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度(optical density,OD)值为3.73±0.18,t=3.84、P=0.02];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降(OD=1.79±0.22,t=3.95、P=0.02);同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强(OD=2.99±0.03,t=4.83、P<0.01)细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义(F=42.27、P<0.01);48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为(51±4)%,t=3.22、P<0.05)];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为(19±3)%,t=7.70、P<0.01];同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞迁移能力增强[细胞迁移率为(46±3)%,t=6.99、P<0.01]。蛋白质印迹检测,下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞M1G6蛋白表达水平显著上升(t=7.86、P<0.001);上调MEF2D后,与空载对照组比较,MEF2D组中SMMC7721细胞MIG6蛋白表达水平显著下降(t=4.61、P=0.004)。结论肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721中MEF2D和MIG6表达量呈负相关关系,MEF2D很可能通过负向调控MIG6的表达从而促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移。

下调肌细胞增强因子2C基因对动脉粥样硬化血管内皮细胞增殖凋亡及核因子-κB信号通路的影响

目的探讨下调肌细胞增强因子(MEF) 2C基因对动脉粥样硬化(AS)血管内皮细胞增殖凋亡及核因子(NF)-κB信号通路的影响及机制。方法 Western印迹检测AS患者斑块组织和正常对照组MEF2C的蛋白表达;将MEF2C的特异性siRNA(si-MEF2C)及阴性对照siRNA(NC)转染人脐静脉血管内皮(ECV)-304细胞,Western印迹检测转染效果。ECV-304细胞经H_2O_2处理后转染si-MEF2C,细胞分为NC组、H_2O_2组、H_2O_2+si-MEF2C组和正常对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平; Western印迹检测核因子(NF)-κB p65、NFkappa B激酶抑制剂(IKK)α、增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达。结果 AS患者斑块组织MEF2C蛋白表达显著高于正常对照组(P<0. 05); MEF2C的特异性siRNA转染ECV-304细胞后MEF2C蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05)。H_2O_2组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著低于NC组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著高于NC组(P<0. 05),而H_2O_2+si-MEF2C组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著高于H_2O_2组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著低于H_2O_2组(P<0. 05)。结论下调AS血管内皮细胞MEF2C基因表达可提高细胞活力,抑制细胞凋亡,机制可能是细胞内ROS水平降低及NF-κB信号通路的下调。

细胞因子与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用

构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细胞 ,均可在体外表达E2 抗原和有生物活性的IL 2、IL 3两种质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒 pIRST强。试验表明 ,细胞因子与目的基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。

肌细胞增强因子2A与肝星状细胞活化关系的体内实验研究

背景:转录调控在肝星状细胞(HSC)活化过程中起重要作用,研究显示转录因子肌细胞增强因子2(MEF2)参与了HSC的活化过程。目的:探讨肝纤维化形成过程中MEF2家族成员MEF2A与HSC活化的关系。方法:实验开始时处死6只大鼠作为0周对照组,64只大鼠随机分为正常对照组和肝纤维化模型组。模型组大鼠皮下注射60%CCl_4(0.3 ml/100 g,每周2次)复制肝纤维化模型;正常对照组大鼠与模型组于相同条件下饲养,不予任何处理。造模开始后3、6、9、12周分批处死大鼠,取肝组织,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MEF2A mRNA表达,蛋白质印迹法检测MEF2A蛋白和HSC活化标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Van Gieson染色定量分析肝内胶原含量。结果:正常肝组织中仅有少量MEF2A mRNA和蛋白表达;随着肝纤维化的形成,肝组织MEF2A mRNA和蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),MEF2A与α-SMA蛋白表达呈正相关(r=0.88,P<0.05)。肝内胶原含量随肝纤维化的形成呈递增趋势(P<0.01)。结论:MEF2A参与了CCl_4诱导的大鼠肝纤维化形成过程中HSC的活化和增殖。

miR-429靶向肌细胞增强因子2D调控Hippo/YAP信号通路对舌鳞癌细胞的影响

目的肌细胞增强因子2D(MEF2D)对舌鳞癌发生发展的影响及miR-429能否靶向MEF2D影响舌鳞癌的发生发展尚未阐明。文中旨在探究miR-429和MEF2D对舌鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及miR-429能否靶向MEF2D发挥作用。方法收集2017年4月至2019年10月赣南医学院第一附属医院口腔科33份舌鳞癌患者的组织及癌旁组织标本。RT-qPCR法检测组织中miR-429和MEF2DmRNA的表达,Pearson相关性分析舌鳞癌组织中miR-429和MEF2D mRNA表达的相关性。体外培养舌鳞癌细胞,分别转染miR-NC(miR-NC组)、miR-429 mimics(miR-429组)、si-NC(si-NC组)、si-MEF2D(si-MEF2D组)、pcDNA(pcDNA组)、pcDNA-MEF2D(pcDNA-MEF2D组)、共转染miR-429 mimics与pcDNA-MEF2D(miR-429+pcDNA-MEF2D组)、对照组(不进行任何转染),采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测细胞中MEF2D及Hippo/YAP信号通路相关蛋白p-YAP的表达。构建MEF2D野生型荧光素酶报告基因载体(wt-MEF2D)和突变型荧光素酶报告基因载体(mut-MEF2D),分别共转染miR-429 mimics与wt-MEF2D(miR-429+wt-MEF2D组)、miR-NC与wt-MEF2D(miR-NC+wt-MEF2D组)、miR-429 mimics与mut-MEF2D(miR-429+mut-MEF2D组)、miR-NC与mut-MEF2D(miR-NC+mut-MEF2D组)至舌鳞癌细胞。双荧光素酶报告基因实验验证miR-429和MEF2D调控关系。结果舌鳞癌组织中miR-429的表达低于癌旁组织(P<0.05),而MEF2D mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.05),且舌鳞癌组织中miR-429和MEF2DmRNA的表达呈负相关(r=-0.992,P<0.05)。miR-429组舌鳞癌细胞中miR-429的表达高于对照组、miR-NC组(P<0.05)。与对照组、miR-NC组比较,miR-429组舌鳞癌细胞A值、集落形成数和迁移距离、MEF2D蛋白表达显著降低(P<0.05),而凋亡率和p-YAP蛋白表达显著升高(P<0.05)。miR-429+wt-MEF2D组舌鳞癌细胞荧光素酶活性(0.22±0.01)较miR-NC+wt-MEF2D组(1.03±0.09)明显降低(P<0.05)。si-MEF2D组舌鳞癌细胞中MEF2D蛋白表达低于对照组、si-NC组(P<0.05),pcDNA-MEF2D组明显高于对照组、pcDNA组(P<0.05)。结论miR-429在舌鳞癌组织中通过靶向抑制MEF2D,进而激活Hippo/YAP信号通路来抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡。

Prohibitin 2调节肌细胞增强因子2转录因子活性的分子机制

目的:探讨Prohibitin 2(PHB2)抑制肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor,MEF2)转录因子活性的分子机制,为进一步研究PHB2在其他MEF2阳性表达细胞中的调控作用提供依据。方法:利用脂质体转染方法将表达PHB2和MEF2的真核表达载体与荧光素酶报告基因载体共转染入体外培养的Hela细胞中,转染36 h后,裂解细胞获取细胞裂解上清,Western blotting检测上清中重组蛋白的表达及利用发光检测仪检测上清中荧光素酶的生物发光活性。结果:转染PHB2细胞组与未转染PHB2细胞组中,MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.28±0.02和1.00±0.02,两组比较差异具有显著性(P<0.01),且降低程度与PHB2的表达量呈正比;在未转染PHB2细胞组,MEF2转录激活区调控的荧光素酶生物发光活性比为9.53±1.06,而在转染PHB2细胞组其为2.24±0.21,两组比较差异具有显著性(P<0.01);组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂TSA处理组与未处理组,共转染PHB2细胞中MEF2调控的荧光素酶生物发光活性比分别为0.98±0.12和0.38±0.04,两组比较差异具有显著性(P<0.01),提示TSA解除了PHB2对MEF2的抑制作用。结论:PHB2抑制MEF2转录活性的分子机制是通过作用于MEF2的转录激活区由HDAC介导完成的,该抑制作用非依赖于成肌调节因子MyoD,且与MEF2的DNA结合功能无关。

siRNA肌细胞特异性增强因子2D对人肺癌细胞株A549和H460增殖及凋亡的影响

目的探讨siRNA肌细胞特异性增强因子(MEF)2D对人肺癌A549和H460细胞增殖的影响及可能的机制。方法 RT-PCR检测正常组织和肺癌组织内MEF2D mRNA的表达水平,siRNA MEF2D转染A549和H460细胞,MTT和流式细胞仪分别检测不同处理组的细胞存活率和凋亡率,Western印迹检测MEF2D和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果 MEF2D mRNA在肺癌组织中的含量比在正常组织内高,细胞转染siRNA MEF2D后,细胞的存活率和MEF2D表达水平下降,而细胞的凋亡率和cleaved caspase-3的表达水平增加。结论 siRNA MEF2D抑制了A549和H460细胞的增殖并促进了其凋亡。

核富集转录体1、肌细胞增强因子2D在子宫内膜癌中的表达及其与预后的相关性

目的研究子宫内膜癌(EC)中核富集转录体1(NEAT1)、肌细胞增强因子2D(MEF2D)的表达,探讨两者之间的相关性。方法以2016年3月至2018年3月延安市人民医院妇产科91例手术治疗EC患者的资料为研究对象。利用荧光定量PCR检测组织中NEAT1及MEF2D mRNA的表达,利用免疫组化检测组织MEF2D蛋白表达。以NEAT1、MEF2D mRNA相对表达量的平均数1.752、1.514为界,分别分为NEAT1高表达组(n=46)、NEAT1低表达组(n=45),MEF2D高表达组(n=44)、MEF2D低表达组(n=47)。Pearson相关分析NEAT1和MEF2D mRNA的相关性。Kaplan-Meier生存分析不同NEAT1、MEF2D mRNA表达与患者预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响EC患者预后的因素。结果荧光定量PCR结果EC癌组织中NEAT1、MEF2D mRNA的表达均高于癌旁组织(P<0.05)。EC癌组织中MEF2D蛋白阳性表达主要位于细胞核。EC癌组织中MEF2D蛋白阳性表达率为73.60%(67/91)明显高于癌旁组织21.98%(20/91)(χ^(2)=48.643,P=0.000)。不同肿瘤分期的EC患者NEAT1、MEF2D mRNA表达差异有统计学意义(均P<0.05)。NEAT1与MEF2D mRNA的表达呈显著正相关(r=0.591,P=0.000)。NEAT1高表达组和低表达组的3年总体生存率(OS)分别为71.74%(33/46)、88.89%(40/45);MEF2D mRNA高表达组和低表达组的3年总体生存率(OS)分别为70.50%(31/44)、89.36%(42/47),Kaplan-Meier分析(log-rank检验)表明:高NEAT1、MEF2D mRNA表达组生存率明显低于低NEAT1、MEF2D mRNA表达组患者(χ^(2)=5.318、5.420,P=0.021、0.018)。肿瘤FIGO分期Ⅱ期、NEAT1高表达、MEF2D mRNA高表达是影响EC患者不良预后的独立危险因素。结论EC中NEAT1、MEF2D表达升高,两者表达呈正相关,协同参与促进EC的疾病进展,是新的EC预后判断的肿瘤标志物。

猪细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ作为免疫增强剂和新型基因工程疫苗的研究

通过综述猪IL-2、IL-4和IFN-γ的基因结构、作为免疫佐剂和作为构建新型基因工程疫苗方面研究进展,以了解细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的相关研究成果,为细胞因子进行更深入的研究提供参考。

小干扰RNA对缺氧PC12细胞中肌细胞增强因子2A蛋白表达的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)对大鼠缺氧PC12细胞中肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的影响。方法常规培养和缺氧培养PC12细胞。设计合成和筛选针对MEF2A的siRNA序列(MEF2A-siRNA),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染PC12细胞。实时荧光定量PCR法检测MEF2A的mRNA表达水平。Western blot检测MEF2A蛋白表达量。结果在用含有MEF2A基因的靶向抑制序列MEF2A-siRNA转染后PC12细胞中MEF2A mRNA相对表达量(2-△△CT)为(0.12±0.03),显著低于常规培养的PC12细胞中的表达量(1.01±0.02),抑制率为88.1%(P<0.01)。Western blot检测表明缺氧组中MEF2A蛋白表达量为(98.4±11.7),显著高于正常对照组的(47.5±7.6)(P<0.01)。与缺氧组相比,MEF2A-siRNA+缺氧组中MEF2A蛋白量下调为(59.3±8.4)(P<0.01),表明MEF2A-siRNA转染对缺氧诱导PC12细胞中MEF2A蛋白表达的上调有显著抑制作用。结论缺氧诱导PC12细胞中MEF2A的表达升高,而siRNA转染可以靶向抑制MEF2A基因表达。