旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中特异性抗原的分析

用胃蛋白酶消化旋毛虫感染鼠肌肉，获得肌肉期幼虫。３７℃，用ＲＰＭＩ１６４０培养基培养幼虫，控制虫体死亡率低于５％。每２４ｈｒ收集上清培养液，即为分泌排泄抗原（ＥＳＡ）。共获１０天次ＥＳＡ（ＥＳＡ＿（１ｄ～１０ｄ））。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及氨银染色技术进行蛋白组份分析显示：各天次ＥＳＡ的主要蛋白区带数及位置基本相同，分子量范围在９６～１４ｋｄ，主带３条，分别为４８，５３和５８ｋＤ蛋白组份。应用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术进行免疫识别分析显示：旋毛虫病人血清对各天次ＥＳＡ的免疫识别结果相似，识别的抗原组份有７～８条区带，均有上述３条主带。正常人、蛔虫病人和囊虫病人血清均未能识别任何区带。肺吸虫病人血清能识别２～３条抗原区带，但其分子量位于２４～１４ｋＤ之间。血吸虫病人血清也能识别２～３条抗原区带，其分子量位于１８～１４ｋＤ之间。结果表明：在严格控制死亡虫体抗原污染条件下，较长期内培养肌肉期幼虫获得的各天次ＥＳＡ，其成份和免疫识别效果基本无改变，各天次ＥＳＡ中的４６～５８ｋＤ蛋白均具有良好的特异性。

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD抗原诱发小鼠保护性免疫的研究

为探讨旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１ＥＳ）中４６５８ｋＤ抗原的保护性免疫作用，本文用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次，继以旋毛虫感染性幼虫３００条攻击感染，感染后第７天计数小鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数和血清抗体ＩｇＧ滴度。结果：４６５８ｋＤ抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体ＩｇＧ的几何平均倒数滴度分别为４１８％、４６１％和２８４１２；与ＴｓＬ１ＥＳ诱导的保护性免疫力（４８３％、５０２％和３４５８６）水平接近；显著高于佐剂对照组（４８％、８３％和７４８６）。

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58KD抗原的保护性免疫作用

目的研究旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物(TsL1-ES)中46-58KD抗原诱发小鼠的保护性免疫能力。方法用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂(FCA)腹腔注射免疫昆明小鼠3次,继以旋毛虫感染性幼虫300条攻击感染,感染后第7天计数小鼠肠道成虫数,第30天肌肉幼虫数和血清抗体IgG滴度。结果46-58KD抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体IgG的几何平均倒数滴度(GMRT)分别为46·4%、46·1%和2841·2,与TsL1-ES诱导的保护性免疫力(48·3%、50·2%和3458·6)水平接近,显著高于佐剂对照组(4·8%、8·2%和748·6)。结论TsL1-ES中46-58KD抗原组分可产生明显的保护性免疫作用。

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物及其46-58KD蛋白的保护性免疫作用的比较研究

观察旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（TsL1－ES）及其46－58KD蛋白的保护性免疫作用，并作比较研究。方法：通过无血清的RPMI1640培养基培养旋毛虫肌肉期幼虫，获得TsL1-ES；再以常规SDS-PAGE和电洗脱技术相结合纯化TsL1-ES中46-58KD蛋白。用TsL1－ES及其46－58KD蛋白加福氏完全佐剂（FCA）腹腔注射免疫昆明小鼠3次，每鼠再以旋毛虫300条感染攻击，观察感染后第7天鼠肠道成虫数、第30天肌肉幼虫数及血清抗体滴度。结果：46-58KD免疫组鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率及血清抗体的几何平均倒数滴度（GMRT）分别为46.4％、46．1％及2841．2；与TsL1-ES诱导的保护性免疫力接近（48．3％、50．2％及3458．6）；明显高于佐剂对照组（4．8％、8．2％及748．5。结论：TsL1-ES及其46－58KD蛋白均可产生明显的保护性免疫，且保护性免疫水平相近。

不同种株旋毛虫肌肉期幼虫温变形态观察比较

目的探索我国是否存在旋毛虫的不同类型及其在生物学性状方面与布氏旋毛虫(T.britovi,T3)和南方旋毛虫(T.nelsoni,T7)存在的差异。方法在4℃低温下观察云南、湖北、黑龙江、河南4地和2株国际标准株(T3、T7)旋毛虫肌肉期幼虫(ML)形态及其分布。结果 4地旋毛虫及2株国际标准株旋毛虫 ML 形态分布各不相同,呈螺旋状卷曲者所占的比例分别为14.1%、41.1%、12.1%、39.5%、3.5%和25.7%。其中湖北株、河南株比例接近,并且比例较高;云南株、黑龙江株分布比例接近,比例较低。该四株与 T3、T7比例皆相差较远。云南、湖北、黑龙江、河南4地和2株国际标准株(T3、T7)的温变率分别为3.92、9.86、6.72、9.40、2.43、11.68。结论我国4地与2株国际标准株旋毛虫 ML 在低温下形态上存在着明显的差异,提示我国4地旋毛虫存在2种不同的生物学类型,且与国际标准株(T3,T7)的亲缘关系较远。

三种旋毛虫肌肉期幼虫染色方法的比较研究

目的为寻找简便有效的旋毛虫病病原学诊断方法,本文比较研究了吉姆萨、天狼猩红和苏木素-伊红(HE)染色对肌肉中旋毛虫幼虫染色后的观察效果。方法BALB/c小鼠口饲感染旋毛虫肌期幼虫300条,分别于感染后90d和120d处死小鼠,取其膈肌,福尔马林固定后,一分为四,分别行吉姆萨染色、天狼猩红染色和HE染色,同时设不染色的对照,光镜下观察肌肉中虫体的显示效果。结果吉姆萨染色对旋毛虫肌期幼虫的显示效果较好,天狼猩红染色对幼虫周围纤维囊壁的显示效果较好。结论吉姆萨和天狼猩红染色均有助于对小鼠膈肌中的旋毛虫幼虫进行观察,且二者各具特点。

热带医学杂志2010年第10卷总目次

【硕博专栏论著】 细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞增殖变化的研究，周必英，陈雅棠，李文桂，等（1）：1三峡库区上、下游血吸虫病流行区钉螺线粒体cox1基因遗传变异研究，陈琳，张锡林，何谐，等（1）：5三种旋毛虫肌肉期幼虫染色方法的比较研究，陈莹，杨晓燕，郑焕钦。