穴位不同层次和强度电刺激缓解肌肉炎性痛及对脊髓背角广动力神经元的抑制作用

目的:观察在痛源局部穴区不同层次和强度电刺激的镇痛作用及对脊髓背角广动力(WDR)神经元诱发电活动的影响,为选择合理的电针刺激参数提供依据。方法:Wistar大鼠用于3部分实验。采用弗氏完全佐剂(CFA)建立腓肠肌炎性痛模型,造模后随机选取6只大鼠进行WDR神经元电活动多通道细胞外电生理记录,用于确定激活A-成分的电刺激阈值Ta和C-成分的电刺激阈值Tc,以此作为经皮穴位电刺激(TEAS)或电针的干预强度;选取36只大鼠随机分为正常组、模型组、TEAS-Ta组、TEAS-Tc组、EA-Ta组和EA-Tc组,每组6只,在痛源局部“承山”采用Ta或Tc强度的TEAS或电针干预,每次30 min,1次/d,连续3 d,采用小动物压痛测量仪检测大鼠腓肠肌的机械压痛阈值,Von Frey丝测量足底机械痛阈值;随机选择13只肌肉炎性痛大鼠用于观察Ta/Tc强度电针或TEAS“承山”即刻WDR神经元的反应性。结果:TEAS皮肤激活WDR神经元A-成分或C-成分的阈值分别为(2.43±0.57)mA和(7.00±1.34)mA,电针激活肌肉WDR神经元的A-成分或C-成分的阈值分别为(0.72±0.34)mA和(1.58±0.35)mA。大鼠腓肠肌注射CFA后腓肠肌和足底机械痛阈值较正常组明显降低(P<0.001),在“承山”给予TEAS-Ta、TEAS-Tc或EA-Ta干预后,其腓肠肌和足底机械痛阈值较模型组明显升高(P<0.05,P<0.001)。模型组大鼠伤害性电刺激诱发WDR神经元C-成分放电阈值较正常组降低(P<0.001);与模型组比较,TEAS-Ta、TEAS-Tc或EA-Ta干预后阈值明显升高(P<0.01)。TEAS-Ta、TEAS-Tc或EA-Ta即刻干预后,肌肉WDR神经元诱发放电频率较干预前明显降低(P<0.01,P<0.05)。EA-Tc对WDR神经元的诱发电活动和痛行为均无显著改善。结论:TEAS-Ta、TEAS-Tc或EA-Ta均可减轻肌肉炎性痛大鼠痛源局部及足底机械痛,并抑制WDR神经元的反应性,提示在痛源局部穴位的不同层次镇痛作用需要的电刺激强度不同。

不同强度电针和经皮穴位电刺激对肌肉炎性痛大鼠的镇痛效应

目的:观察比较不同强度的电针(EA)和经皮穴位电刺激(TEAS)对肌肉炎性痛模型大鼠的镇痛作用,探讨刺激穴位不同层次结构激活不同传入神经纤维在针刺镇痛中的作用。方法:将刺激强度分为激活A纤维阈值(Ta)或者激活C纤维阈值(Tc),刺激层次采用TEAS或电针"梁丘"(达肌肉层)。将SD大鼠随机分为正常组、模型组、Ta强度经皮穴位电刺激(TEAS-Ta)组、Tc强度经皮穴位电刺激(TEAS-Tc)组、Ta强度电针(EA-Ta)组、Tc强度电针(EA-Tc)组,每组8只。以SD大鼠右侧股二头肌注射完全弗氏佐剂建立肌肉炎性痛模型。4个干预组以相应刺激强度于"梁丘"给予TEAS或电针干预,每日干预1次,共干预3 d。以大鼠双足承重差值和异常肌电发放作为疼痛检测指标,观察不同强度和层次干预局部穴位"梁丘"的镇痛作用。结果:与正常组比较,模型组大鼠双足承重差值明显升高(P<0.01);与模型组比较,TEAS-Tc组、EA-Ta组、EA-Tc组双足承重差值显著降低(P<0.05,P<0.01)。与本组干预前比较,TEAS-Tc组、EA-Ta组干预后大鼠异常肌电的曲线下面积、放电频率显著降低(P<0.01,P<0.05),EA-Tc组显著升高(P<0.05)。干预后与TEAS-Ta组比较,TEAS-Tc组异常肌电的曲线下面积抑制率、放电频率抑制率显著升高(P<0.05);与EA-Tc组比较,EA-Ta组异常肌电的曲线下面积抑制率、放电频率抑制率显著升高(P<0.01)。结论:Tc强度的TEAS和Ta强度的肌肉层电针梁丘穴均可以减轻CFA炎性痛模型大鼠疼痛行为和异常肌电发放,说明局部镇痛的效果和穴位局部的层次和神经传入密切相关。

电针/经皮电刺激激活不同传入神经纤维对肌肉炎性痛大鼠的镇痛效应研究

目的:观察电针和经皮穴位电刺激(TEAS)对肌肉炎性痛模型大鼠的镇痛效应,探讨激活痛源局部穴位深、浅层次的不同传入神经纤维在针刺镇痛中的作用。方法:通过在SD大鼠右侧股二头肌注射完全弗氏佐剂建立肌肉炎性痛模型。实验分为3部分:(1)8只模型大鼠分别采用不同刺激方式(电针/TEAS)诱导得出激活A类神经纤维的阈值(threshold of A fiber, Ta)和C类神经纤维的阈值(threshold of C fiber, Tc)。(2)48只大鼠随机分为正常组、模型组、Ta强度TEAS(TEAS-Ta)组、Tc强度TEAS(TEAS-Tc)组、Ta强度电针(EA-Ta)组、Tc强度电针(EA-Tc)组。4个干预组以相应的刺激强度干预痛源局部穴位"梁丘",以大鼠双足承重差值作为疼痛检测指标,观察不同强度的电针和TEAS的镇痛作用。(3)64只大鼠随机分为正常组、模型组、同侧梁丘TEAS组、同侧梁丘电针组、对侧梁丘TEAS组、对侧梁丘电针组、同侧合谷TEAS和同侧合谷电针组,观察不同强度电针和TEAS干预同侧"梁丘"、对侧"梁丘"和远端"合谷"对大鼠C类神经纤维反射肌电的影响。结果:采用TEAS和电针两种方式诱导出的Aδ类和C类神经纤维反射肌电,其潜伏期、阈值和持续时间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠双足承重差值明显升高(P<0.01);与模型组比较,干预同侧"梁丘"后,TEAS-Tc组、EA-Ta组、EA-Tc组双足承重差值降低(P<0.05,P<0.01);与TEAS-Ta组比较,TEAS-Tc组双足承重差值降低(P<0.05)。与本组干预前比较,Tc强度TEAS干预同侧"梁丘"即刻、1 min和对侧"梁丘"即刻,C纤维反射肌电的频率降低(P<0.01,P<0.05);以Tc强度电针同侧"梁丘"即刻、1 min、2 min和对侧"梁丘"即刻、1 min以及"合谷"即刻,C类纤维反射肌电频率均降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,以Tc强度TEAS干预同侧"梁丘"即刻、1 min、 2 min及Tc强度TEAS干预对侧"梁丘"即刻时,C类神经纤维反射肌电的频率均降低(P<0.01,P<0.05);以Ta强度电针同侧"梁丘"即刻、1 min及对侧"梁丘"即刻,C类纤维反射肌电频率降低(P<0.01,P<0.05);以Ta强度电针同侧"梁丘"即刻,C类纤维反射肌甩频率均降低(P<0.01,P<0.05),以Tc强度电针同侧"梁丘"即刻、1 min、2 min、3 min和对侧"梁丘"即刻、1 min以及"合谷"即刻,C类纤维反射肌电频率均降低(P<0.01,P<0.05)。结论:在痛源局部"梁丘"Tc强度的TEAS和不同强度的电针均可以减轻炎性痛模型大鼠疼痛行为,抑制C类纤维反射肌电,该镇痛作用与穴位局部刺激层次和刺激强度有关。

弗氏完全佐剂肌肉注射诱发炎性痛敏及免疫应答的转录组测序分析

目的观察弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)肌肉注射后1~15 d的炎性反应,明确免疫应答反应的发生,通过分析转录组学的差异,为肌肉炎性反应及其诱发的痛觉敏化研究提供重要的参考。方法90只Wistar大鼠随机分为正常组和CFA注射后第1天(MD1)、第3天(MD3)、第5天(MD5)、第7天(MD7)、第9天(MD9)、第11天(MD11)、第13天(MD13)和第15天(MD15)模型组。在模型组大鼠左侧股二头肌肌腹注入200μL的CFA,观察各组大鼠左侧足底的机械痛阈值和热痛阈值变化;采用电化学发光法检测各组大鼠肌肉组织和外周血中炎性因子的含量;使用HE染色对正常组、MD3和MD13组大鼠注射侧局部肌肉组织进行形态学观察;采用基因组学的方法,分析这两组大鼠差异基因的表达。结果(1)股二头肌肌肉注射CFA可诱发同侧足底持续的机械痛敏和热痛敏。(2)CFA肌肉注射后24 h后,外周血和局部组织中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量明显升高,局部组织中促炎因子含量在注射后第13天再次明显升高。(3)在CFA注射后第3天局部组织以中性粒细胞浸润为主,在CFA注射后第13天则以单核细胞浸润为主。(4)与MD3组相比,MD13组大鼠局部组织中与免疫反应相关的差异表达基因上调,其中涉及到Th细胞的分化、细胞因子受体相互作用等与适应性免疫相关的生物学通路。(5)CFA注射后局部组织中痛敏相关基因的表达水平升高,包括Ccl3、Cxcl1、Cxcl2、Cxcl9、Cxcl10等基因。结论CFA的注射可有效刺激固有免疫和适应性免疫的发生,诱导炎性痛敏,其中不同趋化因子家族基因在不同的免疫应答中发挥了重要的作用。