猪肌肉素基因的cDNA克隆与表达

从人肌肉素基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到七个有较高同源性的Expressed Sequence Tag（DY426490，CF787546，AJ660979，AJ664670，AJ663820，AJ680159，DN106254）。通过拼接和进一步RT-PCR实验验证，获得猪肌肉素基因全长cDNA序列，其全长651bp，开放阅读框为54～452bp，编码有132个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、小鼠和大鼠的肌肉素基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为87．2％、77．6％和77．9％。利用克隆出的猪肌肉素cDNA，构建表达载体pGEX-4T-1-musclin，并在BL21大肠杆菌中成功表达和纯化了分子量为38．59kD的融合蛋白GST-Musclin，并运用蛋白印迹技术进行鉴定。

肉牛肌肉生长抑制素基因研究进展

肌肉生长抑制素是生长因子β超家族的成员之一,是通过调节成肌细胞增殖而影响肌肉生长发育的骨骼肌负调控因子。肌肉生长抑制素基因发生错义突变会导致肌细胞增生和肌纤维肥大,肌肉量明显增加,呈现双肌表型。肌肉生长抑制素基因突变牛具有生长发育快、产肉率高等特点。文章综述了肌肉生长抑制素基因的结构、定位、错义突变类型、多态性检测方法及肌肉生长抑制素基因突变牛在肉牛杂交生产中的应用,以期为肌肉生长抑制素基因的相关研究及其在肉牛生产中的应用提供参考。

康乐黄鸡肌肉生长抑制素基因多态性对上市日龄体重的遗传效应分析

为了研究康乐黄鸡肌肉生长抑制素(MSTN)基因单核苷酸多态性(SNP)的位点分布,进一步探究提供相应的分子标记,用于辅助地方品种选育改良,以康乐黄鸡为试验对象,全血提取DNA,利用PCR扩增反应扩增基因,进行双向测序,测定基因序列。结果显示:MSTN基因第一外显子中,存在1个SNP位点,为C→G碱基突变,该突变位于7号染色体上252 542 bp处,关联分析发现突变纯合子GG型的上市日龄体重显著高于CC型和CG型(P<0.05)。提示:该突变为康乐黄鸡上市体重性状的有利突变,值得进一步研究。

贵州白山羊肌肉生长抑制素(MSTN)基因生物信息学预测与系统进化分析

本研究旨在解析贵州白山羊肌肉生长抑制素(MSTN)基因的结构特性,为该基因功能探究提供理论依据。基于生物信息学及比较基因组学方法,对NCBI数据库中已登录的贵州白山羊MSTN基因完整编码区序列(CDS)核苷酸组成特性及编码蛋白的相关结构开展预测及分析,构建了15个物种MSTN基因系统进化树。结果表明,贵州白山羊MSTN基因CDS长度为1128bp,共编码375个氨基酸,由3个外显子和2个内含子构成,其AT含量均高于GC。贵州白山羊MSTN蛋白属混合型二级结构,存在无规则卷曲、延伸链和α-螺旋,为弱碱不稳定亲水蛋白质;包括1个18个氨基酸的潜在信号肽,无跨膜区,形成5对二硫键,含有16个磷酸化位点;278~375位氨基酸为转化生长因子-β样结构域。贵州白山羊MSTN基因与绵羊、牛等牛科动物的亲缘关系较近,与鸡形目原鸡和绿头野鸭的亲缘关系较远。本研究可为贵州白山羊MSTN基因分子遗传学及其表达调控研究奠定理论基础。

不同品种猪肌肉生长抑制素基因单核苷酸多态性分析

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法，对“双肌臀”大白猪、大白猪、长白猪、杜洛克、汉普夏、皮特兰、二花脸、东北民猪、湖北白猪和部分杂交猪等不同品种猪肌肉生长抑制素基因３＇编码区、５＇调控区及内含子１区３个单核苷酸多态性位点（ＳＮＰｓ）进行了分析。结果表明，３＇编码区的ＳＮＰ发生的频率较低，在２７４头猪中未检出突变纯合体。对５＇调控区的ＳＮＰ，引进猪种（大白猪、长白猪、杜洛克、汉普夏和皮特兰）及其杂交猪以等位基因Ｔ为主，二花睑和湖北白猪则以等位基因Ａ为主，均偏离Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态（Ｐ＜０．０１）。东北民猪的３种基因型近乎相等，处于Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。对内含子１区的 ＳＮＰ，大白猪及其与长白猪的杂交猪等位基因Ｇ占优势，二花脸和湖北白猪则以等位基因Ａ为主，均偏离Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态（Ｐ＜０．０１）；东北民猪和大二猪的等位基因Ｇ和Ａ近乎相等，处于Ｈａｒｄｙ－Ｗ ｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态。“双肌臀”大白猪在５＇调控区和内含子１区这两个位点的Ａ等位基因稍高于普通大白猪．５＇调控区和内含子１区ＳＮＰｓ所产生的等位基因表现出连锁遗传现象。

猪肌肉生长抑制素基因 5′调控区T→A突变与生长性状的关系分析

生长速度是猪育种中选择的主要目标性状之一 ,鉴定影响生长速度的QTL或基因具有重要的实践意义和理论价值。对猪肌肉生长抑制素基因 (myostatin ,MSTN) 5′调控区TA突变与生长性状的关系进行了分析。突变所产生的基因型的判定采用PCR RFLP方法进行。猪生长性状的测定指标包括 6 0日龄体重 (bodyweightat 6 0d ,BW6 0 )、前期平均日增重 (averagedailygainofstageone ,ADG1)、后期平均日增重 (averagedailygainofstagetwo ,ADG2 )和全期平均日增重 (averagedailygainofwholestage ,ADG) ,所采用的记录数分别来自 16 5 ,2 76 ,2 75和 2 75头无亲缘关系个体。采用SAS软件包的GLM程序对MSTN基因型与猪生长性状的关系进行分析。结果表明 ,MSTN基因型对猪BW6 0 ,ADG1和ADG2的效应不显著 (P >0 1) ,对ADG2的效应在剔除基因型与品种的互作效应以后几乎达到显著水平(P =0 0 5 2 2 ) ,突变等位基因的携带者 (基因型为TA)

静宁鸡肌肉生长抑制素基因单核苷酸多态性筛查及生物信息学分析

为了在静宁鸡群体中筛选出肌肉生长抑制素基因(myostatin, MSTN)突变个体,通过若干世代选育而培育出产肉率较高的优良家禽品种,以第5世代静宁鸡为试验对象构建DNA混合池,通过分段扩增获得静宁鸡MSTN基因编码序列,并对其进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)筛查和生物信息学分析。结果表明:静宁鸡MSTN基因编码区全长1 128 bp,编码375个氨基酸,该蛋白为亲水性蛋白;编码区共筛查到4个SNPs,分别为exon1-c.60G>A、exon1-c.195C>G、exon1-c.234G>A、exon3-c.966G>T,均为同义突变;核苷酸突变后mRNA二级结构和自由能的改变导致其结构稳定性发生改变;蛋白质二、三级结构的主要元件为无规则卷曲,延伸链、α-螺旋和β-转角则散布于整个蛋白质结构中。综上表明,静宁鸡MSTN基因具有较高的突变性,为静宁鸡生长性状的标记辅助选择提供了分子基础。

大黄鱼肌肉生长抑制素基因微卫星序列多态性分析

肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）参与肌肉生长和脂肪发生的调节．本研究在克隆大黄鱼MSTN cDNA的基础上，对3′端非编码区微卫星序列的多态性及其与体长、体重和肌肉脂肪含量的关系进行了分析．结果表明，获得的cDNA长1886bp，在3′端非编码区存在微卫星序列（CA）n．在受检的52个个体中，微卫星序列长度在64～126bp之间．大部分个体的微卫星序列内存在碱基替换，最常见的碱基替换形式是C→T，属于非完美型微卫星序列．根据该位点微卫星序列长度，在实验群体中共检测到23个等位基因，其中频率为0．0192的等位基因11个，0．0385的5个，0．0769的3个，0．0577的2个，0．1154和0．1346的各1个．该基因位点的群体杂合度为0．9327，多态信息含量为0．9288．微卫星序列长度与大黄鱼体长、体重和肌肉脂肪含量之间的相关系数分别为0．409、0．435和-0．026，P值分别为0．021、0．016和0.878．碱基替换对大黄鱼生长及肌肉脂肪含量均无显著影响．

大黄鱼肌肉生长抑制素基因外显子Ⅰ遗传多态性分析

肌肉生长抑制素是控制骨骼肌生长发育的重要细胞因子,采用PCR-SSCP和测序方法分析了大黄鱼肌肉生长抑制素基因外显子I的单核苷酸多态性,结果发现,外显子I有7个多态性位点,分别是270(G→A)、196(C→T)、349(A→T)、51(T→C)、352(G→A)、348(C→T)和264(G→T),但只有349位点和352位点的碱基突变造成错义突变,氨基酸变化分别为T→S和E→K,其他位点均属同义突变。存在7种基因型,它们的频率分别为0.2708、0.0833、0.3333、0.0208、0.1667、0.1047和0.0208,该基因位点的杂合度为0.709。统计分析表明,外显子I无论是基因型水平上的多态性还是氨基酸水平上的突变均与体长和体质量呈显著性相关(P<0.05),但与肌肉脂肪含量无显著相关(P>0.05)。

绵羊肌肉生长抑制素基因外显子Ⅰ单核苷酸多态性分析

利用PCR-SSCP和DNA测序法,检测了德国肉用美利奴、特克塞尔、多浪羊和陶塞特等4个绵羊品种肌肉生长抑制素基因外显子Ⅰ的单核苷酸多态性。研究结果表明:在德国肉用美利奴肌肉生长抑制素基因外显子Ⅰ第+84位(相对翻译起始位点ATG)发现G→A的突变,但仅存在两种基因型,即GG和GA,基因型频率分别为0.6944和0.3056。该突变位点编码的氨基酸序列不发生改变,在其余样品均未检测到多态。

二花脸猪和大白猪背最长肌中肌肉生长抑制素和生肌调节因子基因的表达及其性别特点

用相对定量RT-PCR方法研究大白猪和二花脸猪背最长肌中肌肉生长抑制素(Myostatin)和生肌调节因子(Myo-gen in)基因表达的发育性变化并进行品种及性别间比较。研究结果表明:大白猪公猪MyostatinmRNA表达水平在20日龄时达到高峰且显著高于相同日龄二花脸公猪(P<0.05),而二花脸公猪在45日龄时才显著升高,其他日龄品种间差异不显著。二花脸公猪和母猪出生后MyostatinmRNA表达水平均表现为上升,45日龄时达到高峰,120日龄时公母猪间差异显著(P<0.05)。二花脸公猪与大白猪公猪MyogeninmRNA的表达发育模式基本相同,均在20日龄达到最高值,品种间差异不显著。90日龄二花脸母猪MyogeninmRNA表达水平较公猪显著下调(P<0.05)。结果提示,猪背最长肌中Myostatin和Myogenin基因表达水平在猪出生后早期均较高,但没有出现随着日龄的增加而一直升高或降低的趋势;两种基因的表达在20日龄出现品种间差异;性成熟前后二花脸公母猪间表达有差异。

猪肌肉生长抑制素基因侧翼区新微卫星标记的鉴定及分析

提取包含猪肌肉生长抑制素基因的BAC克隆 ,以EcoRⅠ进行酶切并回收其中大于 4kb的酶切产物 ,连接到pGEM 3zf(+)载体后得到了亚克隆。测序分析表明 ,插入片段不属于猪肌肉生长抑制素基因的一部分 ,但其中包含 13拷贝的 (TG)n重复。以该重复序列的侧翼设计引物对猪的基因组进行分析 ,得到了PCR扩增产物。对一个“双肌臀”大白猪家系进行PCR扩增及非变性聚丙烯酰胺凝胶分析的结果表明 ,该位点以并显性方式遗传 ,是一个新的微卫星标记。对莱芜猪、长白猪、大白猪、杜洛克、皮特兰、民猪和二花脸 7个品种的 381个无关个体的检测均显示该基因座只有两个等位基因 ,重复数分别为 13和 19,是一种多态性较低的微卫星标记。与包含该基因的序列(AY2 0 812 1)比对分析表明 ,该微卫星属于肌肉生长抑制素基因 (MSTN)侧翼区的一个分子标记 ,在猪肉用性状QTL的精细定位和MSTN功能分析中将发挥重要作用。

眼斑拟石首鱼肌肉生长抑制素基因克隆及组织表达分析

肌肉生长抑制素（MSTN）基因对肌肉生长起负调控作用,在动物育种上具有潜在的应用前景。报道了眼斑拟石首鱼（Sciaenops ocellatus）的MSTN基因的序列结构特征及其组织特异性表达。MSTN基因具有3个外显子和2个内含子,编码376个氨基酸。在内含子Ⅰ和3′-UTR区内,分别发现了（TC）4CC（TC）4CT（TC）4和（AC）7微卫星序列。推断的眼斑拟石首鱼的MSTN氨基酸序列具很强的保守性,与石鼓鱼、金鲷、条纹石鮨、白鲈、金眼石鮨之间的相似性在90%以上。在结构上,眼斑拟石首鱼的MSTN包含N端信号序列（1～22氨基酸残基）,TGF-β前肽域（41～256氨基酸残基）,RXXR蛋白水解位点（264～267位的RARR）和TGF-β区域（282～376氨基酸残基）。在检测的10种组织中,MSTN只在眼斑拟石首鱼的肌肉、脑和眼组织中表达,其中在肌肉表达最强。

牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因的检测、分型研究

本研究根据皮埃蒙特牛肌肉生长抑制素 (MSTN)基因序列设计了 3条特异性引物 ,以纯种皮埃蒙特牛、皮荷杂种牛和荷斯坦牛的 DNA为模板 ,对是否携带 MSTN基因的个体牛进行单核苷酸多态性分析 。

中国草原红牛肌肉生长抑制素基因3′-UTR多态性及其与屠宰性状的关联性分析

为研究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因对中国地方黄牛品种产肉性能的影响,本试验以吉林省2个地方黄牛品种(草原红牛、延边黄牛)为研究对象,以4个二元杂交黄牛群体(德国黄牛×西门塔尔、利木赞×西门塔尔、夏洛莱×西门塔尔、红安格斯×西门塔尔)为参照,采用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)技术对MSTN基因的多态性进行分型,并将其与草原红牛屠宰性状进行关联分析。测序结果发现,在MSTN基因外显子3上没有发现突变位点,而3′-UTR区发现了C5357A突变,导致了自然酶切位点AclⅠ基因的消失;6个群体皆表现多态性,形成A和C 2个等位基因和AA、CA、CC 3种基因型;4个二元杂交群体的AA基因型频率明显高于2个地方群体,且等位基因A为优势等位基因;CA、CC和AA基因型频率在二元杂交群体间和地方群体间的频率分布变异不大,等位基因C在地方群体间的基因频率明显高于等位基因A,为地方群体的优势等位基因。将草原红牛不同基因型与部分屠宰性能进行关联分析,结果表明AA基因型个体的净肉率和眼肌面积显著高于CA和CC基因型个体(P<0.05),但其他的屠宰性能在3种基因型上无显著差异(P>0.05)。上述结果可为今后草原红牛在产肉性能上的分子育种研究提供参考。

牛肌肉生成抑制素基因功能区的克隆与原核表达

根据GenBank中牛肌肉生成抑制素(MSTN)基因序列设计了1对引物,在引物两端分别加EcoR I和Xho I识别位点。利用RT-PCR技术扩增出了牛MSTN功能区序列。分别构建克隆和原核表达载体,酶切、PCR鉴定及测序分析表明,该基因功能区序列的克隆载体和原核表达载体已成功构建。筛选阳性菌,经IPTG诱导,牛MSTN基因功能区在大肠埃希氏菌中成功表达。

牛肌肉生长抑制素基因编码区全序列的分子进化特征

运用PCR分段扩增测序法,获得普通牛、瘤牛、牦牛、大额牛、水牛（沼泽型和河流型）MSTN基因编码区全序列,进而分析编码区序列的分子进化特征。结果显示,牛MSTN基因编码区全序列长1128 bp,种内核苷酸突变率为0-0.35%,种间核苷酸突变率为0.08%-1.42%。MSTN基因编码区序列存在密码子使用偏好性,29个偏好性密码子约占密码子使用总数的49.2%。核苷酸的替代以转换为主,转换/颠换比为2.9。非同义突变位点远少于同义突变位点,同义与非同义替代速率比全部小于或等于1,表明MSTN基因编码区序列并未受到达尔文正向选择的影响,却受到一定的负向选择作用。分子进化树显示,水牛、瘤牛独自成类并与其他牛种显著分化;普通牛、牦牛、大额牛间的序列分化程度并不明显,但有可能在进化过程中逐步产生明显的分化。

兴义鸭肌肉生长抑制素基因多态性与屠宰性状的相关性分析

为了解兴义鸭肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因SNPs与屠宰性状的相关性,本研究采用基因克隆及PCR产物直接测序的方法,将MSTN基因作为鸭屠宰性状的候选基因,对兴义鸭的MSTN基因外显子进行多态性检测。结果表明,在60个兴义鸭个体中筛选出8个SNPs,其中,第1外显子有5个突变位点:SNP1(G77A)、SNP2(A91G)、SNP3(G130A)、SNP4(C325T)和SNP5(C331T);在第2外显子中并未发现突变位点;第3外显子有3个突变位点:SNP6(C206T)、SNP7(A235G)和SNP8(C256A);对这8个SNPs与屠宰性状进行关联性分析,结果并未达到显著水平(P>0.05)。本研究结果可丰富MSTN基因的研究数据,为鸭的育种提供参考。

三穗鸭肌肉生长抑制素基因的生物信息学分析

采用PCR产物直接测序的方法获得肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的编码区序列,并运用生物信息学方法对该基因编码蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、二级结构、三级结构和功能结构域进行分析。结果表明,三穗鸭MSTN蛋白是一个疏水性不稳定蛋白,作为信号肽的可能性很大;含有22个α螺旋、26个β折叠、26个T转角、20个无规则卷曲,有1个跨膜结构,具有TGF-β的主要结构。研究结果为MSTN基因的进一步研究提供参考。

藏猪肌肉生长抑制素基因外显子1的PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析了藏猪肌肉生长抑制素(MSTN)基因的单核苷酸多态性。根据GeneBank上猪MSTN基因全序列设计的两对引物,扩增了MSTN基因完整的外显子1,经SSCP分析,只有P1扩增产物存在多态性,表现为3种基因型(AA、AC和CC),A和C两种等位基因的频率分别为46.88%和53.12%。测序分析发现,CC型与AA型相比在MSTN基因编码区的第71bp处有一个A→C的单碱基突变,该突变导致编码的第24位氨基酸由天冬酰胺改变为苏氨酸。